低負(fù)荷加壓訓(xùn)練改善自發(fā)性高血壓大鼠的血壓效果及機(jī)制研究

譚朝文，趙 彥，俞瑩瑩，馬曉緩，鄭玉嬋

（1.南京體育學(xué)院 研究生部，江蘇 南京 210014；2.南京體育學(xué)院 運(yùn)動健康學(xué)院，江蘇 南京 210014）

高血壓是發(fā)病率極高的心血管疾病，常易引發(fā)動脈粥樣硬化、心力衰竭等疾病。在其發(fā)病過程中，內(nèi)皮細(xì)胞功能起到重要的作用，而有氧或抗阻訓(xùn)練能夠有效地改善內(nèi)皮功能障礙（Moraes-Silva et al.，2017）。

加壓訓(xùn)練作為一種新興的抗阻訓(xùn)練方式，通過可調(diào)節(jié)壓力袖帶造成肢體的血管血流短時(shí)受限，同時(shí)結(jié)合低負(fù)荷訓(xùn)練，為不適合高負(fù)荷訓(xùn)練但需要增加肌力的人群提供了一種可替代的方案，并且這種訓(xùn)練方案已被證明安全可行（Boeno et al.，2018；Sato，2005）。低負(fù)荷加壓訓(xùn)練能夠改善老年女性心臟功能，有效降低絕經(jīng)后老年女性血壓等（Ladlow et al.，2018；Naderi et al.，2018；T?rpel et al.，2018；Yu et al.，2018），并且對高血壓患者是安全可行的（Boeno et al.，2018）。老年人群采用低負(fù)荷加壓訓(xùn)練方式可經(jīng)血管內(nèi)皮生長因子、血管緊張素Ⅱ等介導(dǎo)，對閉塞后血流、微血管容量、心臟功能等產(chǎn)生有益影響，能夠促進(jìn)血管生成（Naderi et al.，2018；Raji et al.，2018），但類似研究針對高血壓慢病的研究較少。

已有研究證明，有氧運(yùn)動（連續(xù)步行、慢跑和騎自行車）及抗阻運(yùn)動能夠通過調(diào)控內(nèi)皮素-1、血管內(nèi)皮生長因子、一氧化氮合成酶表達(dá)水平，對內(nèi)皮功能產(chǎn)生積極影響，改善高血壓患者血壓，并促進(jìn)心血管健康（Boutcher et al.，2017；Fang et al.，2019；Viboolvorakul et al.，2014）。但低負(fù)荷加壓訓(xùn)練這種新的運(yùn)動模式，能否通過該途徑改善內(nèi)皮細(xì)胞功能，進(jìn)而達(dá)到降壓效果還有待研究。

本研究探究低負(fù)荷訓(xùn)練、低負(fù)荷加壓訓(xùn)練及高負(fù)荷訓(xùn)練對自發(fā)性高血壓大鼠血壓的影響，并對其降壓效果進(jìn)行比較，分析血液中內(nèi)皮素-1、血管內(nèi)皮生長因子、一氧化氮合成酶，以及心肌中內(nèi)皮型一氧化氮合成酶指標(biāo)的變化，探討可能的降壓機(jī)制，為進(jìn)一步應(yīng)用此運(yùn)動模式治療高血壓提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動物

選取4周齡體重200 g左右、清潔級的雄性自發(fā)性高血壓大鼠60只（由南京江寧區(qū)青龍山動物飼養(yǎng)基地提供）。大鼠分籠飼養(yǎng)，用國家標(biāo)準(zhǔn)嚙齒類動物飼料進(jìn)行飼養(yǎng)，自由飲食和進(jìn)水。動物實(shí)驗(yàn)室的溫度為20±3℃，相對濕度為30%～45%，按照晝夜節(jié)律采用電腦自動模擬日光光照，光照時(shí)間為8：30—20：00。動物飼養(yǎng)符合南京體育學(xué)院動物倫理委員會的相關(guān)規(guī)定。

