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    EN2及β-catenin在卵巢癌組織中的表達(dá)及臨床意義

    2020-07-02 06:58:56王春蓮趙麗榮王箴言戴紅英
    醫(yī)學(xué)研究雜志 2020年5期
    關(guān)鍵詞:卵巢癌免疫組化分化

    宋 晨 王春蓮 趙麗榮 王箴言 戴紅英

    卵巢癌發(fā)生率較高,是全球范圍內(nèi)最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一,癌癥致死率位居第8位[1]。每年約有24萬(wàn)女性被診斷患有卵巢癌,5年生存率約為45%,嚴(yán)重威脅女性生命健康[2,3]。Engrailed-2(EN2)基因是同源異型盒基因家族的成員之一,在胚胎和神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育中起著重要的作用[4]。既往研究表明,EN2基因在多種類(lèi)型的惡性腫瘤中均有高表達(dá),包括前列腺癌、乳腺癌、膀胱癌及卵巢癌[5~8]。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn),EN2可作為Wnt信號(hào)通路的關(guān)鍵性信號(hào)之一,參與調(diào)控細(xì)胞分化,并能通過(guò)調(diào)控Wnt信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中β-連環(huán)蛋白(β-catenin)調(diào)控細(xì)胞增殖[9]。本研究通過(guò)免疫組化法檢測(cè)了EN2、β-catenin在卵巢癌、交界性腫瘤、良性腫瘤及正常卵巢組織中的表達(dá),旨在探究EN2、β-catenin蛋白在卵巢癌組織中的表達(dá)水平及其與患者臨床病理學(xué)的相關(guān)性。

    資料與方法

    1.研究對(duì)象:收集筆者醫(yī)院2012年1月~2013年12月收治的卵巢腫瘤患者的病例資料共110例,其中卵巢癌60例,交界性腫瘤28例,良性腫瘤22例,患者年齡45~70歲,平均年齡50.5歲。所有患者均為首發(fā)病例,在術(shù)前均未接受過(guò)化療或放療,術(shù)后均經(jīng)病理檢查進(jìn)一步診斷確診,且所有患者病歷資料完整。此外,收集同期因子宮良性病變行卵巢切除術(shù)的20例正常卵巢組織作為對(duì)照組。臨床病理分期按照國(guó)際婦產(chǎn)科協(xié)會(huì)(International Federation Of Gynecology And Obstetrics, FIGO)2009年分期標(biāo)準(zhǔn),卵巢癌臨床早期Ⅰ~Ⅱ期20例,Ⅲ~Ⅳ期40例;分化程度:高分化(G1)17例、中分化(G2)12例,低分化(G3)31例;發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移17例,無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者43例;漿液性腺癌43例,黏液性腺癌17例。正常對(duì)照組年齡45~68歲,平均年齡52.4歲。

    2.免疫組化法檢測(cè):對(duì)所有病理組織進(jìn)行石蠟包埋,將所有石蠟包埋后的病理組織進(jìn)行連續(xù)切片,切片厚度4μm,展開(kāi)切片后在玻片上進(jìn)行貼片,脫蠟修復(fù)后,滴加一抗后室溫孵育1~2h,洗滌后滴加二抗,室溫孵育15~20min,洗滌后DAB顯色5min,蘇木精復(fù)染細(xì)胞核30s,脫水后封片。

    3.結(jié)果判定:以細(xì)胞質(zhì)出現(xiàn)淡黃色至棕黃色或棕褐色為細(xì)胞染色陽(yáng)性,綜合陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)及染色強(qiáng)度判斷,0~4分為EN2或β-catenin染色陰性,5~12分為EN2或β-catenin染色陽(yáng)性,以陰性表達(dá)為低表達(dá),陽(yáng)性表達(dá)為高表達(dá)。低倍鏡下觀察整張切片,高倍鏡下隨機(jī)選取5個(gè)視野計(jì)數(shù)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)。所有染色結(jié)果均由兩名經(jīng)驗(yàn)豐富的病理科醫(yī)生采用雙盲法在光鏡下進(jìn)行觀察。

    結(jié) 果

    1.EN2蛋白在不同卵巢組織中的表達(dá)情況:免疫組化結(jié)果顯示,EN2表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)且在所有的檢測(cè)樣本中均有表達(dá)(圖1),卵巢癌組織及交界性腫瘤組織EN2陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于正常組織,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05,表1)。

    圖1 EN2及β-catenin蛋白在不同卵巢組織中的表達(dá)情況(免疫組化,×200)

    表1 不同組織中EN2蛋白表達(dá)情況[n(%)]

    與對(duì)照組比較,*P<0.05

    2.β-catenin蛋白在不同卵巢組織中的表達(dá)情況:免疫組化結(jié)果顯示,β-catenin表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)且在所有的檢測(cè)樣本中均有表達(dá)(圖1),卵巢癌組織及交界性腫瘤組織β-catenin陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于正常組織,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05,表2)。

    表2 不同組織中β-catenin蛋白表達(dá)情況[n(%)]

    與對(duì)照組比較,*P<0.05

    3.EN2蛋白表達(dá)與卵巢癌臨床病理特征之間的關(guān)系:EN2蛋白的陽(yáng)性表達(dá)與患者年齡、卵巢癌病理類(lèi)型無(wú)顯著相關(guān)性(P>0.05);EN2蛋白在低分化卵巢癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于高分化組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);EN2蛋白在早期(Ⅰ~Ⅱ)卵巢癌中的陽(yáng)性表達(dá)率與晚期(Ⅲ~Ⅳ)卵巢癌比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);EN2蛋白淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移卵巢癌中的陽(yáng)性表達(dá)率與未轉(zhuǎn)移的卵巢癌比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05,表3)。

