高血壓并發(fā)癥中血清S1P變化的臨床意義

季玉娟 ，馬媛 ，彭群新 ，韓清珍 ，周志英

（1.蘇州大學(xué)附屬第一醫(yī)院臨床檢測中心，江蘇 蘇州 215000；2.蘇州市工業(yè)園區(qū)星湖醫(yī)院檢驗科，江蘇 蘇州 215000；3.蘇州高新區(qū)疾病預(yù)防控制中心，江蘇 蘇州 215000）

在2010 年中國高血壓防治指南中顯示我國成人中每5 人就有1 人患高血壓,目前全國估計有3 億高血壓患者[1]。高血壓作為常見的慢性疾病之一，心臟和血管是其病理生理作用的主要靶器官，因此高血壓患者容易并發(fā)2 型糖尿病、冠心病和腦梗死等血管內(nèi)皮功能障礙性疾病以及其他并發(fā)癥，造成更為嚴(yán)重的身體損害[2]。而我們知道在高血壓患者中，血管內(nèi)皮的功能受損尤為顯著，并表現(xiàn)為血管舒張度的減少和血管緊張度的增加,從而促進(jìn)了炎癥和血栓的形成[3]。1－磷酸鞘氨醇（S1P）是機(jī)體代謝內(nèi)源性或飲食中神經(jīng)鞘脂類的中間產(chǎn)物，是一種高活性脂質(zhì)介質(zhì)[4]。S1P 通過細(xì)胞表面G蛋白偶聯(lián)受體家族（S1PRs）激活不同的信號通路，從而發(fā)揮廣泛的生物學(xué)功能, 包括對血管事件發(fā)展,血管緊張度和內(nèi)皮通透性的雙重調(diào)節(jié)作用[5]。這提示S1P 與高血壓及其并發(fā)癥的發(fā)生發(fā)展過程有一定關(guān)系。本研究主要探討S1P 能否成為理想有效的實驗室指標(biāo)，衡量高血壓的嚴(yán)重程度，預(yù)測高血壓及其并發(fā)癥的發(fā)生,以及監(jiān)視高血壓相關(guān)并發(fā)癥的發(fā)生發(fā)展。

1 材料和方法

1.1 一般資料 隨機(jī)收集蘇州大學(xué)附屬第一醫(yī)院2018 年2 月-2018 年5 月收治的高血壓并發(fā)癥患者（其中并發(fā)2 型糖尿病12 例,并發(fā)冠心病14 例，并發(fā)腦梗死12 例），初次診斷高血壓者25 例和健康對照者30 例的血清標(biāo)本。高血壓并發(fā)癥組中男性 20 例，女性 11 例,年齡 34～76 歲。初次診斷高血壓組中男性 15 例,女性 10 例，年齡 30～58 歲。對照組中男性 17 例，女性 13 例，年齡 32～73 歲。

1.2 入組標(biāo)準(zhǔn)

1.2.1 高血壓并發(fā)癥組 ⑴高血壓病診斷標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)《中國高血壓防治指南（2010）》，且高血壓病程大于2 年；⑵并發(fā)2 型糖尿病組診斷標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)《中國2 型糖尿病防治指南（2013）》；⑶并發(fā)冠心病組診斷依據(jù)冠狀動脈造影和特征性心電圖表現(xiàn)；⑷并發(fā)腦梗死組診斷依據(jù)CT 和MRI 成像結(jié)果；⑸無其他高血壓并發(fā)癥；⑹排除單純性高血壓病。

1.2.2 初次診斷高血壓組 高血壓病診斷標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)《中國高血壓防治指南（2010）》，但排除高血壓病史，確診高血壓時間在一周之內(nèi)。

1.2.3 健康對照組 無任何高血壓及其并發(fā)癥病史。

1.3 實驗方法

1.3.1 標(biāo)本處理 使用不含熱原和內(nèi)毒素的真空采血管,操作過程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后，3000r/min 離心10 min 將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離，吸取血清凍存于－80℃環(huán)境中待測。

1.3.2 S1P 的檢測 ELISA 試劑盒購自蘇州格瑞特生物科技有限公司,采用的是雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗方法。標(biāo)本在室溫下均勻地充分解凍后,按廠家說明書進(jìn)行檢測：加樣后加入檢測抗體 100μl，37℃ 恒溫溫育 1h；洗板 5 次后加入底物,避光孵育15min;終止反應(yīng)后,15min 內(nèi)在450nm波長處測定各孔的OD 值。以6 個標(biāo)準(zhǔn)品濃度（nmol／L）和測得的相應(yīng)OD 值繪制線性回歸曲線，按曲線回歸方程計算樣本的S1P 濃度值。

