雪膽的形態(tài)組織學(xué)研究

沈泉

摘要：藥材的有效成分的含量是衡量該藥材質(zhì)量的主要因素，直接決定該藥材的質(zhì)量，本課題的關(guān)鍵問(wèn)題是對(duì)植物藥材雪膽束植物羅鍋底的性狀和內(nèi)部構(gòu)造進(jìn)行觀察研究，只有先從根本上解決了這個(gè)問(wèn)題才能具體的去談中藥的化學(xué)成分以及治病機(jī)理。雪膽（Hemsleya amabilis Diels-Cucurbitaceae）為葫蘆科.雪膽屬植物雪膽的塊根，具有清熱、解毒、消腫、止痛之功效，用于治療各種炎癥，如肝炎、氣管炎、胰腺炎、官頸炎等，通過(guò)對(duì)雪膽屬植物羅鍋底的外部形態(tài)和內(nèi)部的組織構(gòu)造的觀察和研究，可以避免因?yàn)橥獠康男螒B(tài)相似而相互混淆，從而提高用藥的準(zhǔn)確性。并在此基礎(chǔ)上可以保證臨床用藥的安全性。

關(guān)鍵詞：表皮;葉脈;維管束;組織

1 前言

雪膽（Hemsleya sinesis Cogn），為葫蘆科雪膽屬植物的塊根，別名又叫金龜蓮、金盆、羅鍋底。根據(jù)產(chǎn)地的不同，分為廣西雪膽、云南短柄雪膽、峨眉雪膽和彭縣雪膽;根據(jù)果型分為圓果雪膽和長(zhǎng)果雪膽;根據(jù)花型分為小花雪膽、天目雪膽和巨花雪膽。雪膽具有清熱解毒、抗菌消炎、止痛作用 ，廣泛用治療肝炎、菌痢、冠心病、氣管炎、慢性子宮頸炎、帶狀皰疹、腫瘤等。

1.1植物學(xué)形態(tài)特征

雪膽為多年生攀援草本植物，塊莖膨大，扁卵圓形，常半裸露于土面。莖和小枝細(xì)弱，疏被短柔毛和細(xì)剛毛，老時(shí)近無(wú)毛。短須纖細(xì)，疏被短柔毛長(zhǎng)6-10mm，先端兩歧。趾狀復(fù)葉由5-7小葉組成，葉柄被疏柔毛，長(zhǎng)4-5cm;小葉片長(zhǎng)圓披針形至倒卵狀披針形，先端漸尖，基部漸狹，上面深綠色，背面灰綠色，邊緣圓鋸齒狀，兩面沿中脈，側(cè)脈及葉緣密被細(xì)刺毛;中央小葉片長(zhǎng)4-9cm，寬1.6-3cm，兩側(cè)小葉片漸小，外側(cè)的略歪斜，小葉柄長(zhǎng)2-4mm?；ù菩郛愔?。雄花：聚傘總狀花序，花序軸細(xì)瘦，長(zhǎng)1.5-8cm;花萼萼片5，卵形，先端急尖，長(zhǎng)4-5mm，向后反折;花冠橙紅色，盤(pán)狀，徑0.8-1cm，裂片5，長(zhǎng)圓形，長(zhǎng)8mm，寬4mm，先端鈍圓具小突，基部?jī)蓚?cè)具深紫色斑，表面疏被白色長(zhǎng)柔毛，背面光滑;雄蕊5，花絲長(zhǎng)2mm，外彎;雌花：稀疏總狀花序，長(zhǎng)0.5-5cm;花冠通常圓盤(pán)狀稀陀螺狀子房橢圓形或近球形，長(zhǎng)5-7mm，寬4-5mm;花柱3，柱頭2裂。果實(shí)卵圓形或者寬卵形，徑3.5-4cm，上有10條縱紋，密生細(xì)瘤突，花柱基高4-6mm，每室具種子3-5;具略歪斜的柄;種子卵圓形，暗黑色，長(zhǎng)9-11mm，寬8-9mm，周生木栓質(zhì)狹翅，上端寬1-1.5mm，具不規(guī)則的褶皺，下端更狹;種子卵圓形，腫脹，邊緣密布乳頭狀突起，中間部分較疏，背面較平滑?；ㄆ?-9月，果期9-11月。

