子宮肌瘤組織中PCNA、EGFR的表達(dá)特點及與患者病理學(xué)特征的關(guān)系

陶偉華，孫紅娜，歐陽璐璐

（濮陽市油田總醫(yī)院，河南 濮陽 457001）

流行病學(xué)研究證實, 子宮肌瘤的發(fā)病率可達(dá)294~509/1 萬女性左右[1]。臨床上子宮肌瘤的發(fā)生，能夠?qū)е禄颊咴陆?jīng)紊亂癥狀的出現(xiàn),并能夠增加直腸膀胱壓迫癥狀的發(fā)生風(fēng)險[2,3]。在探討子宮肌瘤發(fā)病機(jī)制的過程中,可以發(fā)現(xiàn)生物學(xué)蛋白或者細(xì)胞因子的改變,能夠通過影響到平滑肌細(xì)胞的增殖和凋亡,進(jìn)而促進(jìn)平滑肌細(xì)胞的纖維化和間質(zhì)的增生過程。增殖細(xì)胞核抗原（PCNA）的表達(dá)上升，能夠通過提高癌細(xì)胞核DNA 的增殖速度，進(jìn)而提高癌細(xì)胞擴(kuò)增水平，促進(jìn)平滑肌間質(zhì)細(xì)胞的成熟[4]；表皮生長因子受體（EGFR）的表達(dá)上升，能夠通過提高局部平滑肌組織的血流灌注水平,進(jìn)而提高子宮平滑肌異常病變組織的血氧含量,進(jìn)而促進(jìn)了平滑肌細(xì)胞的增生[5]。部分研究者探討了EGFR 或者PCN A 在生殖系統(tǒng)惡性腫瘤患者中的表達(dá)情況，認(rèn)為EGFR 或者PCNA 的表達(dá)上升與惡性腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)[6]，但缺乏對于EGFR 或者PCNA 的表達(dá)與子宮肌瘤的關(guān)系研究。為了揭示EGFR 或者PCNA 的表達(dá)子宮肌瘤的關(guān)系，從而為臨床上子宮肌瘤的病情評估或者診療提供理論基礎(chǔ),本次研究選取我院2017 年1 月至2017 年12 月收集的120例子宮肌瘤婦女, 探討了病灶組織中EGFR 或者PCNA 的表達(dá)情況及其與患者臨床病理特征的關(guān)系，報告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取我院2017 年 1 月至2017 年12 月收集的120 例子宮肌瘤婦女作為病例組、120例健康婦女作為健康組。

病例組，年齡 30~52 歲，平均為 42.6±8.6 歲，體質(zhì)量指數(shù)(BMI)21.8±2.3kg/m2,發(fā)增生期 63 例、分泌期57 例；其中肌瘤多發(fā)65 例、單發(fā)55 例；肌瘤最大徑≥5cm 63 例、<5cm 57 例。健康組，年齡 30~53 歲,平均為 41.6±9.3 歲,BMI 22.1±2.4kg/m2,發(fā)增生期 67 例、分泌期 53 例。兩組婦女的年齡、BMI、增生期、分泌期構(gòu)成情況差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.0 5）。

納入標(biāo)準(zhǔn)：⑴子宮肌瘤患者的診斷標(biāo)準(zhǔn)參考《婦產(chǎn)科學(xué)》第八版中的標(biāo)準(zhǔn)；⑵年齡30~52 歲；⑶子宮肌瘤經(jīng)腹部超聲檢查證實;⑷對照組為健康婦女；⑸本研究獲得醫(yī)學(xué)倫理委員會的批準(zhǔn),研究對象知情同意。

排除標(biāo)準(zhǔn)：⑴伴有其他類型的婦科惡性腫瘤；⑵長期使用糖皮質(zhì)激素類藥物；⑶長期使用免疫抑制劑；⑷伴有全身感染性疾?。虎深愶L(fēng)濕、結(jié)締組織疾病。

1.2 免疫組化染色方法 采用石蠟進(jìn)行連續(xù)性切片,脫蠟至水后采用H2O2室溫下孵育10min，磷酸鹽緩沖液沖洗3 次,每日3~5min，8%的蛋白粉封閉液（商品名：BSA 購自南京博奧生物科技公司），封閉2h,倒去封閉液后加入一抗(兔來源 濃度1：1000~1500)，4℃冰箱過夜,磷酸鹽緩沖液沖洗 3 次，每日3~5min，加入二抗（鼠來源 1：400~500），室溫孵育20~30min，磷酸鹽緩沖液沖洗3 次，每日3~5min，加入辣根酶或堿性磷酸酶的標(biāo)記物, 室溫孵育10 min，磷酸鹽緩沖液沖洗3 次，每日3~5min，滴加顯色劑（DAB 購自南京博奧生物科技公司），復(fù)染，脫水，封片。