1.2 實(shí)驗(yàn)分組

所有大鼠于4周齡購進(jìn)，經(jīng)適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后隨機(jī)分為4組：對照組（高血壓安靜組）15只、低負(fù)荷訓(xùn)練組15只、低負(fù)荷加壓訓(xùn)練組15只、高負(fù)荷訓(xùn)練組15只（Boeno et al.，2018；Ladlow et al.，2018；Picón et al.，2018）。

1.3 運(yùn)動方案

運(yùn)動組在大鼠梯架上進(jìn)行訓(xùn)練，梯架每個(gè)臺階間隔0.5 cm，共有54個(gè)垂直臺階，臺階頂部有一休息平臺，為動物在攀登休息時(shí)創(chuàng)造一個(gè)平穩(wěn)環(huán)境。在最大負(fù)荷試驗(yàn)之前，所有大鼠進(jìn)行連續(xù)5天的無負(fù)重適應(yīng)性爬梯行為。試驗(yàn)包括初始負(fù)荷為體重的75%，將負(fù)荷附著于大鼠尾部基部，負(fù)荷在隨后的爬升中逐步增加50 g。使用每只大鼠的個(gè)體最大負(fù)荷（最后一次完全爬升的負(fù)荷/體重）的標(biāo)準(zhǔn)化值進(jìn)行阻力鍛煉訓(xùn)練，并每周根據(jù)動物體重進(jìn)行調(diào)節(jié)（在飼養(yǎng)與訓(xùn)練過程中，大鼠體重及力量隨時(shí)間明顯增加，為了保證高負(fù)荷訓(xùn)練組負(fù)荷的1 RM百分比達(dá)到55%～75%，低負(fù)荷訓(xùn)練組與低負(fù)荷加壓訓(xùn)練組負(fù)荷的1 RM百分比達(dá)到35%～55%，同時(shí)結(jié)合國外學(xué)者研究（Sanches et al.，2013），采取負(fù)荷逐漸增加的抗阻訓(xùn)練方式（表1）。

表1 運(yùn)動組8周的訓(xùn)練中的最大負(fù)荷（1 RM）Table 1 1 RM for 8 Weeks in Exercise Group /g

正式訓(xùn)練時(shí)，運(yùn)動組進(jìn)行8周爬梯訓(xùn)練，每周訓(xùn)練5天，每天15：00—17：00訓(xùn)練 1組爬梯，每組 15次，通過刺激大鼠尾尖方式使其在10 s內(nèi)完成單次爬梯，每次間隔休息1 min，每周固定時(shí)間進(jìn)行體重與最大負(fù)荷的測量（圖1）。

圖1 低負(fù)荷加壓訓(xùn)練組自發(fā)性高血壓大鼠爬梯過程與右下肢環(huán)扎部位示意圖Figure 1.Schematic Diagram of the Ladder Climbing Process and Ligation Site of the Right Lower Limb of the Blood Flow Restriction Combined with Low Load Training Rats

低負(fù)荷加壓訓(xùn)練：每周訓(xùn)練5天，第1～2周，最大負(fù)荷的30%～40%；第3～5周，最大負(fù)荷的40%～50%；第6～8周，最大負(fù)荷的40%～60%。在爬梯同時(shí)，選用橡皮筋環(huán)扎大鼠右下肢大腿根部，給予血管血流受限結(jié)合抗阻訓(xùn)練，在間歇1 min時(shí)，解除血流限制進(jìn)行血流再灌注，休息后重新進(jìn)行橡皮筋環(huán)扎該部位。為了更好監(jiān)測血流受限程度，采用小動物高頻彩色超聲（VisualSonics公司，加拿大）于環(huán)扎后、間歇期、再次環(huán)扎時(shí)分別監(jiān)測血流，以達(dá)到血流受限訓(xùn)練需求的30%～40%血流限制百分比（Deschenes et al.，2011；Mathien et al.，1986；Yang et al.，1991）（圖2）。實(shí)驗(yàn)過程中隨時(shí)檢查大鼠狀況，特別要注意運(yùn)動組大鼠，防止運(yùn)動中的意外受傷以及壞疽的發(fā)生。

