張政權(quán),黃冬梅,楊光昕,韓 峰,田良良,伍 姿
(1.上海海洋大學(xué) 食品學(xué)院,上海 201306;2.中國水產(chǎn)科學(xué)研究院 東海水產(chǎn)研究所 農(nóng)業(yè)部遠(yuǎn)洋與極地漁業(yè)創(chuàng)新重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,上海 200090)
中華絨螯蟹俗稱河蟹、大閘蟹,主要分布在亞洲北部和我國的東部沿海省份[1],中華絨螯蟹肉質(zhì)鮮嫩,營養(yǎng)豐富,深受國內(nèi)消費(fèi)者的喜愛[2]。隨著中華絨螯蟹需求量的迅速增加,我國的東南沿海省份開始大規(guī)模人工養(yǎng)殖,2017年我國的中華絨螯蟹產(chǎn)量達(dá)到了812 103 t[3],基本上能夠滿足廣大消費(fèi)者的需求,但優(yōu)質(zhì)蟹的數(shù)量還遠(yuǎn)遠(yuǎn)不足。
目前針對(duì)中華絨螯蟹的研究主要集中在其脂肪酸及其風(fēng)味物質(zhì)組成方面[3-5],對(duì)其礦物元素方面的研究較少,中華絨螯蟹的風(fēng)味主要由其體內(nèi)的醇類、酮類、呋喃類、含氮類和芳香類物質(zhì)決定[6],而礦物元素則直接參與中華絨螯蟹體內(nèi)復(fù)雜的生化反應(yīng),對(duì)中華絨螯蟹的肉質(zhì)起到重要的調(diào)節(jié)作用。中華絨螯蟹體內(nèi)的元素種類較多,根據(jù)占其體重的比率不同可分為常量元素和微量元素。蟹肉四大常量元素為鉀、鈣、鈉、鎂,其中含量最多的元素是鉀和鈉,兩者在蟹肉干重中質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為12 580,7 845 mg·kg-1,鉀和鈉是維持生物體細(xì)胞內(nèi)外滲透壓平衡的主要元素,在肌肉組織中廣泛存在[7],在肌肉組織中含量最高;鈣是構(gòu)成生物體骨骼和外殼的主要元素,在肌肉組織中含量相對(duì)較少;鎂在肌肉組織中的含量僅次于鉀、鈉、鈣,是生物體內(nèi)第四大金屬元素,在細(xì)胞內(nèi)主要參與鉀和鈉離子的轉(zhuǎn)運(yùn),另外還對(duì)細(xì)胞的增殖和分化有重要的調(diào)控作用。鐵、錳、鋅、銅是生物體內(nèi)的微量元素,在蟹肉組織中含量較少,但卻是生物體維持正常的生命活動(dòng)必不可少的元素[8],生物體內(nèi)微量元素的含量一定程度上反應(yīng)了生物體的營養(yǎng)健康狀況。生物體內(nèi)這些元素的含量分析可以為其正常的生長發(fā)育提供良好的科學(xué)指南。
本工作通過微波消解-連續(xù)光源火焰原子吸收光譜法測定了中華絨螯蟹的腹部和腿部肌肉中鉀、鈣、鈉、鎂、錳、鋅、銅、鐵等8種金屬元素的含量,以期能為中華絨螯蟹養(yǎng)殖條件的優(yōu)化和品質(zhì)的鑒定提供技術(shù)參考。
Contr AA-700型原子吸收光譜儀;Milli-Q ELEMENT 型超純水機(jī);FreeZone 型真空冷凍干燥機(jī);JA5000C型精密電子天平;ETHOS 1型微波消解儀;HP-H35SC型電加熱板。
鉀、鈣、鈉、鎂、錳、鋅、銅、鐵元素單標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液:100 mg·L-1,介質(zhì)為1%(體積分?jǐn)?shù),下同)硝酸溶液。
鉀、鈣、鈉、鎂、錳、鋅、銅、鐵元素標(biāo)準(zhǔn)溶液系列:取適量的8種金屬元素單標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液,用1%硝酸溶液配制成0.1,0.2,0.4,0.8,1.0 mg·L-1的鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液系列、1.0,2.0,3.0,4.0,5.0 mg·L-1的鈣標(biāo)準(zhǔn)溶液系列、0.03,0.06,0.1,0.2,0.3 mg·L-1的鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液系列、0.05,0.1,0.2,0.4,0.5 mg·L-1的鎂標(biāo)準(zhǔn)溶液系列、0.3,0.6,1.0,2.0,3.0 mg·L-1的錳標(biāo)準(zhǔn)溶液系列、0.2,0.4,0.8,1.0,1.5 mg·L-1的鋅標(biāo)準(zhǔn)溶液系列、0.5,1.0,2.0,3.0,4.0 mg·L-1的銅標(biāo)準(zhǔn)溶液系列、1.0,2.0,4.0,6.0,8.0 mg·L-1的鐵標(biāo)準(zhǔn)溶液系列。
