二氫楊梅素對肝纖維化小鼠肝功能的影響

張新卓 鄔小蘭 劉蕓

摘要：試驗旨在研究二氫楊梅素對肝纖維化小鼠肝功能的影響。試驗選取小白鼠54只，隨機分成空白組、模型組、扶正化瘀膠囊陽性對照組，二氫楊梅素低劑量組、二氫楊梅素中劑量組、二氫楊梅素高劑量組，測試不同劑量二氫楊梅素對肝纖維化小鼠肝功能的影響。結果表明：二氫楊梅素能緩解四氯化碳導致的肝損傷，低劑量二氫楊梅素對于ALT較佳，高劑量二氫楊梅素對于AsT較佳;二氫楊梅素能夠在一定程度緩解肝細胞纖維化，但是并不能完全防止肝纖維化。二氫楊梅素可以調(diào)節(jié)肝功能，能明細降低ALT、AST的水平，有顯著的保肝護肝功效，同時，二氫楊梅素對于肝纖維化有一定的療效。

關鍵詞：二氫楊梅素;肝纖維化;小鼠;護肝

藤茶是一種廣泛分布于我國南部山區(qū)的藥食兩用植物。幾百年來一直作為中草藥和保健茶飲在民間使用。據(jù)《中草藥匯編》等記載，藤茶具有祛風濕、清熱解毒的功效，可用于治療風熱感冒、咽喉腫痛等?，F(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)，藤茶中含有豐富的黃酮類化合物，含量高達37.4%～38.5%。二氫楊梅素是藤茶的主要化合物，也是天然黃酮類化合物的重要代表之一。二氫楊梅素具有抑菌作用、抑制癌細胞增殖作用等，特別是在保肝護肝方面有較好的效果，能緩解治療各種原因引起的肝損傷。肝纖維化是潛在可逆的創(chuàng)傷愈合反應，可由慢性肝損傷引起，包括病毒性肝炎，酒精性肝炎、自身免疫性肝炎。主要以損傷的肝組織內(nèi)和周圍的細胞外基質(zhì)的過度沉積為主要特征。本文以昆明小白鼠為實驗對象，檢測二氫楊梅素對肝纖維化小鼠肝功能。

一、材料與方法

（一）藥品試劑

二氫楊梅素，民族中獸藥分離純化技術國家地方聯(lián)合工程研究中心中獸藥有效成分提取分離純化與評價技術研究室制備，HPLC檢測，純度>98%。

扶正化瘀膠囊，上海黃海制藥有限責任公司。

谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT），谷草轉(zhuǎn)氨酶（AsT）測定試劑盒，南京建成生物工程研究所，透明質(zhì)酸（HA），層粘連蛋白（LN），IV型膠原（CIV），III型前膠原（PC-III）放射免疫試劑盒，北京北方生物技術研究所。

其他試劑購自當?shù)厮幉氖袌?，分析純?/p>

（二）試驗動物

健康雄性昆明種小白鼠54只，購自貴州醫(yī)科大學實驗動物中心。

（三）分組設計及飼養(yǎng)管理

健康雄性昆明種小白鼠54只，民族中獸藥分離純化技術國家地方聯(lián)合工程研究中心中獸藥藥理毒理研究（實驗）室喂養(yǎng)7天后（體重20g左右），將小鼠隨機分成6組，每組9只，分別為1組（空白組）、2組（模型組）、3組（扶正化瘀膠囊陽性對照組），4組（二氫楊梅素低劑量組）、5組（二氫楊梅素中劑量組）、6組（二氫楊梅素高劑量組），每一組內(nèi)設3個平行，每一個平行小鼠3只?？刂骑曫B(yǎng)環(huán)境溫度26℃，濕度控制在40%～60%，定時觀察各組實驗小鼠的日常狀況。

（四）飼養(yǎng)配方及劑量

基礎飼料，購自北京華越洋生物科技有限公司。

1組，按基礎飼料正常喂養(yǎng)。

2—6組，在正常喂養(yǎng)基礎飼料的情況下，每周間隔定時喂養(yǎng)三次混有40%四氯化碳油劑飼料（40%四氯化碳油劑，四氯化碳和花生油4：6體積混合），飼喂量：0.8mL/組。其中3組基礎飼料混入扶正化瘀膠囊內(nèi)含物，4-6組基礎飼料混入二氫楊梅素，劑量見表1。給藥方式為：每天早晚各定量喂食一次，自由飲水。

（五）指標測試

飼養(yǎng)50d后，眼眶取血，制備血清（血液靜置30 min，4℃下3800r/min離心20 min得）。根據(jù)試劑盒說明操作，使用試劑盒測試血液中的ALT，AST，HA，LN，CIV，PC-III含量。

