卵巢癌化療相關(guān)的耐藥標(biāo)志物分析

謝美強 張 丹 顏 勁 巫源博（湛江中心人民醫(yī)院 湛江 524000）

卵巢癌是嚴(yán)重影響女性健康的生殖系統(tǒng)惡性腫瘤，研究表明發(fā)病率僅次于乳腺癌和宮頸癌[1]。子宮頸的解剖學(xué)位置在盆腔深部，早期不易發(fā)現(xiàn)，大多數(shù)確診時已經(jīng)處于癌癥晚期，病死率較高。傳統(tǒng)的癌癥治療方案主要是殺傷腫瘤細(xì)胞，同時也會嚴(yán)重影響正常細(xì)胞的活性。紫杉醇類聯(lián)合鉑類藥物的化療方案開始應(yīng)用于腫瘤治療，但是只能起到短期的治療效果，5年生存率未明顯提升[2，3]。患者長期進(jìn)行化療會產(chǎn)生化療耐藥性，嚴(yán)重影響治療效果和預(yù)后?；熌退帣C制十分復(fù)雜，受到多組基因在不同時間和空間的調(diào)控。本研究通過檢測腫瘤相關(guān)蛋白P53、凋亡抑制蛋白livin、谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶-π以及II型DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶等化療耐藥相關(guān)蛋白在卵巢癌上皮組織中的表達(dá)情況，分析上述蛋白對卵巢癌的治療以及預(yù)后的影響。

1 對象和方法

1.1 研究對象：選取2012年1月—2014年1月在我院接受手術(shù)治療以及病理學(xué)檢查確診的80例卵巢癌患者，取腫瘤組織上皮制成標(biāo)本，取材后經(jīng)甲醛浸泡，石蠟包埋，切片備用。納入標(biāo)準(zhǔn)：經(jīng)過病理學(xué)檢測，確診為卵巢癌；臨床資料以及術(shù)后隨訪信息完整；術(shù)前沒有接受放化療以及免疫療法。排除標(biāo)準(zhǔn)：出現(xiàn)其他腫瘤；依從性差。年齡25～75歲，平均年齡（56.21±6.54）歲。根據(jù)《2016年卵巢癌臨床實踐指南》[4]分為：I～I(xiàn)I20 例，III～I(xiàn)V60 例。初次診斷癥狀為腹脹、食欲不振、陰道內(nèi)出血。在我院進(jìn)行腫瘤分期手術(shù)，術(shù)后進(jìn)行鉑類藥物化療。術(shù)后隨訪5年，其中50例停止化療后半年復(fù)發(fā)或者隨訪期內(nèi)一直未見復(fù)發(fā)作為化療敏感組，30例停止化療半年復(fù)發(fā)作為化療耐藥組。兩組一般資料進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析無顯著差異（P＞0.05）。本研究經(jīng)過我院倫理委員會審批，簽署知情協(xié)議。

1.2 檢測方法：采用免疫組化的方法[5]分析化療耐藥相關(guān)蛋白P53、livin、GST-π 以及 Topo II表達(dá)情況。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法：采用SPSS17.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，采用t檢驗；計數(shù)資料以頻率和百分率表示，采用χ2和Fisher確切概率法檢驗。利用Cox回歸模型進(jìn)行多因素分析，P＜0.05表示差異顯著。

2 結(jié)果

2.1 耐藥相關(guān)基因的表達(dá)：化療敏感組P53、linvin、GST-π的陽性表達(dá)率和化療耐藥組相比顯著降低，P＜0.01，但是TopoII的陽性表達(dá)情況顯著高于化療耐藥組，P＜0.05。見表1。

表1 兩組表達(dá)率化療耐藥相關(guān)抗性蛋白的陽性統(tǒng)計比較[n（%）]

2.2 兩組5年生存率分析：采用Log-rank檢驗方法比較兩組5年生存率（56.3%）和化療耐藥組5年生存率（13.6%），具有顯著差異，P＜0.01。見圖 1。