低負(fù)荷訓(xùn)練：每周訓(xùn)練5天，第1～2周，最大負(fù)荷的30%～40%；第3～5周，最大負(fù)荷的40%～50%；第6～8周，最大負(fù)荷的40%～60%。

高負(fù)荷訓(xùn)練：每周訓(xùn)練5天，第1～2周，最大負(fù)荷的50%～60%；第3～5周，最大負(fù)荷的60%～70%；第6～8周，最大負(fù)荷的70%～80%（表2）。

1.4 大鼠尾動脈無創(chuàng)血壓測定

在江蘇省醫(yī)藥動物實(shí)驗(yàn)中心進(jìn)行大鼠尾動脈無創(chuàng)血壓測定，測試要求在安靜、溫暖的環(huán)境下，大鼠需保持清醒，用智能無創(chuàng)血壓測試儀BP-2000（軟隆生物公司，北京）測量大鼠安靜時(shí)的尾動脈血壓，每只大鼠連續(xù)測3次，取其平均值。測量時(shí)間為訓(xùn)練前、訓(xùn)練4周時(shí)、訓(xùn)練8周后的對應(yīng)周的周六9：00—11：00。

圖2 自發(fā)性高血壓大鼠右下肢血流受限的超聲檢測Figure 2.Ultrasonic Detection of Blood Flow Limitation in the Right Lower Limb of Spontaneously Hypertensive Rats

表2 抗阻訓(xùn)練方案Table 2 Resistance Training Program

1.5 ELISA法測定血液中內(nèi)皮素-1、血管內(nèi)皮生長因子、一氧化氮合成酶水平

大鼠腹腔注射10%水合氯醛（0.5 ml/100 g），麻醉開腹后用粗紗布去除腹部筋膜和其他組織，找到下腔靜脈進(jìn)行取血，促凝管取血5 ml，室溫放置2 h，然后3 000 r/min離心20 min，取上清液，采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA），使用ELISA檢測試劑盒（江蘇凱基生物技術(shù)有限公司），按說明書步驟操作，檢測血清中內(nèi)皮素-1、血管內(nèi)皮生長因子、一氧化氮合成酶水平，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算指標(biāo)水平。

1.6 Western blot檢測心肌中內(nèi)皮型一氧化氮合成酶水平

大鼠解剖后摘取心臟，用生理鹽水進(jìn)行灌注清洗，濾紙吸干后放于-80℃冷凍保存。實(shí)驗(yàn)時(shí)取大鼠心尖組織，置于液氮中研磨成粉狀，然后加入細(xì)胞裂解液孵育30 min，以10 000 r/min低溫（4℃）離心5 min，取上清液。用BCA蛋白定量法測定蛋白濃度，計(jì)算調(diào)整上樣量后，樣品按4：1混合loading buffer，沸水浴5 min。8%SDS-PAGE分離蛋白質(zhì)，轉(zhuǎn)膜，封閉 1.5 h，加入一抗（anti-eNOS，1：1 000，Cell Signaling公司，美國；anti-GAPDH，1：1 000，Proteintech Group公司，美國），4℃孵育過夜，加入二抗（anti-rabbit IgG-HRP，1：10 000，Proteintech Group公司，美國）室溫孵育 1.5 h，滴加 ECL，置于 Bio-Rad Chemidoc XRS+（Bio-Rad伯樂公司，美國）下進(jìn)行曝光，用Image LabTM Software圖像分析軟件進(jìn)行灰度分析。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)采用M±SDM表示，組間比較采用SPSS 20.0進(jìn)行單因素方差分析（one way-aNOVA）及t檢驗(yàn)，組內(nèi)采用配對t檢驗(yàn)分析，P＜0.05為具有顯著性差異，P＜0.01為具有非常顯著性差異；采用pearson或spearman相關(guān)分析進(jìn)行兩變量間的相關(guān)分析。