1.2 化學(xué)成分

雪膽屬植物大多富含雪膽皂苷和雪膽素（雪膽甲素與雪膽乙素的混晶）。雪膽甲素為23，24-雙氫葫蘆素 F-25-乙酸酯 （23，24-dihydroxyeucurbitacin F-25-acetate），雪膽乙素是 23，24-雙氫葫蘆素F（23，24-dihydroxycucurbitacin F）。二十年來(lái)，人們已經(jīng)從不同雪膽種中分離出不同的化合物，并且不斷發(fā)現(xiàn)該屬甚至自然界中新的化合物。雪膽塊根中主要含雪膽甲素（含量高達(dá)6.0l8 mg/g）[1]、雪膽乙素;還含有雪膽皂苷 Ma1、雪膽皂G1、雪膽皂H1、竹節(jié)參苷IVa[2] 、竹節(jié)參苷V、雪膽皂苷Ma3、齊墩果酸-28-O—-β-D-葡萄糖脂苷和齊墩果酸[3];也含有葫蘆素 F-25-乙酸酯 、β-谷甾醇、胡蘿卜苷 、β-谷甾醇-3-O-（6-軟脂酰基 ）β-D-葡萄糖苷、軟脂酸、十八碳烷醇 、十六碳烷醇[4]、齊墩果酸-3-0-α-吡喃阿拉伯糖（1-3）- β-葡萄糖醛酸、28-0-β-D-吡喃葡萄糖齊墩果酸 3-0-【β-D-吡喃葡萄糖-（1-2）】-[α-吡喃阿拉伯糖-（1-3）]-β-D-葡萄糖醛酸[5]，雪膽雙糖[6];以及含有21種微量元素[7]。

1.3藥理作用

70年代對(duì)雪膽屬植物研究表明，該屬植物富含葫蘆素類(lèi)成分 .具有保肝、抗癌作用。有人對(duì)雪膽根脂溶性部分和水溶性部分分別進(jìn)行了抗腫瘤活性篩選，發(fā)現(xiàn)其脂溶性成分具抗腫瘤活性，而水溶性部分則無(wú)活性。作者從四川峨眉產(chǎn)中華雪膽中分離得6個(gè)化合物。其中兩個(gè)顯示抗癌活性。化合物Ⅰ齊墩果酸 -28-O-D-吡喃-葡萄糖甙，且化合物Ⅰ對(duì)U937與HL-6O抑制作用為首次報(bào)道?；衔铫鬄檠┠懠姿?，體內(nèi)試驗(yàn)對(duì)P388亦顯示抗腫瘤活性。

1.3.1 抗腫瘤作用

雪膽根醇浸膏經(jīng)乙酸乙酯萃取后，進(jìn)行反復(fù)低壓柱層析、氯仿與甲醇不同比例洗脫 ，所得化合物I（齊墩果酸 一28—0—β一D一吡喃萄糖苷）和化合物Ⅲ （雪膽甲素），均具 有抗腫瘤活性。采用錐蟲(chóng)藍(lán)排染法，于96孔板中每孔加1.2 X 10 個(gè)/mL的腫瘤懸浮

細(xì)胞 ，再加入不同濃度的化合物I，作用72 h后，用錐蟲(chóng)藍(lán)計(jì)數(shù)活細(xì)胞數(shù)，計(jì)算抑制率 ，結(jié)果表明化合物I的抗癌活性為 ：HL-60，U937，K562的1C50分別為 0.42，0.25，13.O0 ug/mL。對(duì) P388白血病小鼠給予化合物Ⅲ（分別給藥18.75，9.38 mg/kg，腹腔注射，

共用7d），另設(shè)生理鹽水（25 mL/kg）對(duì)照組和環(huán)磷酰胺對(duì)照組（100mg/kg，腹腔注射，共 用7d），觀察動(dòng)物存活天數(shù)，結(jié)果表明化合物ⅢP388白血病小鼠的生命有延長(zhǎng)作用[8]。