鉀、鈣、鈉、鎂、錳、鋅、銅、鐵元素單標(biāo)準(zhǔn)溶液:1.0 g·L-1。
硝酸、過氧化氫為分析純;試驗(yàn)用水為超純水。
原子吸收光譜儀工作條件見表1。微波消解條件見表2。
表1 儀器工作條件Tab.1 Instrumental working conditions
表2 微波消解條件Tab.2 Microwave digestion conditions
2018年11月份于興化養(yǎng)殖塘采集中華絨螯蟹12只,質(zhì)量為72~149 g,取其腹部及腿部肌肉,用超純水沖洗后放入-50 ℃冰箱冷凍12 h,隨后放入真空冷凍干燥機(jī)中干燥24 h,干燥后的樣品研磨均勻放入干燥器中保存。稱取0.5 g干燥后的樣品于消解罐中,加入5 mL硝酸和1 mL過氧化氫后進(jìn)行酸解并放置過夜,酸解后,將樣品放入微波消解儀中,按表2的消解條件進(jìn)行消解,消解結(jié)束后將消解罐放在加熱板上趕酸,待消解罐中的液體至澄清透明后取出冷卻至室溫,加入適量水稀釋,用水定容至25 mL(測定鈣時(shí),用5 g·L-1硝酸鑭溶液稀釋定容),在儀器工作條件下測定。
目前關(guān)于食品消解方法的研究很多[9-14],主要分為干法灰化和濕法消解等2種方式。干法灰化法雖然避免了試劑的使用,但灰化過程中溫度較高,有可能造成待測元素的損失,且消解所用坩堝可能造成待測元素的吸附;另外鉀、鈣、鈉、鎂等4種常量元素在實(shí)驗(yàn)室中無處不在,長時(shí)間暴露在開放環(huán)境中極可能造成樣品污染,從而對(duì)這4種元素的測定結(jié)果產(chǎn)生影響。綜合考慮,試驗(yàn)選擇酸消解加以微波密閉輔助加熱的方法對(duì)樣品進(jìn)行前處理。
消解酸體系主要有高氯酸-硝酸體系、硝酸體系等,硝酸是唯一一種可以單獨(dú)使用的消解用氧化性酸[15],硝酸體系在消解含脂肪較少的生物樣品時(shí)相對(duì)比較溫和、緩慢、安全。試驗(yàn)所用樣品為脂肪含量較少的蟹肉干粉,試驗(yàn)發(fā)現(xiàn),用5 mL 硝酸-1 mL 過氧化氫體系酸解樣品并放置過夜,即可達(dá)到將樣品完全酸解的目的,酸解后的樣品幾乎完全溶于酸解體系中,其中過氧化氫在酸解過程中起催化作用。消解完成后,金屬元素均以易溶于水的硝酸鹽形式存在于溶液中,由于消解過程在密閉容器中進(jìn)行,樣品與外界隔絕從而避免了樣品被污染,且微波消解只需要提前設(shè)置好消解條件即可自行完成消解過程,實(shí)現(xiàn)了整個(gè)消解過程的自動(dòng)化[16]。
在選擇待測元素吸收波長時(shí),應(yīng)盡量選擇靈敏度最高的譜線,且保證各元素特征譜線之間沒有干擾??赏ㄟ^調(diào)節(jié)燃燒頭的高度來調(diào)節(jié)光束通過火焰時(shí)的溫度,對(duì)于易電離的元素,光束通過火焰溫度較低的位置能一定程度上減弱電離效果;而對(duì)于難電離的元素,光束通過火焰溫度最高的位置能增強(qiáng)電離效果。
增加光譜帶寬可以一定程度上增強(qiáng)儀器的穩(wěn)定性、提高測定結(jié)果的精密度,但如果待測元素譜線附近有其他譜線存在時(shí),則會(huì)產(chǎn)生光譜干擾,使測定結(jié)果的靈敏度降低,標(biāo)準(zhǔn)曲線線性變差,所以,在保證測試靈敏度的前提下,應(yīng)選擇較寬的光譜通帶,儀器工作條件見1.2節(jié)。
在測定鈣元素時(shí),樣品溶液中PO43-會(huì)與其形成難原子化的化合物,從而影響鈣元素的測定,而鑭鹽可起到釋放劑的作用[17],消除PO43-的干擾。試驗(yàn)考察了不加硝酸鑭和添加3個(gè)濃度水平的硝酸鑭溶液時(shí)對(duì)樣品溶液中鈣元素吸光度的影響,結(jié)果見圖1。
圖1 鈣元素吸光度隨硝酸鑭溶液質(zhì)量濃度的變化Fig.1 Changes of calcium absorbance with mass concentrations of lanthanum nitrate solution