2 結(jié)果

2.1 8周后自發(fā)性高血壓大鼠體重變化

訓(xùn)練前，4組自發(fā)性高血壓大鼠體重?zé)o明顯差異（P＞0.05）；訓(xùn)練8周后，4組體重均明顯增高（P＜0.05）。其中，與對照組相比，高負(fù)荷訓(xùn)練組體重明顯增高（P＜0.05）；而低負(fù)荷加壓訓(xùn)練組和低負(fù)荷訓(xùn)練組與對照組相比，體重?zé)o明顯差異（P＞0.05，表3）。

2.2 不同方式抗阻訓(xùn)練對自發(fā)性高血壓大鼠血壓的影響

1）比較4組訓(xùn)練前后自身的變化，低負(fù)荷加壓訓(xùn)練組和低負(fù)荷訓(xùn)練組的收縮壓與舒張壓顯著下降（P＜0.05）；對照組的舒張壓顯著上升（P＜0.05）；高負(fù)荷訓(xùn)練組的收縮壓與舒張壓明顯上升（P＜0.05）。2）組間對比，低負(fù)荷加壓訓(xùn)練組在8周訓(xùn)練后，收縮壓與舒張壓均低于低負(fù)荷訓(xùn)練組（P＜0.05）；高負(fù)荷訓(xùn)練組在訓(xùn)練4周時(shí)，舒張壓明顯高于對照組（P＜0.05）；在8周訓(xùn)練后，高負(fù)荷訓(xùn)練組舒張壓同樣明顯高于對照組（P＜0.05，表4、圖3）。

表3 8周后4組自發(fā)性高血壓大鼠體重變化Table 3 Weight Changes of Spontaneously Hypertensive Rats after 8 Weeks /g

2.3 不同方式抗阻訓(xùn)練對自發(fā)性高血壓大鼠血液中內(nèi)皮素-1、血管內(nèi)皮生長因子、一氧化氮合成酶表達(dá)的影響

實(shí)驗(yàn)后運(yùn)動組血液中指標(biāo)均與對照組進(jìn)行比較，以代替實(shí)驗(yàn)前血液提取檢測。ELISA檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)，1）與對照組比較，低負(fù)荷加壓訓(xùn)練組和低負(fù)荷訓(xùn)練組內(nèi)皮素-1表達(dá)水平顯著下調(diào)（P＜0.05），高負(fù)荷訓(xùn)練組內(nèi)皮素-1表達(dá)水平顯著上調(diào)（P＜0.05）；2）與對照組比較，低負(fù)荷加壓訓(xùn)練組、低負(fù)荷訓(xùn)練組、高負(fù)荷訓(xùn)練組的血管內(nèi)皮生長因子表達(dá)水平均顯著上調(diào)（P＜0.05）；3）與對照組比較，低負(fù)荷加壓訓(xùn)練組與低負(fù)荷訓(xùn)練組一氧化氮合成酶表達(dá)水平顯著上調(diào)（P＜0.05），高負(fù)荷訓(xùn)練組一氧化氮合成酶表達(dá)水平顯著下調(diào)（P＜0.05，表5）。

表4 不同方式抗阻訓(xùn)練對自發(fā)性高血壓大鼠血壓的影響Table 4 Effects of Different Resistance Training on Blood Pressure in Spontaneously Hypertensive Rats /mmHG