1.3 結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn) 免疫組化結(jié)果判定：增殖細(xì)胞核抗原（PCNA）、表皮生長因子受體（EGFR）的陽性著色表達(dá)于平滑肌細(xì)胞核中，呈黃色、棕黃色、褐色表達(dá)，⑴根據(jù)著色強(qiáng)度：0 分為無色、1 分為淡黃色、2 分為棕黃色、3 分為褐色、黑色；⑵根據(jù)陽性細(xì)胞比例：陽性細(xì)胞數(shù)目所占比例≤10%為1分、陽性細(xì)胞所占比例11%～50%為2 分、陽性細(xì)胞數(shù)51%～75%為3 分、陽性細(xì)胞數(shù)所占比例>75%為4 分，兩種積分相乘總分<3 分為陰性、≧3 分為陽性。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者標(biāo)本中的 PCNA、EGFR 表達(dá)比較病例組肌瘤組中的PCNA、EGFR 表達(dá)陽性率分別為80.00%、62.50%，健康婦女子宮肌層組織中的PCNA、EGFR 表達(dá)陽性率為 45.00%、15.83%，兩組比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），見表1。

表1 兩組患者標(biāo)本中的PCNA、EGFR 表達(dá)比較[n（%）]

2.2 不同肌瘤數(shù)目、大小的肌瘤組織中的PCNA 表達(dá)比較 在不單發(fā)與多發(fā)、肌瘤最大徑≥5cm 或<5cm 的肌瘤組織中的PCNA 陽性表達(dá)率差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），見表2。

表2 不同肌瘤數(shù)目、大小的肌瘤組織中的PCNA 表達(dá)比較

2.3 不同肌瘤數(shù)目、大小的肌瘤組織中的EGFR 表達(dá)比較 多發(fā)肌瘤、肌瘤最大徑≥5cm 肌瘤組織中的EGFR 陽性表達(dá)率高于肌瘤單發(fā)、肌瘤最大徑<5cm 的肌瘤組織，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），見表3。

表3 不同肌瘤數(shù)目、大小的肌瘤組織中的EGFR 表達(dá)比較

2.4 子宮肌瘤組織中的EGFR、PCNA 表達(dá)的相關(guān)性 子宮肌瘤組織中的EGFR 陽性表達(dá)與PCNA陽性表達(dá)呈顯著的正相關(guān)系 （Spearman 秩相關(guān)系數(shù)=0.387，P=0.000<0.05），見表4。

表4 子宮肌瘤組織中的EGFR、PCNA 表達(dá)的相關(guān)性

3 討論

臨床上性激素受體的敏感性改變或者性激素水平的波動，均能夠促進(jìn)子宮肌瘤的發(fā)生，特別是在年齡大于45 歲的育齡期女性人群中，子宮肌瘤的發(fā)病率可進(jìn)一步的上升[7]。臨床上子宮平滑肌瘤的發(fā)生，能夠?qū)е略陆?jīng)量增多、繼發(fā)性貧血或者尿頻尿急等臨床癥狀的出現(xiàn),導(dǎo)致患者生活質(zhì)量的顯著下降，并增加了遠(yuǎn)期子宮肌瘤變性的風(fēng)險[8,9]?，F(xiàn)階段臨床上子宮肌瘤治療后,患者的復(fù)發(fā)率仍然較高,而本次研究對于子宮肌瘤患者病灶組織中EGF R 或者PCNA 的表達(dá)分析研究，具有下列幾個方面的現(xiàn)實意義：⑴能夠為臨床上子宮肌瘤的發(fā)病病因的研究提供參考,從而為高危人群的篩查和隨訪提供依據(jù)；⑵能夠為揭示子宮肌瘤的復(fù)發(fā)機(jī)制提供參考，從而降低子宮肌瘤治療后的復(fù)發(fā)風(fēng)險。