由圖1可以看出:當(dāng)硝酸鑭溶液的質(zhì)量濃度為5 g·L-1時(shí),鈣元素的吸光度最高;增加或降低硝酸鑭溶液的質(zhì)量濃度,吸光度均呈下降趨勢,這與文獻(xiàn)[18]結(jié)果一致。試驗(yàn)選擇5 g·L-1的硝酸鑭溶液稀釋樣品溶液。
在測定鉀、鈉時(shí)容易發(fā)生電離效應(yīng),一般選擇在樣品溶液中加入銫鹽抑制其電離。試驗(yàn)考察了5 g·L-1氯化銫和不加氯化銫對(duì)樣品溶液中鉀、鈉吸光度的影響,結(jié)果發(fā)現(xiàn),兩種情況下鉀、鈉吸光度幾乎沒有差異,推斷原因主要有2種:①銫是通過自身的電離抑制鉀、鈉的電離,而試驗(yàn)樣品中元素種類復(fù)雜,在一定程度上能抑制鉀、鈉的電離;②試驗(yàn)樣品中的鉀、鈉元素含量很高,發(fā)生電離的元素只占其中很少一部分,對(duì)測定結(jié)果的影響可以忽略不計(jì)。
由于試驗(yàn)測定的8種金屬元素在樣品中的含量差別較大,要使原子吸收光譜儀能夠同時(shí)測定這8種元素,除了需要對(duì)樣品定容體積進(jìn)行調(diào)整,還需要對(duì)各元素的標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍進(jìn)行優(yōu)化,使樣品和標(biāo)準(zhǔn)曲線的吸光度都位于原子吸收光譜儀的線性范圍內(nèi),各元素標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍、線性回歸方程和相關(guān)系數(shù)見表3。
表3 線性參數(shù)Tab.3 Linearity parameters
按照試劑空白吸光度的3倍標(biāo)準(zhǔn)偏差比標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率計(jì)算檢出限,鉀、鈣、鈉、鎂、錳、鋅、鐵、銅的檢出限(3s/k)分別為118,18.5,101.4,89.0,0.06,0.68,0.44,0.096 mg·kg-1,均低于國家標(biāo)準(zhǔn)GB/T 13885-2017《飼料中鈣、銅、鐵、鎂、錳、鉀、鈉和鋅含量的測定 原子吸收光譜法》的規(guī)定。
在向空白樣品中添加已知含量的標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行加標(biāo)回收試驗(yàn),每種元素設(shè)置3個(gè)加標(biāo)平行樣,每個(gè)加標(biāo)平行樣重復(fù)測試3次,計(jì)算回收率和測定值的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD),結(jié)果見表4。
表4 精密度和回收試驗(yàn)結(jié)果(n=9)Tab.4 Results of tests for precision and recovery(n=9)
由表4 可知:8 種金屬元素的回收率為96.0%~107%,滿足實(shí)驗(yàn)室檢測要求。RSD 為1.1%~5.4%,說明該方法的精密度較高,測量結(jié)果穩(wěn)定,單次測定結(jié)果真實(shí)可靠。
按照試驗(yàn)方法對(duì)樣品進(jìn)行測定,鉀、鈣、鈉、鎂、鋅、錳、銅、鐵的質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為12 580,2 196,7 845,1 536,190,10.42,87.0,31.25 mg·kg-1。
本工作采用微波消解-連續(xù)光源火焰原子吸收光譜法測定了中華絨螯蟹腹部和腿部肌肉中的鉀、鈣、鈉、鎂、鋅、錳、銅、鐵等8種金屬元素含量,該方法的準(zhǔn)確度高,回收率好,且該方法的前處理過程簡單,原子吸收光譜采用的連續(xù)光源可同時(shí)測定多種元素;相較于傳統(tǒng)的單元素?zé)羰∪チ藫Q燈步驟,節(jié)省了測定時(shí)間,并且比傳統(tǒng)的原子吸收光譜儀的靈敏度高,檢出限低;比電感耦合等離子體質(zhì)譜儀測量成本更低,是一種非常經(jīng)濟(jì)高效且可以多元素同時(shí)測定的方法。