2.4 不同方式抗阻訓(xùn)練對自發(fā)性高血壓大鼠心肌中內(nèi)皮型一氧化氮合成酶表達(dá)的影響

Western blot結(jié)果發(fā)現(xiàn)，1）與對照組比較，低負(fù)荷加壓訓(xùn)練組與低負(fù)荷訓(xùn)練組內(nèi)皮型一氧化氮合成酶表達(dá)水平顯著上調(diào)（P＜0.05）；2）與低負(fù)荷訓(xùn)練組比較，低負(fù)荷加壓訓(xùn)練組內(nèi)皮型一氧化氮合成酶表達(dá)水平顯著上調(diào)（P＜0.05，圖4）。

2.5 相關(guān)性分析

Pearson數(shù)據(jù)相關(guān)性處理結(jié)果發(fā)現(xiàn)，1）在高負(fù)荷訓(xùn)練組中，只有收縮壓與內(nèi)皮型一氧化氮合成酶呈負(fù)相關(guān)（r=-0.881，P＜0.05）。2）在低負(fù)荷加壓訓(xùn)練組中，收縮壓與內(nèi)皮素-1呈正相關(guān)（r=0.687，P＜0.05）；收縮壓與一氧化氮合成酶呈負(fù)相關(guān)（r=-0.559，P＜0.05）；收縮壓與血管內(nèi)皮生長因子呈負(fù)相關(guān)（r=-0.577，P＜0.05）；收縮壓與內(nèi)皮型一氧化氮合成酶呈負(fù)相關(guān)（r=-0.927，P＜0.05）。3）在低強(qiáng)度抗阻訓(xùn)練組中，收縮壓與內(nèi)皮素-1呈正相關(guān)（r=0.776，P＜0.05）；收縮壓與一氧化氮合成酶呈負(fù)相關(guān)（r=-0.796，P＜0.05）；收縮壓與血管內(nèi)皮生長因子呈負(fù)相關(guān)（r=-0.746，P＜0.05）；收縮壓與內(nèi)皮型一氧化氮合成酶呈負(fù)相關(guān)（r=-0.930，P＜0.05）；舒張壓與一氧化氮合成酶呈負(fù)相關(guān)（r=-0.553，P＜0.05）；舒張壓與血管內(nèi)皮生長因子呈負(fù)相關(guān)（r=-0.703，P＜0.05）；舒張壓與內(nèi)皮型一氧化氮合成酶呈負(fù)相關(guān)（r=-0.931，P＜0.05，表6，表7）。

圖3 不同方式抗阻訓(xùn)練對自發(fā)性高血壓大鼠血壓的影響Figure 3.Effect of Different Resistance Training on Blood Pressure in Spontaneously Hypertensive Rats

表5 不同方式抗阻訓(xùn)練對自發(fā)性高血壓大鼠血液中內(nèi)皮素-1、一氧化氮合成酶、血管內(nèi)皮生長因子表達(dá)的影響Table 5 Effects of Different Resistance Training on the Expression of ET-1，NOS，and VEGF in the Blood of Spontaneously Hypertensive Rats

圖4 不同方式抗阻訓(xùn)練對自發(fā)性高血壓大鼠心肌中內(nèi)皮型一氧化氮合成酶表達(dá)的影響Figure 4.Effects of Different Resistance Training on eNOS Expression in Myocardium of Spontaneously Hypertensive Rats

3 討論

3.1 內(nèi)皮相關(guān)因子對自發(fā)性高血壓大鼠血壓變化影響

高血壓是一種原因尚不明確、以體循環(huán)動脈壓升高為主要特征的獨(dú)立性、全身性的疾病。除遺傳因素外，不良的生活作息、飲食習(xí)慣等環(huán)境因素均會產(chǎn)生血流動力學(xué)負(fù)荷相關(guān)的生物力學(xué)應(yīng)力，逐漸改變心血管功能，并在機(jī)械和體液因素的作用下，造成血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡壞死，最終導(dǎo)致血管舒張/收縮功能障礙，引起機(jī)體血壓升高（Berenyiova et al.，2018；Moreno et al.，2017；Pucci et al.，2019）。而在這一過程中，內(nèi)皮功能的健全起到了關(guān)鍵作用（Suvorava et al.，2017）。

