復(fù)方黃柏液涂劑體外抑菌效果研究

孫緒丁，劉振勛，樊 苗，閆 斌

（1.山東漢方制藥有限公司，山東 濟(jì)南 250101；2.山東漢方生物科技有限公司，山東 濟(jì)南 250101；3.山東中醫(yī)藥大學(xué)，山東 濟(jì)南 250355）

金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、肺炎克雷伯菌等是引起醫(yī)院內(nèi)感染的常見(jiàn)致病菌[1，2]。然而，抗生素的不合理使用加劇了細(xì)菌耐藥性的產(chǎn)生，使常用抗生素對(duì)致病菌的作用不斷減弱，引起多種藥源性疾病，給人類(lèi)健康造成潛在威脅[3]。開(kāi)發(fā)新型具有抗菌活性的化合物周期長(zhǎng)、難度大；我國(guó)中藥資源豐富，研究發(fā)現(xiàn)，傳統(tǒng)中藥具有顯著的抗菌作用，毒副作用小，且不易產(chǎn)生耐藥性[4]。因此，中藥抑菌作用的藥理學(xué)研究受到越來(lái)越多研究者的關(guān)注。

復(fù)方黃柏液涂劑由連翹、黃柏、金銀花、蒲公英和蜈蚣五味藥組成。具有清熱解毒，消腫祛腐等功效，用于治療潰瘍性結(jié)腸炎、瘡瘍潰后、外傷感染等。臨床上在皮膚疾病[5]、外科感染[6]、肛腸疾病[7]、婦科疾病[8]、泌尿系統(tǒng)疾病[9]等相關(guān)疾病的治療中，均取得了滿意的療效，并成功進(jìn)入2018版國(guó)家基本藥物目錄。本研究選用常見(jiàn)的5種致病菌作為實(shí)驗(yàn)菌，進(jìn)行體外抑菌實(shí)驗(yàn)，觀察復(fù)方黃柏液涂劑及各組方提取物的抑菌作用，為其在感染性疾病中的應(yīng)用提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料

1.1.1 中藥材

復(fù)方黃柏液涂劑（山東漢方制藥有限公司，批號(hào)：16010811）；連翹提取物（山東漢方制藥有限公司，批號(hào)：150730）；黃柏提取物（山東漢方制藥有限公司，批號(hào)：150919）；金銀花提取物（山東漢方制藥有限公司，批號(hào)：150828）；蒲公英提取物（山東漢方制藥有限公司，批號(hào)：151116）；蜈蚣提取物（山東漢方制藥有限公司，批號(hào)：151118）。

1.1.2 菌種與培養(yǎng)基

金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）[CMCC(B)26003]，銅綠假單胞菌（Pseudomonasaeruginosa）[CMCC(B)10104]，大腸埃希菌（Escherichia coli）[CMCC(B)44102]，肺炎克雷伯菌（Klebsiella pneumoniae）[CMCC(B)46117]，變形桿菌（Proteus sp）[CMCC(B)49027]，以上菌種均由山東中醫(yī)藥大學(xué)微生物教研室提供。MH(B)肉湯培養(yǎng)基購(gòu)于北京奧博星生物技術(shù)有限公司，按說(shuō)明配制后，于121℃高壓滅菌20 min備用。

1.2 方法

1.2.1 菌液的制備

將菌種接種至滅菌M H（B）肉湯培養(yǎng)基中培養(yǎng)18～24小時(shí)，用無(wú)菌生理鹽水溶液以比濁管調(diào)整菌液濃度為1×106CFU/mL。

1.2.2 復(fù)方黃柏液涂劑及各組方提取物MIC測(cè)定

采用微量稀釋法測(cè)定MIC，參照NCCLS標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行。在96孔板中每孔加入培養(yǎng)基100 μL，然后在第1行中加入100 μL藥液，從第1行中吸取100 μL混合液加入第2行，依次類(lèi)推至第6行，得到2、4、8、16、32、64倍稀釋藥物梯度。第7行每孔加入慶大霉素10μl為陽(yáng)性對(duì)照，第8行直接加入菌液作為陰性對(duì)照。同時(shí)設(shè)立藥物稀釋梯度和培養(yǎng)基空白作為對(duì)照，每個(gè)藥物重復(fù)三次。分別加入各菌液10 μL，37℃孵育24 h，觀察結(jié)果。

2 結(jié) 果

復(fù)方黃柏液涂劑及各組方提取物對(duì)5種CMCC標(biāo)準(zhǔn)菌株均有良好的抑制作用。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 復(fù)方黃柏液涂劑及各組方提取物抗菌試驗(yàn)結(jié)果

3 討 論

試驗(yàn)結(jié)果證實(shí)復(fù)方黃柏液對(duì)多種細(xì)菌具有良好的抑制作用。在3.16 mg/mL濃度下，對(duì)銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌、變形桿菌表現(xiàn)出較強(qiáng)的抑制效果，對(duì)大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌幾乎無(wú)效。復(fù)方黃柏液組方之一黃柏藥材提取物對(duì)上述五種菌種的抑制強(qiáng)度較弱，連翹藥材提取物對(duì)上述五種菌種的抑制強(qiáng)度中等，蒲公英及金銀花藥材提取物對(duì)變形桿有較強(qiáng)的抑制活性（6.25 mg/mL），對(duì)大腸埃希菌抑制活性中等（50 mg/mL），對(duì)其他三種細(xì)菌抑制活性較弱。蜈蚣藥材提取物對(duì)銅綠假單胞菌（0.75 mg/mL）、金黃色葡萄球菌（0.75 mg/mL）、變形桿菌（0.75 mg/mL）、肺炎克雷伯菌（0.75 mg/mL）抑制活性較強(qiáng)。

復(fù)方黃柏液涂劑對(duì)多種細(xì)菌有確切的抑制效果，其中各組方藥材不同目標(biāo)細(xì)菌的抑制活性有所不同。如蒲公英對(duì)變形桿菌有較強(qiáng)的抑制活性，而蜈蚣對(duì)銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌、變形桿菌和肺炎克雷伯菌均有顯著的抑制活性。由此證明復(fù)方黃柏液涂劑有良好的抑菌作用。復(fù)方黃柏液涂劑改變了傳統(tǒng)的中藥外用劑型，克服了傳統(tǒng)中藥外用膏劑、散劑等劑型中含汞和砷等劇毒品的缺陷。集中西醫(yī)外用藥之長(zhǎng)，避其所短，顆粒微細(xì)，易于吸收，引流通暢，抗菌生肌值得在臨床上推廣使用。