    表3 EN2表達(dá)與臨床病理特征相關(guān)情況[n(%)]

    與高分化比較,*P<0.05

    4.β-catenin蛋白表達(dá)與卵巢癌臨床病理特征之間的關(guān)系:β-catenin的陽(yáng)性表達(dá)與患者年齡、卵巢癌病理類(lèi)型無(wú)顯著相關(guān)性(P>0.05);β-catenin蛋白在低分化卵巢癌中的陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于高分化組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);β-catenin蛋白在早期(Ⅰ~Ⅱ)卵巢癌中的陽(yáng)性表達(dá)率與晚期(Ⅲ~Ⅳ)卵巢癌比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);β-catenin蛋白淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移卵巢癌中的陽(yáng)性表達(dá)率與未轉(zhuǎn)移的卵巢癌比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05,表4)。

    表4 β-catenin表達(dá)與臨床病理特征相關(guān)情況[n(%)]

    5.EN2與β-catenin表達(dá)的相關(guān)性分析:Spearman等級(jí)相關(guān)性分析結(jié)果顯示,EN2、β-catenin在卵巢癌中的表達(dá)呈正相關(guān)(P<0.05),詳見(jiàn)表5。

    表5 EN2與β-catenin之間的相關(guān)性[n(%)]

    討 論

    卵巢癌5年生存率低、預(yù)后差,因此,明確卵巢癌的發(fā)病機(jī)制、探索有效的治療手段尤為重要。同源異型盒基因(homeobox,HOX)作為轉(zhuǎn)錄因子,可與特定的DNA區(qū)域結(jié)合,激活或抑制靶基因的表達(dá),進(jìn)而參與細(xì)胞凋亡、運(yùn)動(dòng)與分化、血管生成和器官功能維持等多種生物學(xué)過(guò)程[10~12]。EN2基因?qū)儆贖OX家族,在人類(lèi)胚胎期神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育過(guò)程中起著至關(guān)重要的作用[13~15]。有報(bào)道指出,EN2可能在胚胎的早期發(fā)育和神經(jīng)系統(tǒng)功能的維持中起著重要作用,并且與神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育缺陷和自閉癥的發(fā)展密切相關(guān)[4]。

    研究發(fā)現(xiàn),EN2與腫瘤的發(fā)生和發(fā)展密切相關(guān),在某些類(lèi)型的癌癥中可能充當(dāng)腫瘤抑制基因[16,17]。Martin等[6]報(bào)道,乳腺癌細(xì)胞中EN2的表達(dá)上調(diào),可能促進(jìn)了腫瘤細(xì)胞的增殖。Bose等[18]研究顯示,前列腺癌細(xì)胞系中的EN2表達(dá)水平上調(diào),而EN2表達(dá)的沉默可能通過(guò)下調(diào)PAX2基因表達(dá)來(lái)抑制前列腺癌細(xì)胞的增殖。McGrath等[8]對(duì)8種上皮性卵巢癌細(xì)胞株及100例術(shù)后卵巢癌組織中EN2的表達(dá)水平進(jìn)行了研究分析,結(jié)果顯示卵巢癌細(xì)胞系及漿液性卵巢癌癌癥組織中EN2 mRNA表達(dá)水平明顯高于正常對(duì)照組,提示EN2可能有一定的預(yù)測(cè)價(jià)值。Wnt/β-catenin信號(hào)是經(jīng)典Wnt通路,通過(guò)激活下游靶基因的轉(zhuǎn)錄與表達(dá),調(diào)控細(xì)胞生長(zhǎng)。李云飛等[19]研究發(fā)現(xiàn),EN2及β-catenin在同一種癌癥中的表達(dá)均明顯增高,說(shuō)明EN2可能通過(guò)激活Wnt/β-catenin信號(hào)通路,參與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展。

    本研究發(fā)現(xiàn),EN2及β-catenin在卵巢癌中的表達(dá)明顯增加,這與McGrath等[8]的研究結(jié)果一致,表明EN2及β-catenin的高表達(dá)可能與卵巢癌的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)。本研究EN2及β-catenin的表達(dá)與卵巢癌的分化程度顯著相關(guān),但與患者年齡、卵巢癌類(lèi)型、臨床病理分期及有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無(wú)關(guān),提示EN2及β-catenin蛋白可能與卵巢癌的浸潤(rùn)、進(jìn)展、轉(zhuǎn)移無(wú)關(guān)。本研究EN2及β-catenin的表達(dá)與卵巢癌的病理分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無(wú)顯著相關(guān)性,但有相關(guān)性趨勢(shì)(P=0.08),其原因可能與樣本量少有關(guān)。今后的研究中需進(jìn)一步收集病理數(shù)據(jù),探究EN2及β-catenin的表達(dá)與病理分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系。Spearman相關(guān)性分析結(jié)果表明,卵巢癌組織中EN2與β-catenin的蛋白表達(dá)呈正相關(guān),二者均與組織學(xué)分級(jí)顯著相關(guān),推測(cè)EN2與β-catenin在卵巢癌的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中存在協(xié)同作用。

    綜上所述,卵巢癌組織中EN2及β-catenin蛋白表達(dá)明顯增高,并與病理分化程度呈正相關(guān),提示EN2及β-catenin可能在卵巢癌的發(fā)生過(guò)程中作為腫瘤促進(jìn)因子發(fā)揮生物學(xué)作用。

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