與內(nèi)皮功能相關(guān)的因子主要包括：內(nèi)皮素-1、血管內(nèi)皮生長因子、一氧化氮合成酶。內(nèi)皮素-1作為內(nèi)皮功能障礙的潛在標(biāo)志物，能夠影響血管的有效收縮，與一氧化氮形成動態(tài)平衡，當(dāng)內(nèi)皮素-1表達(dá)水平降低時(shí)，高血壓患者的收縮壓降低（Gu et al.，2015）。血管內(nèi)皮生長因子，對血管發(fā)生、形成及血管張力有著重要的良性作用，并且可以調(diào)節(jié)細(xì)胞遷移、增殖和血管收縮/擴(kuò)張，觸發(fā)內(nèi)皮生物學(xué)所必需的途徑（Wang et al.，2019）。一氧化氮合成酶，負(fù)責(zé)一氧化氮的生成，能夠調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖、血小板聚集、血管張力等，可以抑制血管、心肌纖維化，改善內(nèi)皮細(xì)胞功 能（Battault et al.，2016；Li et al.，2019；Silva et al.，2016；ülker et al.，2017），而內(nèi)皮型一氧化氮合成酶則是在心肌中主要表達(dá)的一種一氧化氮合成酶的亞型，多為心肌組織檢測中采用（Chang et al.，2017；Chao et al.，2017）。

表6 收縮壓與內(nèi)皮素-1、一氧化氮合成酶、血管內(nèi)皮生長因子、內(nèi)皮型一氧化氮合成酶的相關(guān)性Table 6 Correlation between SBP and ET-1，NOS，VEGF，eNOS

表7 舒張壓與內(nèi)皮素-1、一氧化氮合成酶、血管內(nèi)皮生長因子、內(nèi)皮型一氧化氮合成酶的相關(guān)性Table 7 Correlation between DBP and ET-1，NOS，VEGF，eNOS

當(dāng)內(nèi)皮功能發(fā)生障礙時(shí)，高血壓發(fā)病進(jìn)程加速，血液中內(nèi)皮素-1表達(dá)逐漸升高，與一氧化氮的動態(tài)平衡被打破，血液中內(nèi)皮素-1的變化與血壓升高呈正比（Battault et al.，2016）。在對高血壓人群或動物進(jìn)行低中強(qiáng)度抗阻運(yùn)動或低強(qiáng)度抗阻聯(lián)合有氧運(yùn)動干預(yù)后，血液中的血管內(nèi)皮生長因子表達(dá)增加，并且血管內(nèi)皮生長因子介導(dǎo)PI3K-Akt活化一氧化氮合成酶進(jìn)行磷酸化，使一氧化氮合成酶大量表達(dá)，增加一氧化氮釋放量，抑制并降低內(nèi)皮素-1表達(dá)水平，重新控制血管收縮維持血管張力，引起血管壁結(jié)構(gòu)發(fā)生重塑，改善內(nèi)皮功能及動脈順應(yīng)性，進(jìn)而降低血壓（Colombo et al.，2016；Maruf et al.，2016；Son et al.，2017；Stanisic et al.，2019；Touyz et al.，2016；Viboolvorakul et al.，2014）。

