老年癡呆患者血清miR-9、M-CSF及Hcy水平變化及其意義

張蕾，鄒旺輝，李歡

（河南省職工醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，河南 鄭州 450000）

隨著人口老齡化進(jìn)程,老年癡呆已成為嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問題。阿爾茨海默病、血管性癡呆均是老年癡呆的主要類型，可引起漸進(jìn)性記憶障礙、認(rèn)知功能障礙、人格改變等神經(jīng)精神癥狀，嚴(yán)重影響患者的生存質(zhì)量[1]。加強(qiáng)對(duì)老年癡呆的識(shí)別和預(yù)防有助于延緩病程進(jìn)展、改善患者的預(yù)后。

微小 RNA-9（microRNA-9，miR-9）特異性表達(dá)于神經(jīng)元,可影響神經(jīng)突觸分支及樹突發(fā)育[2]。巨噬細(xì)胞刺激集落因子 (macrophage-stimulating colony factor，M-CSF) 可活化神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞而影響神經(jīng)系統(tǒng)功能[3]。同型半胱氨酸（homocysteine，Hcy）可刺激氧自由基產(chǎn)生而導(dǎo)致神經(jīng)細(xì)胞損傷[4]。上述三項(xiàng)指標(biāo)在多種神經(jīng)系統(tǒng)疾病中發(fā)揮重要的作用,但其在老年癡呆患者體內(nèi)的變化相關(guān)研究較少。本研究探討了老年癡呆患者血清miR-9、M-CSF、Hcy 的變化及其意義，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取 2015 年 7 月至 2018 年 8 月我院收治的82 例老年癡呆患者作為病例組, 同期非老年癡呆對(duì)象82 例作為對(duì)照組。病例組,年齡 66~82 歲，平均 75.4±6.9 歲，男 49 例、女33 例；合并疾?。焊哐獕?49 例、糖尿病 26 例、冠心病 8 例，吸煙 20 例；受教育年限 7.8±2.6 年。對(duì)照組,年齡 63~80 歲，平均 75.2±7.0 歲，男 44 例、女38 例；合并疾病：高血壓 40 例、糖尿病 22 例、冠心病 5 例，吸煙 23 例，受教育年限 8.0±3.0 年。兩組研究對(duì)象的年齡、性別、合并疾病、吸煙率、受教育年限比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

納入標(biāo)準(zhǔn)：⑴老年癡呆的診斷標(biāo)準(zhǔn)參考2011年新版美國神經(jīng)病學(xué)研究所和老年性癡呆相關(guān)疾病學(xué)會(huì)制定的診斷標(biāo)準(zhǔn)[5]；⑵老年癡呆患者的MMS E 評(píng)分 14～23 分；⑶患者年齡≥65 歲。

排除標(biāo)準(zhǔn)：⑴腦梗死、腦出血、短暫性腦缺血發(fā)作；⑵顱內(nèi)惡性腫瘤及放化療患者；⑶既往具有顱腦創(chuàng)傷、手術(shù)病史；⑷伴有嚴(yán)重的肝腎功能疾?。虎删窦膊?；⑹其他原因引起的癡呆（Pick 病、路易體癡呆、額顳葉癡呆、酒精和藥物引起的癡呆等）。

本研究獲得醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)的批準(zhǔn)及患者家屬知情同意。

1.2 血清 miR-9、M-CSF 及 Hcy 水平檢測(cè)方法 所有研究對(duì)象均于清晨抽取空腹靜脈血6ml，取部分血樣13000r/min 離心10min,收集血清采用miR-9試劑盒提取血清中miRNA, 采用反轉(zhuǎn)錄試劑盒將RNA 反轉(zhuǎn)錄為cDNA, 置于-80℃冰箱凍存。RTPCR 引物由廣州銳博公司設(shè)計(jì)合成, 上游序列為：5’-TAGCTCCACAGAGTGTTCC-3’; 下游序列為：5’-TCCTCTGGTGCTGGTCAGTC-3’, 相應(yīng)操作參考PCR 儀器說明書進(jìn)行。結(jié)果采用CFX manager 3.0 軟件進(jìn)行相對(duì)定量表達(dá)分析。

