P53蛋白、Rictor蛋白表達(dá)水平與子宮內(nèi)膜癌病理特征的關(guān)系

王麗娟，賀全勤，趙盼

（駐馬店中心醫(yī)院婦科，河南 駐馬店463000）

流行病學(xué)研究發(fā)現(xiàn),子宮內(nèi)膜癌的發(fā)病率可接近在586~687/1 萬(wàn)人左右[1]，在合并有相關(guān)高危因素的人群中, 子宮內(nèi)膜癌的發(fā)病率可持續(xù)性的上調(diào)。臨床上子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生，能夠?qū)е禄颊哌h(yuǎn)期生存時(shí)間的縮短,增加患者的腫瘤惡病質(zhì)的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)[2]。P53 蛋白能夠通過(guò)提高癌細(xì)胞核DNA 的分裂速度，促進(jìn)癌細(xì)胞的異常轉(zhuǎn)錄和分化，進(jìn)而導(dǎo)致子宮內(nèi)膜腺體細(xì)胞惡性病變的發(fā)生[3]；Rictor 蛋白是mTOR 信號(hào)通路上的效應(yīng)分子，其能夠通過(guò)提高癌細(xì)胞的G1/S 期細(xì)胞比例,影響到P53 蛋白的水平，進(jìn)而促進(jìn)早期惡性腫瘤細(xì)胞的發(fā)生和轉(zhuǎn)移[4]。部分研究者探討了P53 蛋白的表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌的關(guān)系，認(rèn)為P53 蛋白的表達(dá)上升與子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生密切相關(guān)[5],但缺乏對(duì)于Rictor 蛋白的表達(dá)分析研究。為了揭示P53 蛋白、Rictor 蛋白的表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌的病情關(guān)系, 本次研究選取我院2016 年3 月至2017 年2 月收集的90 例子宮內(nèi)膜癌組織，探討了P53 蛋白、Rictor 蛋白的表達(dá)及其與患者的病情關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取我院 2016 年3 月-2017 年2月收集的90 例子宮內(nèi)膜癌組織（內(nèi)膜癌組）、正常子宮內(nèi)膜組織90 例（對(duì)照組）。

內(nèi)膜癌組，年齡 39~64 歲，平均 53.5±8.2 歲，F(xiàn)IGO 分期：Ⅰ期 20 例、Ⅱ期 38 例、Ⅲ期 26 例、Ⅳ期6 例；組織學(xué)分化：高分化29 例、中分化38 例、低分化23 例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽(yáng)性39 例；血管浸潤(rùn)15例。對(duì)照組，年齡 41~65 歲，平均 54.0±8.8 歲。兩組研究對(duì)象的年齡比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

納入標(biāo)準(zhǔn)：⑴子宮內(nèi)膜癌患者的診斷標(biāo)準(zhǔn)參考中華醫(yī)學(xué)會(huì)制定的標(biāo)準(zhǔn)[6]；⑵患者年齡≤65 歲；⑶所有子宮內(nèi)膜癌患者的診斷均經(jīng)過(guò)手術(shù)后病理學(xué)檢查證實(shí)；⑷正常子宮內(nèi)膜組織標(biāo)本來(lái)源于卵巢或子宮肌瘤手術(shù)獲取的正常子宮內(nèi)膜標(biāo)本；⑸本研究經(jīng)醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)的批準(zhǔn)。

排除標(biāo)準(zhǔn)：⑴伴有其他部位惡性腫瘤、放化療病史；⑵伴有其他感染性疾??；⑶免疫性疾病；⑷近半年具有激素相關(guān)藥物治療史。

1.2 免疫組化檢測(cè)方法 石蠟包埋，連續(xù)性切片厚度3μm，60℃烤片 60min，常規(guī)脫水后，采用 EDTA進(jìn)行抗原修復(fù)，加入10μl 蒸餾水，加入10%過(guò)氧化氫 5μl，室溫下孵育 30min,磷酸鹽緩沖液（PBS）洗滌 3 次(每次 3min),加入P53 蛋白、Rictor 蛋白的單克隆抗體(1：1000 購(gòu)自羅氏檢測(cè)公司),37℃孵育60min，PBS 洗滌 3 次(每次 3min),分別加入 HRP 標(biāo)記的P53 蛋白、Rictor 蛋白二抗 （1：2000 購(gòu)自羅氏公司），37℃孵育 20min,PBS 洗滌3 次 (每次 3min),加入DAB 后,PBS 沖洗和復(fù)染, 脫水后在顯微鏡下進(jìn)行觀察。