3.2 單純低負(fù)荷訓(xùn)練對自發(fā)性高血壓大鼠血壓變化影響及機(jī)制

在本實(shí)驗(yàn)中，單純低負(fù)荷訓(xùn)練產(chǎn)生了降壓效果，降壓機(jī)制可能是由于內(nèi)皮功能的改善。當(dāng)單純低負(fù)荷訓(xùn)練干預(yù)自發(fā)性高血壓大鼠后，大鼠血液中的內(nèi)皮素-1下調(diào)，血管內(nèi)皮生長因子上調(diào)，一氧化氮合成酶上調(diào)以及心肌中內(nèi)皮型一氧化氮合成酶上調(diào)，同時(shí)大鼠血壓下降，并且低負(fù)荷訓(xùn)練組大鼠血壓與內(nèi)皮素-1成正相關(guān)，與血管內(nèi)皮生長因子和一氧化氮合成酶及心肌中內(nèi)皮型一氧化氮合成酶成負(fù)相關(guān)。這一系列結(jié)果與前人研究結(jié)果相一致（葉芳等，2016），證明單純低負(fù)荷訓(xùn)練可以通過調(diào)節(jié)內(nèi)皮相關(guān)因子激活釋放一氧化氮，進(jìn)行血管重塑，達(dá)到改善內(nèi)皮功能，降低血壓的目的。

3.3 低負(fù)荷加壓訓(xùn)練對自發(fā)性高血壓大鼠血壓變化影響及機(jī)制

在原有的低負(fù)荷訓(xùn)練方案上，同時(shí)進(jìn)行加壓訓(xùn)練，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，低負(fù)荷加壓訓(xùn)練組自發(fā)性高血壓大鼠降壓效果顯著優(yōu)于低負(fù)荷訓(xùn)練組，降壓機(jī)制可能是由于內(nèi)皮功能的改善及心肌中內(nèi)皮型一氧化氮合成酶大量表達(dá)。訓(xùn)練后，大鼠血液中的內(nèi)皮素-1下調(diào)，血管內(nèi)皮生長因子上調(diào)，一氧化氮合成酶上調(diào)以及心肌中內(nèi)皮型一氧化氮合成酶上調(diào)，同時(shí)大鼠血壓下降，低負(fù)荷加壓訓(xùn)練組大鼠收縮壓與內(nèi)皮素-1成正相關(guān)，與血管內(nèi)皮生長因子和一氧化氮合成酶成負(fù)相關(guān)。其中，低負(fù)荷加壓訓(xùn)練組血液中內(nèi)皮素-1、血管內(nèi)皮生長因子、一氧化氮合成酶指標(biāo)與低負(fù)荷訓(xùn)練組相比較，無明顯差異，但低負(fù)荷加壓訓(xùn)練組心肌中內(nèi)皮型一氧化氮合成酶表達(dá)上調(diào)明顯高于低負(fù)荷訓(xùn)練組，統(tǒng)計(jì)學(xué)意義極為顯著，并且低負(fù)荷加壓訓(xùn)練組大鼠收縮壓與心肌中內(nèi)皮型一氧化氮合成酶成負(fù)相關(guān)。這一系列結(jié)果與前人研究結(jié)果相似（Neto et al.，2015；Stanisic et al.，2019）。同時(shí)在對比低負(fù)荷訓(xùn)練組時(shí)發(fā)現(xiàn)，低負(fù)荷加壓訓(xùn)練能更有效地增加心肌中內(nèi)皮型一氧化氮合成酶的表達(dá)。當(dāng)心肌中內(nèi)皮型一氧化氮合成酶的表達(dá)提高時(shí)，一氧化氮釋放，優(yōu)先修復(fù)損傷血管，進(jìn)行心肌纖維化抑制，只有在一氧化氮大量釋放時(shí)才能形成足夠多的新微血管，進(jìn)而緩解改善血管張力，這可能是低負(fù)荷加壓訓(xùn)練組降壓效果優(yōu)于低負(fù)荷訓(xùn)練組的原因所在（Chao et al.，2017；Li et al.，2015）。實(shí)驗(yàn)中，低負(fù)荷加壓訓(xùn)練是在運(yùn)動中完成的。而關(guān)于靜態(tài)加壓除壓訓(xùn)練，部分研究證明，單純靜態(tài)加壓除壓訓(xùn)練對血管的剪切應(yīng)力及對血流動力學(xué)的影響較低，雖然能夠即刻降低血壓，但不能長期使血壓維持在低的水平上（Araújo et al.，2014；Pinto et al.，2018；Spranger et al.，2015）。所以，對于高血壓慢病來說，低負(fù)荷加壓訓(xùn)練在運(yùn)動中的效果會遠(yuǎn)遠(yuǎn)優(yōu)于安靜狀態(tài)下的加壓除壓訓(xùn)練。綜上，本實(shí)驗(yàn)證明，低負(fù)荷加壓訓(xùn)練可以通過調(diào)節(jié)血液中內(nèi)皮相關(guān)因子改善內(nèi)皮功能，并大幅度上調(diào)心肌中內(nèi)皮型一氧化氮合成酶表達(dá)量，達(dá)到降低血壓的效果，同時(shí)也說明低負(fù)荷加壓訓(xùn)練降壓效果不僅僅是低負(fù)荷抗阻的效果，還包括加壓訓(xùn)練的效果。