1.3.2 對(duì)心肌缺氧有一定的保護(hù)作用

在用腎上腺素加重心臟負(fù)擔(dān)，增加心肌耗氧量的低壓缺氧實(shí)驗(yàn)中，腎上腺素組（1 mg/kg，皮下注射）平均生存時(shí)間比對(duì)照組（等 容積的吐溫 -8O溶 液 ）減少47.5%（P浸出物（0.3g/kg，腹腔注射）/加腎上腺素組平均生存時(shí)間比腎上腺素組延長(zhǎng)64.8% （P0.05）。說(shuō)明上腺素可減弱小鼠的耐缺氧能力，給腎腺素增加心肌耗氧量的基礎(chǔ)上，雪膽醇浸出物使小鼠的耐缺氧能力恢復(fù)到給腎上腺素前的水平，因而表明雪膽對(duì)心肌缺氧有一定的保護(hù)作用[9]。

1.3.3 具有廣譜抗菌作用

根據(jù)體外抗菌試驗(yàn)，從雪膽醇浸出物中提取的雪膽皂苷和雪膽苦味素對(duì)溶血性鏈球菌 、金黃色葡萄球菌、福氏痢疾桿菌、大腸桿菌、傷寒桿菌等都有不同程度的抗菌作用，較同濃度的氯霉素強(qiáng)[10]。

1.3.4 對(duì)肝臟的作用

雪膽中的葫蘆素成分對(duì)肝臟有保護(hù)作用，齊墩果酸有治療肝炎的作用[11]。

1.3.5 對(duì)胃腸疾病的作用

雪膽制劑胃腸丹是治療胃潰瘍、十二指腸潰瘍、慢性胃炎、腸炎、胃腸功能紊亂的一種安全有效的藥物[12]。

2 試驗(yàn)材料和方法

2.1 試驗(yàn)材料：農(nóng)大后山中草藥栽培實(shí)驗(yàn)基地種植的羅鍋底全植株

2.2 試驗(yàn)方法：

2.2.1 試劑的配制：

1.番紅的配制方法：1克番紅+100毫升水→番紅溶液，貯存于棕色瓶。導(dǎo)管+番紅→紅色? 木質(zhì)部+番紅→紅色

2.固綠的配制方法：0.1克固綠+100毫升95%酒精→番紅溶液。凱氏帶+固綠→綠色? 韌皮部+固綠→綠色篩管+固綠→藍(lán)綠色? ? 皮層+固綠→綠色

3.碘液的配制方法：1克純碘+2克碘化鉀+300毫升水→稀碘液（先加碘化鉀完全溶解再加入碘溶解，然后用水稀釋到300毫升），貯存于棕色瓶中如變成黃色就不能使用。

4.間苯三酚的配制方法：稱(chēng)取5克的間苯三酚+100毫升95%酒精→間苯三酚溶液（間苯三酚的使用方法：先用鹽酸將切片浸透，再吸去多余的鹽酸，在滴加一滴的間苯三酚。）木質(zhì)花細(xì)胞壁→應(yīng)紅或者紫紅

5.水和氯醛的配制方法：5克水合氯醛溶解到蒸餾水中，然后稀釋到一百倍。既得5%的水合氯醛溶液

6.蘇丹Ⅲ的配制：0.1克的蘇丹Ⅲ+95%酒精20毫升。木栓化組織+蘇丹Ⅲ→橙紅色

角質(zhì)化組織+蘇丹Ⅲ→橙紅

3 結(jié)果與分析

葉片下表皮是由一層長(zhǎng)方形的細(xì)胞組成，細(xì)胞排列整齊緊密，無(wú)細(xì)胞間隙/不定式的氣孔分布很多，數(shù)目不定，大小基本相同，副衛(wèi)細(xì)胞數(shù)目不定，被有線狀毛，上表皮細(xì)胞也由一層細(xì)胞組成，但無(wú)氣孔的分布。

葉柄橫切面呈半圓形， 向莖一面稍微凹下，表皮由一層細(xì)胞組成，細(xì)胞排列緊密，無(wú)細(xì)胞間隙，維管柱發(fā)達(dá)，里面分布有7個(gè)維管束，雙韌維管束。韌皮部位于上方（腹面），韌皮部位于下方（背面），在向莖面凹槽處表皮細(xì)胞明顯增大，并出現(xiàn)明顯的角質(zhì)化，形成角質(zhì)層。在凹槽的上面頂角角隅處和柄背面的端分化出厚角組織，此處的細(xì)胞排列疏松，有細(xì)胞間隙，皮層中有大量的葉綠體的分布。