1.3 免疫組化結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn) 免疫組化染色讀片判斷標(biāo)準(zhǔn)：Rictor 蛋白的陽(yáng)性染色為黃色、棕黃色甚至更深的顏色且定位在子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)，P53 蛋白的陽(yáng)性染色為黃色、棕黃色甚至更深的顏色且定位在子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞的細(xì)胞核內(nèi)；⑴依據(jù)染色深淺：無(wú)色（0 分）、淡黃色（1 分）、染色為棕黃色（2 分）、如果染色為褐色或者黑色（3分）；⑵依據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞占比進(jìn)行評(píng)分：占比范圍≤10%（1 分）、占比范圍 11%～50%（2 分）、占比范圍51%～75%（3 分）、占比范圍>75%（4 分），染色深淺評(píng)分與陽(yáng)性細(xì)胞占比評(píng)分之乘積總分<3 分為陰性、≧3 分為陽(yáng)性。

2 結(jié)果

2.1 兩組標(biāo)本中的P53 蛋白、Rictor 蛋白陽(yáng)性表達(dá)率比較 子宮內(nèi)膜癌組織中的P53 蛋白、Rictor 蛋白陽(yáng)性表達(dá)率分別為48.89%、52.22%均顯著的高于對(duì)照組的8.89%、12.22%, 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見(jiàn)表1、圖1、圖2。

表1 兩組標(biāo)本中的P53 蛋白、Rictor 蛋白陽(yáng)性表達(dá)率比較（）

表1 兩組標(biāo)本中的P53 蛋白、Rictor 蛋白陽(yáng)性表達(dá)率比較（）

組別 n P53 蛋白陽(yáng)性 陰性Rictor 蛋白陽(yáng)性 陰性子宮內(nèi)膜癌組對(duì)照組χ2 值P 值90 90 44(48.89)8(8.89)35.048 0.000 46(51.11)82(91.11)47(52.22)11(12.22)32.968 0.000 43(47.78)79(87.78)

圖1 P53 蛋白免疫組化結(jié)果，A 為正常子宮內(nèi)膜組織、B 為子宮內(nèi)膜癌組織，可見(jiàn)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)中的棕色顆粒表達(dá)明顯增多較正常子宮內(nèi)膜細(xì)胞（×400）

圖2 Rictor 蛋白免疫組化結(jié)果，A 為正常子宮內(nèi)膜組織、B 為子宮內(nèi)膜癌組織，可見(jiàn)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞細(xì)胞核中的棕色顆粒表達(dá)明顯增多較正常子宮內(nèi)膜細(xì)胞（×400）

2.2 不同病理學(xué)特征的子宮內(nèi)膜癌組織中的P53蛋白、Rictor 蛋白陽(yáng)性表達(dá)率比較 不同F(xiàn)IGO 分期、不同組織學(xué)分化程度、是否發(fā)生脈管浸潤(rùn)的子宮內(nèi)膜癌組織中的P53 蛋白陽(yáng)性表達(dá)率差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；不同F(xiàn)IGO 分期、不同組織學(xué)分化程度、是否發(fā)生脈管浸潤(rùn)、是否發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移子宮內(nèi)膜癌患者的Rictor 蛋白陽(yáng)性表達(dá)率比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；見(jiàn)表2、表3。

表2 不同病理學(xué)特征的子宮內(nèi)膜癌組織中的P53 蛋白陽(yáng)性表達(dá)率比較

3 討論

子宮內(nèi)膜腺體細(xì)胞的異常增殖或者分裂，能夠顯著促進(jìn)子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生，特別是在肥胖、吸煙或者合并有雌激素受體敏感性改變的人群中，子宮內(nèi)膜癌的發(fā)病率可進(jìn)一步的上升[7]。臨床上的觀察發(fā)現(xiàn), 子宮內(nèi)膜癌患者的5 年生存率不足45%，其治療后的遠(yuǎn)期無(wú)瘤生存時(shí)間或者無(wú)進(jìn)展生存期也無(wú)明顯的改善[8,9]?，F(xiàn)階段缺乏對(duì)子宮內(nèi)膜癌病情評(píng)估的分子指標(biāo), 雖然P53 等腫瘤標(biāo)志物，能夠在子宮內(nèi)膜癌的診療過(guò)程中發(fā)揮作用，但單獨(dú)P53 評(píng)估子宮內(nèi)膜癌的局限性較為明顯。本次研究通過(guò)對(duì)于子宮內(nèi)膜癌患者病灶組織中P53 蛋白、Rictor 蛋白的表達(dá)分析研究, 能夠?yàn)榕R床上子宮內(nèi)膜癌的聯(lián)合評(píng)估提供參考,同時(shí)能夠降低單獨(dú)P53評(píng)估的假陽(yáng)性率。