部分血樣2500r/min 離心15min，收集血清采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)M-CSF 及Hcy 水平，試劑盒生產(chǎn)廠家：上海東方順宇生物科技有限公司，檢測(cè)儀器：美國貝克曼AU680 型全自動(dòng)生化分析儀。

2 結(jié)果

2.1 病例組和對(duì)照組的血清miR-9、M-CSF 及Hcy水平及MMSE 評(píng)分比較 病例組患者的血清miR-9、M-CSF 及 Hcy 水平顯著的高于對(duì)照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），病例組的MMSE 評(píng)分低于對(duì)照組（P<0.05），見表1。

2.2 病例組血清 miR-9、M-CSF 及 Hcy 水平與MMSE 評(píng)分的相關(guān)性 老年癡呆患者的血清miR-9、M-CSF 及 Hcy 水平與 MMSE 評(píng)分均呈負(fù)相關(guān)關(guān)系（P<0.05）；見表2。

表1 病例組和對(duì)照組的血清miR-9、M-CSF及 Hcy 水平及 MMSE 評(píng)分比較（）

表1 病例組和對(duì)照組的血清miR-9、M-CSF及 Hcy 水平及 MMSE 評(píng)分比較（）

組別 n miR-9（2-△△ct）M-CSF（pg/ml）病例組對(duì)照組t 值P 值82 82 8.26±1.20 5.57±0.96 15.851 0.000 632.8±151.8 457.1±94.2 8.906 0.000 Hcy（μmol/L）20.56±3.05 14.26±2.84 13.689 0.000 MMSE 評(píng)分（分）16.88±2.04 25.81±2.19-27.018 0.000

2.3 血清 miR-9、M-CSF 及 Hcy 水平對(duì)于老年癡呆的輔助診斷價(jià)值 繪制ROC 曲線，選取具有最大診斷指數(shù)對(duì)應(yīng)的診斷學(xué)指標(biāo)，血清miR-9、MCSF 及Hcy 水平單獨(dú)及聯(lián)合應(yīng)用檢測(cè)對(duì)于老年癡呆診斷的價(jià)值見表3、圖1。

表2 血清 miR-9、M-CSF 及 Hcy 水平與 MMSE 評(píng)分

圖1 血清 miR-9、M-CSF 及 Hcy 水平檢測(cè)對(duì)于老年癡呆診斷價(jià)值ROC 曲線圖

3 討論

老年癡呆是指患者在正常意識(shí)下發(fā)生的認(rèn)知功能障礙綜合征,以老年斑、神經(jīng)元喪失、血管淀粉樣病變、神經(jīng)元纖維纏結(jié)等為主要病理學(xué)特征[6]。其發(fā)病原因比較復(fù)雜，已有的研究認(rèn)為與年齡、遺傳、神經(jīng)傳遞障礙、神經(jīng)細(xì)胞骨架改變、炎癥反應(yīng)等因素有關(guān)[7]。老年癡呆早期發(fā)病隱匿，不易察覺，當(dāng)出現(xiàn)明顯認(rèn)知功能障礙癥狀時(shí)病情已比較嚴(yán)重,此時(shí)的干預(yù)效果較差。因此，早期識(shí)別并采取有效措施有助于控制病程進(jìn)展[8,9]。

老年癡呆早期特異性預(yù)警及診斷的生物學(xué)標(biāo)志物是近年來臨床研究的熱點(diǎn)，血清中miRNA 含量穩(wěn)定，可作為多種疾病的診斷標(biāo)志物[10]。miR-9可通過調(diào)控神經(jīng)突觸小泡磷酸酶 1、突觸孔蛋白等基因表達(dá)而影響神經(jīng)遞質(zhì)功能，進(jìn)而影響神經(jīng)元活性，并能通過調(diào)控糖皮質(zhì)激素感觸因子基因表達(dá)而破壞神經(jīng)元之間運(yùn)輸功能[11]。本研究中老年癡呆患者的血清miR-9 水平顯著高于非老年癡呆患者。

