草櫻組培技術研究

劉菲娜 舒瑾芳 鄔陳婷 王欠欠 邢沅乙 許奇奇 王一

摘 要：櫻花起源于中國，在世界各地都有分布，由于其花色鮮艷美麗，是重要的園林觀賞樹種之一。目前櫻花的繁殖主要以扦插和嫁接為主，生根率比較低，繁育系數(shù)也少，采用組織快繁技術可以有效克服這些問題。本文研究了草櫻的組培快繁技術，從外植體的消毒及培養(yǎng)基激素濃度的摸索，最終探索出一種草櫻的組織培養(yǎng)方法，可以提高其繁育系數(shù)，縮短生育周期，可用于大規(guī)模工廠化育苗。

關鍵詞：櫻花;組培快繁;育苗

櫻花（學名：Cerasus sp.）是薔薇科櫻屬幾種植物的統(tǒng)稱， 植株花朵鮮艷美麗，是我國園林綠化中優(yōu)秀的觀花樹種[1]。廣泛應用于城市街道、小區(qū)、校園和河堤等，綠化效果顯著。盛花期花朵多，花期長，觀賞價值極高，深受人們喜愛。隨著櫻花在園林綠化建設中的大量應用，市場對櫻花工程苗的需求越來越大，常規(guī)傳統(tǒng)的育苗方法已經遠遠不能滿足生產上的要求。隨著現(xiàn)代生物技術的發(fā)展，利用植物細胞的全能性進行組織快繁培養(yǎng)，可以大大縮短育種周期和提高繁育系數(shù)，而且能保持親本的優(yōu)良性狀，提升櫻花種苗的質量，為市場上快速大規(guī)模提供櫻花工程苗成為可能，推動我國櫻花產業(yè)化發(fā)展。

1、材料與方法

1.1材料

1.1.1外植體選擇

草櫻是櫻花的一個品種，它是多年生薔薇科櫻屬植物，種子繁育比較困難，一般組織培養(yǎng)采用草櫻嫩枝繁殖。本實驗材料選以3月上旬的草櫻嫩枝為外植體。

1.1.2主要試劑

實驗所用藥品均為國產試劑（AR級）。

1.1.3培養(yǎng)基

分誘導增殖培養(yǎng)基以及生根培養(yǎng)基，前者為： MS+NAA 0.2 mg/L+6-BA 0.1mg/L+白糖30g/L+生物炭3g/L，pH5.8，后者為：1/2MS+IBA 1.0 g/L+白糖30g/L，pH5.8。

1.2方法

1.2.1芽的誘導培養(yǎng)

剪取帶有腋芽草櫻的嫩枝，用肥皂水清洗后以自來水沖洗1 h，放置于超凈工作臺上用75%酒精消毒30 s ，10%次氯酸鈉消毒6 min，，無菌水反復沖洗4次，，再用無菌濾紙吸干水分，最后接種至誘導增殖培養(yǎng)基。每一瓶培養(yǎng)基接種2-3個嫩枝，放置在組培室中，每半個月?lián)Q一次培養(yǎng)基，光照強度設置為2000 lux，溫度設置為25℃，濕度設置為80%，光照和黑暗時間設定為16 h/ 8 h。

1.2.2生根培養(yǎng)

從嫩枝上將誘導出的幼芽用滅菌刀切下來，轉接到生根培養(yǎng)基中，光照強度設置為2000 lux，溫度設置為25℃，濕度設置為80%，光照和黑暗時間設定為16 h/ 8 h。

2、結果

組培快繁實驗共接種100瓶，污染15瓶，污染率為15%。誘導增殖出芽65瓶，誘導率為65%，死亡20瓶，死亡率為20%。最終成活生根50瓶，生根率為50%。

由于草櫻為多年生長植物，外植體滅菌難度較高。75%酒精和高濃度的次氯酸鈉會使組織細胞殺死，采用75%濃度的酒精滅菌30s，結合10%次氯酸鈉滅菌 6 min，既能殺死細菌又可以保持細胞活性，消毒時間小于5min時污染率會顯著提高，而消毒大于8 min 則植物細胞死亡率明顯提高。

根據(jù)實驗觀察，將含有腋芽的外植體放在誘導培養(yǎng)基上培養(yǎng)15 d 左右開始出現(xiàn)萌動，每個嫩枝都會展開新葉，30 d左右放在增殖培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)，到2個月時，幼苗的長度可達到3.0 cm，此時可以進行草櫻的誘導生根培養(yǎng)[1]。長出約3-5 cm 的幼苗從外植體切下，轉移到生根培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)。將已經生根的幼苗移栽到基質中，并蓋上塑料杯保濕在光照培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，1-2周后轉移至人工氣候室培養(yǎng)。

3、討論

近年來，隨著園林綠化市場的發(fā)展，人們對觀花品種的需求量不斷加大，櫻花由于其花色特別受人們喜歡，因此櫻花樹種具有較大的市場潛力。櫻花花色鮮艷，觀賞性極高，開發(fā)其組織培養(yǎng)技術不但可以保護櫻花種質資源，也為其今后的產業(yè)化開發(fā)利用提供了可能[2]。

對于櫻花組織培養(yǎng)研究來說，消毒方法是組培快繁體系建立的關鍵[3]。本研究中，以帶有腋芽放入多年生嫩莖為外植體，用75%酒精消毒30s 和10%次氯酸鈉消毒6min，污染率明顯減少[4]。篩研究結果顯示，借助芽誘導增殖培養(yǎng)基可以誘導出芽，成功率為65%，利用生根培養(yǎng)基生根，生根率為50%。從結果來看，櫻花誘導率以及生根率總體不高，有很大的提升空間，本研究為櫻花后續(xù)的組織快繁進一步研究提供了一定參考。

參考文獻

[1]王文房，李修嶺等. 櫻花花柄的組織培養(yǎng)[J]. 安徽農業(yè)科學， 2006， 34（ 22） ： 5839-5841.

[2]龔玉蓮，龔莉紅，杜馥燕，等. 朱櫻花愈傷組織的誘導. 廣州教育學院學報[J].2006 （3）：75-77.

[3]李艷敏，孟月娥，趙秀山，等.赤霉素對櫻花組培苗壯苗及生根的影響[J]. 園藝學報，2012（39增刊）： 2749.

[4]劉國順， 楊麗， 董卉卉， 等. 獨花蘭組織培養(yǎng)研究[J]. 安徽農業(yè)科學， 2003， 41（2）： 9195-9196.