表3 不同病理學(xué)特征的子宮內(nèi)膜癌組織中的Rictor 蛋白陽(yáng)性表達(dá)率比較

P53 蛋白主要存在于子宮內(nèi)細(xì)胞核內(nèi)部，結(jié)構(gòu)上含有脯氨酸及多重絲氨酸結(jié)構(gòu),其能夠通過(guò)結(jié)合下游糖蛋白配體,進(jìn)而促進(jìn)多種惡性腫瘤信號(hào)通路的激活,促進(jìn)癌細(xì)胞的持續(xù)性浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移過(guò)程。P53蛋白能夠影響到轉(zhuǎn)錄上游啟動(dòng)子的激活程度，進(jìn)而促進(jìn)癌細(xì)胞的異常轉(zhuǎn)錄和翻譯,加劇癌細(xì)胞核基因的突變風(fēng)險(xiǎn)[10]。相關(guān)研究還認(rèn)為，P53 蛋白對(duì)于癌細(xì)胞內(nèi)MAPK 信號(hào)通路的上調(diào)作用，能夠影響到腫瘤細(xì)胞的早期發(fā)生[11]；Rictor 蛋白主要存在于子宮內(nèi)膜細(xì)胞質(zhì)內(nèi), 是mTOR 信號(hào)通路效應(yīng)分子，能夠通過(guò)提高腫瘤細(xì)胞間質(zhì)成分的分解,提高金屬蛋白酶的激活程度,進(jìn)而為腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移提供基礎(chǔ)。Rictor 蛋白對(duì)于癌細(xì)胞周期的調(diào)控作用，能夠影響到癌細(xì)胞跨越G0 期的速度，進(jìn)而干預(yù)到腫瘤的中晚期病情進(jìn)展[12]。部分研究者探討了P53 蛋白的表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌的關(guān)系[13]，但缺乏對(duì)于P53 的表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌的臨床病理特征的分析，同時(shí)缺乏對(duì)于Rictor 蛋白的探討。

本次研究可以發(fā)現(xiàn), 在子宮內(nèi)膜癌病灶組織中,P53 蛋白、Rictor 蛋白的表達(dá)陽(yáng)性率水平均明顯的上升，高于正常對(duì)照組病灶組織，統(tǒng)計(jì)學(xué)差異較為顯著，提示了P53 蛋白、Rictor 蛋白的高表達(dá)，均能夠影響到子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生發(fā)展過(guò)程。試圖探討P53 蛋白、Rictor 蛋白的高表達(dá)對(duì)于腫瘤發(fā)生的影響, 分析可能由于下列病理性因素有關(guān)[14,15]：⑴P53 蛋白的表達(dá)上升, 能夠促進(jìn)癌細(xì)胞內(nèi)NF-KB或者M(jìn)APK 信號(hào)通路的激活,導(dǎo)致癌細(xì)胞的基因錯(cuò)配修復(fù)能力的下降；⑵Rictor 蛋白的表達(dá)上升，能夠干預(yù)到上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)換過(guò)程，提高細(xì)胞的變形能力，進(jìn)而促進(jìn)癌細(xì)胞的粘附和浸潤(rùn)過(guò)程。沈運(yùn)等[11]研究者也發(fā)現(xiàn), 在子宮內(nèi)膜癌病灶組織中，P53 蛋白的表達(dá)陽(yáng)性率可平均上升35%～55%以上，在合并有明顯的盆腔內(nèi)轉(zhuǎn)移或者腹水的患者中，P53 蛋白的表達(dá)陽(yáng)性率可進(jìn)一步的上升。在探討P53 蛋白、Rictor 蛋白的表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌臨床病理特征的關(guān)系過(guò)程中,可以發(fā)現(xiàn)P53 蛋白的高表達(dá)與患者臨床分期、組織學(xué)分級(jí)或者脈管浸潤(rùn)密切相關(guān)，提示了P53 蛋白的表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌的綜合性病情的關(guān)系，這主要由于P53 蛋白的表達(dá)上升，能夠提高癌相比的浸潤(rùn)深度,促進(jìn)其對(duì)于盆腔內(nèi)淋巴結(jié)組織的粘附，進(jìn)而加劇了相關(guān)臨床病理特征的進(jìn)展。而在FIGO 分期較晚、組織學(xué)分化程度較差、發(fā)生脈管浸潤(rùn)、發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者中，Rictor 蛋白的表達(dá)同樣明顯的上升，提示了Rictor 的表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌的病情關(guān)系，這主要由于Rictor 蛋白的表達(dá)上升，能夠?qū)е掳┘?xì)胞的生物學(xué)特征的惡化，進(jìn)而促進(jìn)相關(guān)臨床病理的進(jìn)展。單獨(dú)P53 蛋白、Rictor 蛋白在診斷子宮內(nèi)膜癌的過(guò)程中具有一定的局限性，而通過(guò)聯(lián)合P53 蛋白、Rictor 蛋白，能夠避免單一指標(biāo)靈敏度低導(dǎo)致子宮內(nèi)膜癌病情評(píng)估不足的缺陷。

綜上所述, 在子宮內(nèi)膜癌病灶組織中，P53 蛋白、Rictor 蛋白的表達(dá)陽(yáng)性率均明顯上升, 同時(shí)P 53 蛋白、Rictor 蛋白的表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌的臨床病理特征密切相關(guān)。