1.3.3 統(tǒng)計學(xué)處理 所有數(shù)據(jù)均應(yīng)用SPSS 11.0 進(jìn)行統(tǒng)計分析處理。所有計量資料符合正態(tài)分布，以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差 （）表示，采用 one－way ANOVA 檢驗比較三組間差異,采用t 檢驗比較兩組間差異,以上分析均認(rèn)為P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。采用pearson 進(jìn)行相關(guān)性分析，r 值越大相關(guān)性越大。健康對照組中S1P 與年齡分析還采用了Kruskal-Wallis test 進(jìn)行分組比較；依據(jù)年齡中位數(shù)進(jìn)行分組后采用了Mann-Whitney U-test 方法分析。

2 結(jié)果

2.1 各組S1P 水平及比較 與對照組相比，高血壓并發(fā)癥組的S1P 水平顯著高于對照組,兩組的均值差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），而初次診斷高血壓組和對照組的均值較為接近，差異無統(tǒng)計學(xué)意義，見表1；與高血壓并發(fā)單一并發(fā)癥組比較,高血壓并發(fā)多種并發(fā)癥組S1P 水平顯著升高（P＜0.05）,見表2。

表1 S1P 水平的組間比較

表2 多并發(fā)癥和單一并發(fā)癥的S1P 水平比較

2.2 S1P 與其他檢驗指標(biāo)的的相關(guān)性分析 Pearson 相關(guān)性分析顯示，在高血壓并發(fā)癥者中，S1P 含量與超敏C 反應(yīng)蛋白（hs-CRP）、中性粒細(xì)胞百分比、中性粒細(xì)胞／淋巴細(xì)胞比(NLR)和凝血酶原時間(PT) 呈正相關(guān)性，r 分別為 0.7913，0.7182，0.793 5，0.8479，與淋巴細(xì)胞百分比成負(fù)相關(guān)（r 為-0.72 59）。

3 討論

高血壓對血管內(nèi)皮細(xì)胞的損傷促進(jìn)炎癥和血栓的形成，是很多并發(fā)癥發(fā)生發(fā)展的根源，在高血壓初期，這些損傷主要集中在細(xì)小動脈，隨著病情的發(fā)展，細(xì)小動脈漸漸發(fā)生硬化，并逐漸累積中等及大動脈出現(xiàn)內(nèi)膜脂質(zhì)沉積,形成粥樣硬化斑塊和血栓。而對血管的損傷由于沒有明顯的癥狀，往往容易被忽視，直至破壞至心、腦、腎等重要器官[6]，發(fā)生冠心病、腦梗死、糖尿病、高血壓腎病等并發(fā)癥時,才會被發(fā)現(xiàn)。因此，如果能有一種或幾種適合的檢測指標(biāo)可以動態(tài)監(jiān)測血管內(nèi)皮的功能,預(yù)防和警示高血壓并發(fā)癥的發(fā)生,對降低高血壓病人的死亡率和提高生存質(zhì)量是至關(guān)重要的。S1P 是鞘磷脂的代謝產(chǎn)物之一，是血清的重要組成成分，也是一種重要的第二信使，當(dāng)細(xì)胞受到外界干擾時，會引起S1P 濃度迅速上升, 從而引起一系列的細(xì)胞反應(yīng)。S1P 的受體主要表達(dá)在血管和免疫系統(tǒng)，尤其在心血管系統(tǒng)中，S1P 被指出是誘發(fā)心血管疾病的關(guān)鍵所在[7]，但是這還缺乏大量的臨床研究支持。本文通過檢測高血壓并發(fā)癥患者血清中的S1P 含量，我們發(fā)現(xiàn)，高血壓并發(fā)癥患者血清中S1P 含量顯著高于健康者,而初次診斷高血壓患者中S1P 含量與健康者相比無差異,并且高血壓并發(fā)多種并發(fā)癥患者血清中S1P 含量顯著高于單一并發(fā)癥者，這提示S1P 的表達(dá)與高血壓造成的血管內(nèi)皮損傷的程度密切相關(guān),對具有較長高血壓病程的并發(fā)癥患者有一定的診斷價值和臨床意義。另外，S1P 在血清中的含量較為穩(wěn)定,我們也發(fā)現(xiàn)在健康對照組中，S1P 不受年齡性別影響，與文獻(xiàn)報道一致[8]，這說明S1P 在健康人群中是一個比較穩(wěn)定的指標(biāo)，有用來預(yù)測高血壓及并發(fā)癥的潛在應(yīng)用價值。

