高效液相色譜法測定環(huán)孢素膠囊以及軟膠囊的溶出度分析

楊春根

（鎮(zhèn)江市第一人民醫(yī)院藥劑科 江蘇 鎮(zhèn)江 212000）

環(huán)孢素是一種免疫抑制藥，廣泛用于器官移植排斥反應(yīng)的抑制及治療各種自身免疫性疾病[1]。環(huán)孢素是分子量較大的多肽，含有11 個氨基酸，具有親水性差的特點。本文通過高效液相色譜法檢測2 種環(huán)孢素膠囊以及3 種環(huán)孢素軟膠囊的溶出度，報告如下。

1.儀器與試藥

1.1 儀器

美國LOGAN 通用型12 位溶出度儀 UDT-812A-12，華溶儀器DS-808 溶出儀，德國sykam(賽卡姆)高效液相色譜儀HPLC 系統(tǒng)S-501。

1.2 試藥

樣品：選取2 種環(huán)孢素膠囊和3 種環(huán)孢素軟膠囊樣品進(jìn)行檢測，其中2 種環(huán)孢素膠囊為樣品F（規(guī)格25mg）、G（規(guī)格100mg），3 個環(huán)孢素軟膠囊為樣品A（規(guī)格10mg）、樣品B（規(guī)格25mg）、樣品C（規(guī)格100mg）。環(huán)孢素對照品：含量98.8%；雜質(zhì)對照品：環(huán)孢素B、C、G、H 和異環(huán)孢素A、H。試劑：四氫呋喃、超純水、鹽酸、磷酸、氯化鈉、胃蛋白酶、十二烷基硫酸鈉、N-二甲基十二烷基胺-N-氧化物、30%N。

2.方法與結(jié)果

2.1 方法

2.1.1 色譜條件 充填劑250mm×4.6mm，5μm。熱交換器：直徑0.25mm，長100cm；不銹鋼管，溫度75℃。流動相：四氫呋喃0.05mol/L 磷酸溶液。進(jìn)樣量10μL，測定波長度220nm。

2.1.2 環(huán)孢素膠囊測定 溶出介質(zhì)：鹽酸濃度為0.1mol/L的溶液1000ml（含1%十二烷基硫酸鈉）。以100r/min 速度轉(zhuǎn)1h，濾過，制成供試品溶液，測定溶出量。

2.1.3 環(huán)孢素軟膠囊測定 溶出介質(zhì)：水+3.2g 胃蛋白酶+2g 氯化鈉+7ml 鹽酸+30%N+6.9ml N-二甲基十二烷基胺-N-氧化物，總?cè)萘繛?000ml。以75r/min 速度轉(zhuǎn)1h，取適量過濾。取環(huán)孢素對照品+溶出介質(zhì)制成對照品溶液。取對照品溶液10μL、供試品溶液10μL 測定溶出量。

2.2 系統(tǒng)適用性實驗

環(huán)孢素對照品取100mg，環(huán)孢素B、C、G、H 和異環(huán)孢素A、H 分別取3mg，添加四氫呋喃-水（80：20）溶液制成50ml 混合液，制成系統(tǒng)適用性溶液,線性范圍0.35-202.76μg/ml，相關(guān)系數(shù)0.9998-1.0000。

2.2.1 精密度、穩(wěn)定性、回收率試驗 使用對照品溶液連續(xù)進(jìn)樣10μL×6 次，平均含量96.82%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差≤0.1%，表明精密符合要求。取樣品F 制成供試品溶液，分別測定每間隔2h 測定一次，共測定5 次，環(huán)孢素相對標(biāo)準(zhǔn)偏差≤0.1%，表明穩(wěn)定性符合要求。取環(huán)孢素對照品50mg 共9 份，加四氫呋喃-水（80：20）分別制成濃度80%、100%、120%的溶液各3 份，總計9 份，色譜條件下分析計算回收率；回收率結(jié)果見表1。

表1 回收率試驗結(jié)果

2.2.2 環(huán)孢素膠囊溶出試驗 溶出介質(zhì)：（1）水1000ml；（2）0.1mol/L 鹽酸1000ml；（3）磷酸緩沖液（pH6.0）1000ml；（4）0.1mol/L 鹽酸+0.5%十二烷基硫酸鈉1000ml；（5）0.1mol/L 鹽酸+1%十二烷基硫酸鈉1000ml。取樣品F、G，分別在每種介質(zhì)中加6 粒，以100r/min 速度轉(zhuǎn)，分別于5min、15min、30min、45min、60min、75min 取樣，共取樣6 次,計算平均溶出度。見表2。

2.2.3 環(huán)孢素軟素膠囊溶出試驗 溶出介質(zhì)：（1）水1000ml；（2）0.1mol/L 鹽酸1000ml；（3）采用2.3 中的擬溶出介質(zhì)1000ml。取樣品A、B、C，分別在每種介質(zhì)中加6 粒，以750r/min 速度轉(zhuǎn)，分別于5min、15min、30min、45min、60min、75min 取樣，共取樣6 次,計算平均溶出度。見表3。

2.4 溶出度測定結(jié)果

環(huán)孢素膠囊和軟膠囊溶出度見表2。環(huán)孢素膠囊中樣品F、樣品G 的采用0.1mol/鹽酸（含1%十二烷基硫酸鈉）為溶質(zhì)時，轉(zhuǎn)速100r/min，轉(zhuǎn)時1h，溶出度＞100%，環(huán)孢素軟膠囊樣品A、樣品B、樣品C 以擬胃液為溶出度時，轉(zhuǎn)速75r/min，轉(zhuǎn)時1h，溶出度＞100%。

3.討論

國家藥品標(biāo)準(zhǔn)對環(huán)孢素膠囊制定的標(biāo)準(zhǔn)是以水為溶出介質(zhì)，以100r/min 轉(zhuǎn)時45min，限度70%；美國對環(huán)孢素膠囊制定的標(biāo)準(zhǔn)是以0.1mol/L 鹽酸（含0.5%十二烷基硫酸鈉）為溶出介質(zhì)，以150r/min 轉(zhuǎn)時1.5h，限度80%[2]。本研究中，以水為溶出介質(zhì)時，環(huán)孢素膠囊轉(zhuǎn)速100r/min，轉(zhuǎn)時1h 無法完全溶出；環(huán)孢素軟膠囊轉(zhuǎn)速75r/min，轉(zhuǎn)時1h 無法完全溶出。本研究結(jié)果顯示環(huán)孢素膠囊中樣品F、樣品G 的采用0.1mol/鹽酸（含1%十二烷基硫酸鈉）為溶質(zhì)時，轉(zhuǎn)速100r/min，轉(zhuǎn)時1h，溶出度＞100%，環(huán)孢素軟膠囊樣品A、樣品B、樣品C 以擬胃液為溶出度時，轉(zhuǎn)速75r/min，轉(zhuǎn)時1h，溶出度＞100%。表明，環(huán)孢素膠囊及軟膠囊溶出度采用高效液相色譜法測定是可行的。

表2 環(huán)孢素膠囊的溶出度測定結(jié)果

表3 環(huán)孢素軟膠囊的溶出度測定結(jié)果

綜上所述，采用高效液相色譜法測定環(huán)孢素膠囊以及軟膠囊溶出度是可行的，其中環(huán)孢素膠囊檢測以0.1mol/鹽酸（含1%十二烷基硫酸鈉）為溶出介質(zhì)可完全溶出，環(huán)孢素軟膠囊適宜檢測采用擬胃液為溶出介質(zhì)可完全溶出。