表3 血清miR-9、M-CSF 及Hcy 水平檢測(cè)對(duì)于老年癡呆診斷價(jià)值

M-CSF 由星形膠質(zhì)細(xì)胞、小膠質(zhì)細(xì)胞合成，可與神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞同族受體結(jié)合而啟動(dòng)趨化因子，導(dǎo)致細(xì)胞增殖、增加小膠質(zhì)細(xì)胞清道夫受體、脂蛋白E 表達(dá),促進(jìn)前炎癥因子對(duì)神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的損傷作用[12,13]。本研究中老年癡呆患者的血清M-CSF 水平顯著的高于非老年癡呆患者。

Hcy 是由指甲硫氨酸代謝脫去甲基的衍生物，可促進(jìn)氧自由基生成、鈣離子超載而產(chǎn)生神經(jīng)毒性作用,并增強(qiáng)神經(jīng)元對(duì)毒性淀粉樣β 蛋白的敏感性[14]。Hcy 高表達(dá)可損害血管內(nèi)皮功能，影響脂質(zhì)代謝而引起腦內(nèi)小動(dòng)脈粥樣硬化,導(dǎo)致腦血管缺血性損傷而造成認(rèn)知功能障礙[15]。本研究中老年癡呆患者的血清Hcy 水平顯著的高于非老年癡呆患者。

本研究中老年癡呆患者的MMSE 評(píng)分顯著的低于非老年癡呆患者。老年癡呆患者的血清miR-9、M-CSF 及 Hcy 水平與 MMSE 評(píng)分均呈負(fù)相關(guān)關(guān)系。這一結(jié)果提示，老年癡呆患者的血清miR-9、M-CSF 及Hcy 水平顯著升高, 并且與患者認(rèn)知功能損害有關(guān)。血清 miR-9、M-CSF 及 Hcy 水平越高，患者的認(rèn)知功能水平越差。

本研究通過繪制ROC 曲線, 選取具有最大診斷指數(shù)對(duì)應(yīng)的診斷學(xué)指標(biāo),發(fā)現(xiàn)單獨(dú)應(yīng)用血清miR-9 鑒別診斷老年癡呆的靈敏度為86.17%、特異度為78.02%、漏診率為13.83%、誤診率為21.98%、AUC 值為0.823；單獨(dú)應(yīng)用血清M-CSF 鑒別診斷老年癡呆的靈敏度為84.53%、特異度為74.09%、漏診率為 15.47%、誤診率為 25.91%、AUC 值為0.811；單獨(dú)應(yīng)用血清Hcy 鑒別診斷老年癡呆的靈敏度為66.00%、特異度為75.86%、漏診率為34.00%、誤診率為 24.14%、AUC 值為 0.720；血清 miR-9、M-CSF 及Hcy 水平聯(lián)合檢測(cè)鑒別診斷老年癡呆的靈敏度為96.91%、特異度為92.28%、漏診率為3.09%、誤診率為 7.72%、AUC 值為 0.943。這一結(jié)果提示,聯(lián)合檢測(cè)三項(xiàng)指標(biāo)對(duì)于鑒別診斷老年癡呆的靈敏度、特異度優(yōu)于單獨(dú)檢測(cè)三項(xiàng)指標(biāo)，具有更好的診斷價(jià)值。

綜上所述,老年癡呆患者的血清miR-9、M-CS F 及Hcy 水平顯著的升高,并且與患者認(rèn)知功能損害相關(guān),三項(xiàng)指標(biāo)聯(lián)合應(yīng)用對(duì)于老年癡呆的輔助診斷具有一定的價(jià)值。