葉片

上下表皮由一層長(zhǎng)方形的細(xì)胞組成，下表皮細(xì)胞較上表皮細(xì)胞明顯變小，細(xì)胞排列緊密，無(wú) 細(xì)胞間隙，下表皮之下有一層由立體的長(zhǎng)方形細(xì)胞組成的柵欄組織，此處細(xì)胞較大，呈豎向排列，緊密，沒(méi)有細(xì)胞間隙，在下表皮和柵欄組織之間有5層薄壁細(xì)胞組成的海綿組織，此處細(xì)胞分布散亂，不整齊，具有明顯的細(xì)胞間隙，維管束只有一個(gè)，雙韌維管束

葉脈

主脈向上，下凸起。木部位于向莖面，韌皮部位于背莖面，在葉脈的背面角隅處，表皮組織下具有明顯的厚角組織的分化，雙韌型維管束，維管束呈半圓形，半圓形的韌皮部包圍著半圓形的木質(zhì)部，在向莖面的凹槽處表皮細(xì)胞的細(xì)胞壁出現(xiàn)特化。在皮層中葉脈與葉肉組織的交接處，有兩束纖維束，木質(zhì)部和皮層中都散有晶體。

莖

表皮由一層長(zhǎng)方形的 細(xì)胞組成，細(xì)胞排列整齊緊密，無(wú)細(xì)胞間隙。，有多細(xì)胞的線狀毛的分布，在表皮底下皮層外方具有明顯的厚角組織，成環(huán)分布，此處細(xì)胞個(gè)體較小，皮層中有明顯的葉綠體的分布。此處細(xì)胞明顯的增大，皮層由2-5層細(xì)胞組成，內(nèi)皮層凱氏帶的分化，在皮層中靠近內(nèi)皮層有一個(gè)纖維帶的分化，維管柱發(fā)達(dá)，散有9個(gè)維管束，5個(gè)外圍維管束分布在5個(gè)棱角處，內(nèi)圍維管束有四個(gè)，其中外圍維管束和內(nèi)圍維管束交錯(cuò)排列，其中兩個(gè)維管束較大，雙韌型維管束，髓薄壁細(xì)胞內(nèi)含有淀粉粒，孔紋導(dǎo)管在5個(gè)棱角處的維管束中分布較多。由2-3個(gè)大的孔紋導(dǎo)管和若干 個(gè)小的導(dǎo)管組成，而散布在中間的四個(gè)維管束則由一個(gè)很大的和小的孔紋導(dǎo)管組成（可見(jiàn)）。在5個(gè)棱角的內(nèi)方，角隅處厚角組織加厚明顯，髓發(fā)達(dá)，有大型的薄壁細(xì)胞組成，在柱中（或者說(shuō)束間）有一纖維束分布，束間距離較寬，有束間束中形成層。在棱角處可見(jiàn)有角質(zhì)化的細(xì)胞！莖上偶見(jiàn)皮孔。

花

花—單性;雄蕊5枚，兩量結(jié)合，1枚分離;下位子房?；ù菩郛愔?。雄花：聚傘總狀花序，花序軸細(xì)瘦，長(zhǎng)1.5—8cm;花萼萼片5，卵形，先端急尖，長(zhǎng)4-5mm，向后反折;花冠橙紅色，盤(pán)狀，徑0.8-1cm，裂片5，長(zhǎng)圓形，長(zhǎng)8mm，寬4mm，先端鈍圓具小突，基部?jī)蓚?cè)具深紫色斑，表面疏被白色長(zhǎng)柔毛，背面光滑;雄蕊5，花絲長(zhǎng)2mm，外彎;雌花：稀疏總狀花序，長(zhǎng)0.5-5cm;花冠通常圓盤(pán)狀稀陀螺狀子房橢圓形或近球形，長(zhǎng)5-7mm，寬4-5mm;花柱3，柱頭2裂。

果

果實(shí)-瓠果。果實(shí)卵圓形或者寬卵形，徑3.5-4cm，上有10條縱紋，密生細(xì)瘤突，花柱基高4-6mm，每室具種子3-5;具略歪斜的柄;種子卵圓形，暗黑色，長(zhǎng)9-11mm，寬8-9mm，周生木栓質(zhì)狹翅，上端寬1-1.5mm，具不規(guī)則的褶皺，下端更狹;種子卵圓形，腫脹，邊緣密布乳頭狀突起，中間部分較疏，背面較平滑。

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