由于S1P 的受體表達(dá)范圍非常廣泛，造成S1P的生物學(xué)功能也非常復(fù)雜，免疫系統(tǒng)相關(guān)疾病、各種炎癥等疾病, 可能都會造成S1P 的非特異性升高，因此需要動態(tài)檢測和與其他指標(biāo)聯(lián)合診斷，才能為高血壓并發(fā)癥的預(yù)測和診斷提供重要參考。本文中我們將S1P 和高血壓并發(fā)癥的一些檢測指標(biāo)，也做了相關(guān)性分析。研究證實CRP 這一炎癥標(biāo)志物是冠心病患者內(nèi)皮依賴性血管功能的獨立決定因素,可以作為評估冠心病患者心血管事件發(fā)生與發(fā)展的指標(biāo)[9,10]。本實驗發(fā)現(xiàn)高血壓并發(fā)癥組的S1P 表達(dá)與hs－CRP 呈顯著正相關(guān)，這可能是因為S1P 在高血壓及其并發(fā)癥發(fā)生發(fā)展中參與了促炎信號的形成[11]。與此同時，我們知道CRP 的特異性不高[12]，而S1P 主要在血管內(nèi)皮細(xì)胞中表達(dá)，這預(yù)示著S1P 的特異性優(yōu)于CRP，有望成為評估高血壓及其并發(fā)癥發(fā)生與發(fā)展的良好指標(biāo)。PT 反應(yīng)人體外源性凝血功能，是評估凝血系統(tǒng)的重要指標(biāo)，Nnenna Adaeze N 等人[13]發(fā)現(xiàn)PT 在單純性高血壓患者中升高,認(rèn)為其可評估高血壓患者的凝血異常并指導(dǎo)患者的降壓治療。本實驗發(fā)現(xiàn)高血壓并發(fā)癥組的S1P 表達(dá)與PT 呈正相關(guān)，這可能是由于凝血系統(tǒng)參與了高血壓作為危險因素導(dǎo)致的動脈粥樣硬化過程。另外，Kilicaslan B 等人[14]在高血壓患者中發(fā)現(xiàn)中性粒細(xì)胞／淋巴細(xì)胞比（NLR）與血壓變化率呈顯著正相關(guān), 且NLR 的測量可用于指示高血壓相關(guān)的不良心血管事件的發(fā)生風(fēng)險，NLR 對心血管疾病和心力衰竭的預(yù)后具有重要意義[15]。本實驗發(fā)現(xiàn)高血壓并發(fā)癥組的S1P 表達(dá)與中性粒細(xì)胞比和NLR 呈高度正相關(guān), 與淋巴細(xì)胞比呈負(fù)相關(guān),這可能是因為S1P 在高血壓并發(fā)癥患者中激活炎癥因子和炎癥細(xì)胞的產(chǎn)生并控制淋巴細(xì)胞再循環(huán)[16]。這預(yù)示著S1P 和NLR 可以同時作為評估高血壓相關(guān)心血管疾病的炎癥標(biāo)志物,并指示高血壓及其并發(fā)癥的發(fā)生發(fā)展。

高血壓并發(fā)癥的預(yù)防是提高高血壓病人生存質(zhì)量的重要保證,由于其發(fā)生是多種生物學(xué)功能共同參與的過程, 很難用一種單一的指標(biāo)監(jiān)測其發(fā)生,因此目前缺乏有效的指標(biāo)能有效預(yù)測和提示高血壓并發(fā)癥的發(fā)生,增加了高血壓并發(fā)癥的預(yù)防難度。從S1P 的生理功能和我們的臨床調(diào)查結(jié)果上看，在高血壓造成的血管內(nèi)皮損傷方面，血清S1P濃度變化與高血壓并發(fā)癥的發(fā)生密切相關(guān),在預(yù)測和評估高血壓并發(fā)癥危險性方面,具有重要的參考價值。