EGFR 是生長因子家族成員，其能夠通過結(jié)合血管內(nèi)皮細(xì)胞受體,提高新生血管內(nèi)皮細(xì)胞的遷移和移行能力，促進(jìn)新生血管的形成。EGFR 的表達(dá)上升能夠提高平滑肌細(xì)胞的血流灌注水平,提高平滑肌細(xì)胞DNA 的擴(kuò)增速度，進(jìn)而導(dǎo)致平滑肌細(xì)胞持續(xù)性的自我增殖?；A(chǔ)方面的研究還認(rèn)為，EGFR 的表達(dá)上升能夠?qū)е缕交〖?xì)胞細(xì)胞周期的紊亂,導(dǎo)致其快速跨越G0 期能力的顯著提高[10]；PCNA 是細(xì)胞核增殖相關(guān)因子，其不僅能夠反應(yīng)細(xì)胞的增殖狀態(tài),同時還能夠評估細(xì)胞的成熟程度和分裂的風(fēng)險。PCNA 的上升能夠?qū)е缕交〖?xì)胞間質(zhì)成分增生的發(fā)生,導(dǎo)致間質(zhì)成分纖維化和成熟能力的增強(qiáng)[11]。部分研究者探討了EGFR 的表達(dá)與子宮肌瘤的關(guān)系,認(rèn)為EGFR 的表達(dá)與子宮肌瘤的關(guān)系密切相關(guān)[12]，但缺乏對于PCNA 的表達(dá)與子宮肌瘤的關(guān)系研究。

本次研究發(fā)現(xiàn), 在子宮肌瘤病灶組織中,PCNA、EGFR 蛋白的表達(dá)陽性率均明顯的上升，高于對照組，差異較為明顯，表明PCNA、EGFR 的表達(dá)與子宮肌瘤的發(fā)生密切相關(guān)，PCNA、EGFR 的高表達(dá)可能參與到了子宮肌瘤的病情進(jìn)展過程中。通過匯集不同的相關(guān)文獻(xiàn),筆者認(rèn)為這主要由于PCNA、EGFR 的下列幾個方面的作用有關(guān)[13,14]：⑴PCNA 的表達(dá)上升能夠提高細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄基因的活性，提高平滑肌細(xì)胞的增殖速度；⑵EGFR 的表達(dá)上升，不僅能夠提高新生血管的形成速度，增加平滑肌組織的血流灌注,同時還能夠提高平滑肌細(xì)胞間質(zhì)成分的增生水平。曹麗娟等[15]研究者也認(rèn)為，在子宮肌瘤患者中，EGFR 的表達(dá)陽性率可平均上升30%以上，特別是在合并有明顯的月經(jīng)量改變或者多發(fā)性子宮肌瘤患者中，EGFR 的表達(dá)陽性率的上升更為明顯。在探討PCNA、EGFR 的表達(dá)與子宮肌瘤臨床病理特征關(guān)系的過程中可以發(fā)現(xiàn)PCNA的表達(dá)與子宮肌瘤的臨床病理特征并無明顯的關(guān)系,提示PCNA 的表達(dá)并不能影響到子宮肌瘤的數(shù)量或者直徑大小，但部分研究者認(rèn)為，在多發(fā)性子宮肌瘤患者中，PCNA 的表達(dá)濃度上升較為明顯，本次研究并無發(fā)現(xiàn)PCNA 的表達(dá)與子宮肌瘤數(shù)量的關(guān)系，存在不同的臨床結(jié)論，主要由于PCNA 蛋白的檢測陽性率或者檢測時機(jī)的不同有關(guān);在探討EGFR 的表達(dá)與子宮肌瘤臨床病理關(guān)系的過程中，可以發(fā)現(xiàn)在多發(fā)性肌瘤或者肌瘤直徑較大的患者中，EGFR 的表達(dá)明顯的上升, 高于單發(fā)組或者直徑較小組患者，差異較為明顯，提示了臨床上可以通過隨訪EGFR 的表達(dá), 進(jìn)而評估子宮肌瘤的病情。最后，本次研究發(fā)現(xiàn)，PCNA、EGFR 的表達(dá)具有一定的相關(guān)系,提示PCNA、EGFR 在影響到子宮肌瘤的病情進(jìn)展過程中可能發(fā)揮了一定的協(xié)同作用，但其具體的機(jī)制仍然需要深入探討。

綜上所述, 在子宮肌瘤患者中，PCNA、EGFR的表達(dá)陽性率均明顯的上升，EGFR 的表達(dá)與子宮肌瘤的數(shù)量或者肌瘤的大小密切相關(guān), 同時PCNA、EGFR 的表達(dá)同樣具有一定的關(guān)系。后續(xù)臨床相關(guān)研究可以探討PCNA、EGFR 的表達(dá)與子宮肌瘤復(fù)發(fā)的關(guān)系。