（六）數(shù)據(jù)分析

采用SPASS 20.0對數(shù)據(jù)進行分析統(tǒng)計。

二、結果與分析

（一）二氫楊梅素對小鼠ALT、AST的影響

血清ALT、AST含量的高低能反映出肝臟受損程度，含量越高，證明肝細胞受損越嚴重。

二氫楊梅素對小鼠血清ALT、AST的影響見圖1。由圖1可知，2組（模型組）ALT、AST分別為21.75 IU/L、258-21IU/L，與1組（空白組）相比，均極顯著性增加，說明喂食含四氯化碳的飲食，小鼠的肝臟受到損傷，導致血清中ALT、AST含量增加。3組（陽性對照組）的ALT、AST分別為6.75 IU/L、124.55 IU/L，與1組（空白組）相比，有上升，但是對比2組，則極顯著性下降，說明3組的陽性對照起作用，4組、5組、6組三個二氫楊梅素的低中高計量組，表現(xiàn)與3組陽性對照組一致，說明二氫楊梅素能緩解四氯化碳導致的肝損傷，具體來看，對于ALT，低劑量表現(xiàn)較佳，對于AST，則二氫楊梅素劑量越高，效果越好。

（二）二氫楊梅素對小鼠血清中HA含量的影響

肝臟受損，特別是肝細胞成纖維化，導致肝細胞不能及時攝取透明質(zhì)酸（HA），從而導致血液中HA含量升高，檢測血清中HA的含量可以看出肝纖維化程度。

二氫楊梅素對小鼠血清中HA含量的影響見圖2。由圖2可知，1組（空白組）血清中HA含量為108.56 ng/mL時，2組（模型組）為215.63 ng/mL，有極顯著性差異，3組（陽性對照組），4-6組（實驗組）血清中HA含量與2組相比，均顯著性下降，但與1組相比，則顯著性增多，說明3—6組能夠在一定程度緩解肝細胞纖維化，但是并不能完全防止肝纖維化。

（三）二氫楊梅素對小鼠血清中LN含量的影響

LN是一類膠原蛋白，是基底膜的成分，如肝臟受損，肝臟合成LN增加，且LN含量隨著肝纖維化進展而變化，肝纖維化越嚴重，LN含量越高，通過檢測血清中LN的含量，可以間接看出肝纖維化的程度。

二氫楊梅素對小鼠血清中HA含量的影響見圖3。由圖3可知，1組（空白組）血清中LN含量為28.25 ng/mL時，2組（模型組）為67.45 ng/mL，有極顯著性差異，說明四氯化碳導致了小鼠肝纖維化，造成血清中LN含量增加。3組（陽性對照組）的LN含量為36.24 ng/mL，與1組相比，有顯著性增加，與2組相比，則極顯著性降低，說明陽性對照組扶正化瘀膠囊可以減緩由四氯化碳引起的肝纖維化，但是并不能完全消除，4-6組（實驗組）血清中LN含量與2組相比，均顯著性下降，與3組陽性對照組基本持平，起到了陽性對照組類似的功效。

（四）二氫楊梅素對小鼠血清中CIV含量的影響

CIV是基底膜骨的膠原成分，主要在肝臟合成和分解，如果肝細胞受損纖維化，肝臟會過量合成C1V，從而使血液中CIV異常增多，血液中CIV含量的高低與肝細胞是否纖維化密切相關，監(jiān)測血液中CIV的含量，可以反應出肝纖維化程度。

二氫楊梅素對小鼠血清中CIV含量的影響見圖4。通過四氯化碳小鼠誘導肝纖維化，2組（模型組）的CIV含量達到152.12ng/mL，遠遠超過1組（空白組）的41.23 ng，mL。3組（陽性對照組）的CIV含量為65.25 ng/mL，與1組相比，有顯著性增加，與2組相比，則極顯著性降低，說明陽性對照組扶正化瘀膠囊可以減緩由四氯化碳引起的肝纖維化，但是并不能完全消除，4-6組（實驗組）血清中CIV含量與2組相比，均顯著性下降，與3組陽性對照組基本持平，起到了與陽性對照組類似的功效。

（五）二氫楊梅素對小鼠血清中PC-III含量的影響

PC-III肝細胞纖維化呈正相關，監(jiān)測血液中PC-III的含量，可以反應出肝纖維化程度。

二氫楊梅素對小鼠血清中Pc-III含量的影響見圖5。通過四氯化碳小鼠誘導肝纖維化，2組（模型組）的PC-III含量達到124.24g/mL，遠遠超過1組（空白組）的60.55 ng，mL。3組（陽性對照組）的CIV含量為65.05 ng/mL，與1組相比，有顯著性增加，與2組相比，則極顯著性降低，說明陽性對照組扶正化瘀膠囊可以減緩由四氯化碳引起的肝纖維化，但是并不能完全消除，4-6組（實驗組）血清中PC-III含量與2組相比，均顯著性下降，與3組陽性對照組基本持平，起到了陽性對照組類似的功效。

三、結論

二氫楊梅素可以調(diào)節(jié)肝功能，能明顯降低ALT、AST的水平，本研究結果顯示，藤茶雙氫楊梅素可顯著降低肝纖維化小鼠血清AST、ALT活性及血清中HA、LN、CIV、Pc-III含量。同時，二氫楊梅素有顯著的保肝護肝功效，對于肝纖維化有一定的療效。綜上所述，雙氫楊梅素對四氯化碳所誘導的小鼠肝纖維化有顯著的干預作用，其作用機制將在以后的研究中體現(xiàn)。