2.3 生存時間的影響因素：將年齡、臨床分期、組織分化和化療程度敏感性作為自變量納入Cox回歸模型分析，將是否死亡作為因變量，分析本研究的耐藥因素對生存時間的影響，結(jié)果顯示臨床分期和化療敏感度是生存時間的影響因素（P＜0.05）。見表2。

表2 納入生存時間影響因素分析

3 討論

發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移是腫瘤發(fā)展的基本過程，該過程是腫瘤和正常組織相互作用的結(jié)果，并且受到許多因素的調(diào)控。當(dāng)前，卵巢癌的主要治療方法是全面分期手術(shù)以及降低腫瘤細(xì)胞，然后輔助以標(biāo)準(zhǔn)化療，合理的手術(shù)加上合理的治療可以達(dá)到良好的短期治療效果[6]。鉑類藥物能夠在卵巢癌術(shù)后早期起到良好的抑制癌細(xì)胞增殖和遷移的作用，但是多數(shù)患者因為癌細(xì)胞的再次遷徙造成長期生存率較低[7]。化療耐藥性對長期生存率起到了重要作用，所以長期以來關(guān)于耐藥靶點的篩選和機制研究成為關(guān)注的熱點，該類研究對化療效果的檢測以及靶向治療和制定個性化治療方案具有重要的參考，從而增加長期生存率。

化療藥物對腫瘤細(xì)胞的殺傷作用機制主要是誘導(dǎo)凋亡，而且這一過程是受到多個基因共同調(diào)控，這些基因的異常表達(dá)會使患者產(chǎn)生化療耐藥性[8]。P53基因是一種細(xì)胞凋亡相關(guān)基因，還參與癌癥的防控以及修復(fù)細(xì)胞基因缺陷，在多數(shù)的惡性腫瘤中P53會發(fā)生突變，進(jìn)一步誘發(fā)癌癥。Livin屬于凋亡抑制蛋白家族，可以抑制細(xì)胞凋亡，參與調(diào)節(jié)細(xì)胞周期和細(xì)胞分裂[9]。本研究發(fā)現(xiàn)P53和livin陽性表達(dá)的患者化療效果要比陰性表達(dá)的顯著降低，5年生存率明顯降低，主要原因可能是卵巢癌患者中表達(dá)的P53，多為突變型，其表達(dá)產(chǎn)物會干擾細(xì)胞周期的調(diào)控，化療藥物失去誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的能力。Livin基因在晚期臨床分期或者是終末期較為常見，研究表明該基因在卵巢癌細(xì)胞的增殖、分化以及遷移過程中起到了重要的調(diào)控作用。另外，GST-π和TopoII等長期刺激腫瘤細(xì)胞會使其產(chǎn)生耐藥性。前者是一種藥物代謝酶，可以參與細(xì)胞內(nèi)有毒物質(zhì)的降解。臨床治療中，設(shè)計的抗癌藥物無法直接和癌細(xì)胞結(jié)合，GST-π可以催化藥物和谷胱甘肽的結(jié)合殺滅癌細(xì)胞。TopoII存在于細(xì)胞核，功能是可以催化調(diào)整DNA結(jié)構(gòu)，實現(xiàn)DNA不同拓?fù)洚悩?gòu)體的轉(zhuǎn)變，調(diào)控基因的重組、轉(zhuǎn)錄以及DNA修復(fù)[10]，其活性的降低可以引起腫瘤細(xì)胞對TopoII抑制劑產(chǎn)生耐藥性。本研究發(fā)現(xiàn)GST-π陽性表達(dá)患者的療效較陰性顯著降低，5年生存率較低。其原因可能是癌細(xì)胞中的GST-π高表達(dá)，抗癌藥物無法和谷胱甘肽結(jié)合進(jìn)入細(xì)胞，從而抑制了對腫瘤細(xì)胞的殺傷作用?？偟膩碚f，P53、livin、GST-π以及Topo II可以作為卵巢癌化療效果以及預(yù)后效果評估的因子。