3.4 高負(fù)荷訓(xùn)練對自發(fā)性高血壓大鼠血壓變化影響及機(jī)制

關(guān)于高負(fù)荷訓(xùn)練組，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，高負(fù)荷訓(xùn)練產(chǎn)生了升高血壓的效果。與低負(fù)荷訓(xùn)練組和低負(fù)荷加壓訓(xùn)練組相比，高負(fù)荷訓(xùn)練組升壓現(xiàn)象的出現(xiàn)，可能與訓(xùn)練后大鼠血液中的內(nèi)皮素-1和血管內(nèi)皮生長因子上調(diào)，一氧化氮合成酶下調(diào)有關(guān)。事實(shí)上，當(dāng)進(jìn)行65%1RM阻力訓(xùn)練時(shí)，會增加氧化應(yīng)激水平，加重內(nèi)皮功能障礙，引起血壓較大波動，導(dǎo)致不良反應(yīng)的發(fā)生（Sharman et al.，2015），本實(shí)驗(yàn)中高負(fù)荷訓(xùn)練升高血壓現(xiàn)象與這一研究結(jié)果相似。而本實(shí)驗(yàn)高負(fù)荷訓(xùn)練組內(nèi)皮素-1的表達(dá)上調(diào)和一氧化氮合成酶的表達(dá)下調(diào)，與Wang等（2019）的研究一致，高負(fù)荷運(yùn)動帶來的氧化應(yīng)激會刺激內(nèi)皮素-1增加，并抑制一氧化氮合成酶表達(dá)，這樣的變化會影響內(nèi)皮功能。但血液中的血管內(nèi)皮生長因子表達(dá)水平相對于對照組雖有顯著的提高，但相關(guān)性分析顯示，該組收縮壓、舒張壓的變化與血管內(nèi)皮生長因子無相關(guān)性。這可能與高負(fù)荷訓(xùn)練組訓(xùn)練后的乳酸過度堆積和交感神經(jīng)興奮性提高有關(guān)（Ozaki et al.，2013；Shimojo et al.，2015），并推測血管內(nèi)皮生長因子表達(dá)上調(diào)是為了緩解高負(fù)荷訓(xùn)練對大鼠血管帶來的壓力，但還需要深入研究。因此，認(rèn)為高負(fù)荷訓(xùn)練可以上調(diào)自發(fā)性高血壓大鼠血液中血管內(nèi)皮生長因子表達(dá)，但不能夠取得降壓的效果，說明不是單一因素控制。

4 結(jié)論

低負(fù)荷加壓訓(xùn)練可以下調(diào)血液中內(nèi)皮素-1的表達(dá)、上調(diào)血液中血管內(nèi)皮生長因子和一氧化氮合成酶及心肌中內(nèi)皮型一氧化氮合成酶的表達(dá)，改善血管內(nèi)皮功能，降低自發(fā)性高血壓大鼠血壓，且降壓效果優(yōu)于單純低負(fù)荷訓(xùn)練，為代替高負(fù)荷訓(xùn)練作為高血壓疾病的運(yùn)動方案提供了新思路。