探討通過黃芩苷聯(lián)合黃芩素誘導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞凋亡機(jī)制

陳 巍，田燕妮，張淑群*

（1.西安交通大學(xué)第二附屬醫(yī)院腫瘤科，陜西 西安 710004；2.西北婦女兒童醫(yī)院婦二科，陜西 西安 710061）

乳腺癌是發(fā)生在成年女性患者中的最為常見的惡性腫瘤疾病類型之一，其患者數(shù)量通常占據(jù)所有女性腫瘤患者數(shù)量的25.00%左右，受多種因素影響，患者的發(fā)病率正在呈現(xiàn)出逐漸提升變化趨勢(shì)，初始發(fā)病年齡呈現(xiàn)出年輕化變化趨勢(shì)，造成了嚴(yán)重不良影響[1-2]。本文以乳腺癌MCF-7細(xì)胞樣本為研究對(duì)象，針對(duì)黃芩苷物質(zhì)和黃芩素物質(zhì)在誘導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞凋亡過程中所發(fā)揮的作用展開了探討分析，報(bào)告如下：

1 實(shí)驗(yàn)材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞材料

本次研究中運(yùn)用的乳腺癌（M i c h i a n C a n c e r Foundation 7，MCF-7）細(xì)胞購置于中南大學(xué)湘雅醫(yī)學(xué)院中心實(shí)驗(yàn)室細(xì)胞庫。

1.2 實(shí)驗(yàn)試劑

由中國藥品生物制品檢定所生產(chǎn)制備的純度為99.80%的黃芩素物質(zhì)試劑，由中國藥品生物制品檢定所生產(chǎn)制備的純度為98.60%的黃芩苷物質(zhì)試劑，由上海研晶生化試劑有限公司生產(chǎn)制備的兔抗人Caspase-3 (半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3)物質(zhì)試劑、Caspase-9(半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9)物質(zhì)、Bcl-2(B cell lymphoma 2，Bcl-2，B細(xì)胞淋巴瘤基因-2)物質(zhì)試劑、Bax(Bcl-2 Associated X Protein，Bax,Bcl-2相關(guān)x蛋白)物質(zhì)試劑、p53和p-p38 MARK(磷酸化p38絲裂原活化蛋白激酶，p-p38)多克隆抗體物質(zhì)試劑；由北京中杉金橋公司生產(chǎn)制備的辣根過氧化物酶標(biāo)記羊抗兔IgG物質(zhì)試劑。

1.3 實(shí)驗(yàn)設(shè)備

由北京東南儀誠實(shí)驗(yàn)室設(shè)備有限公司生產(chǎn)提供的電泳和凝膠成像分析技術(shù)系統(tǒng)；由GE公司生產(chǎn)提供的轉(zhuǎn)膜儀設(shè)備；由普朗醫(yī)療器械公司生產(chǎn)提供的酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀設(shè)備；由BD公司生產(chǎn)提供的流式細(xì)胞儀設(shè)備。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

擇取統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件包SPSS19.0，針對(duì)計(jì)量數(shù)據(jù)（±s）行F檢驗(yàn)，若P＜0.05，則存在差異。

2 結(jié) 果

2.1 不同濃度黃芩苷物質(zhì)、黃芩素物質(zhì)對(duì)乳腺癌MCF-7細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率的影響比較

與空白對(duì)照組相比，單純利用黃芩苷物質(zhì)、黃芩素物質(zhì)能顯著提升乳腺癌MCF-7細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制率，且在黃芩苷物質(zhì)與黃芩素物質(zhì)聯(lián)合運(yùn)用條件下，其對(duì)乳腺癌MCF-7細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制率顯著高于單純運(yùn)用黃芩苷物質(zhì)，或者是單純運(yùn)用黃芩素物質(zhì)。詳情參見表1：

表1 不同濃度黃芩苷物質(zhì)、黃芩素物質(zhì)對(duì)乳腺癌MCF-7細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率的影響比較（n=10，±s，%）

表1 不同濃度黃芩苷物質(zhì)、黃芩素物質(zhì)對(duì)乳腺癌MCF-7細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率的影響比較（n=10，±s，%）

備注：*組間比較F=69.116，P=0.000，#不用時(shí)間節(jié)點(diǎn)比較F=25.054，P=0.000。

物質(zhì)類別* 時(shí)間節(jié)點(diǎn)#24.00h 48.00h 72.00h空白對(duì)照 6.7±3.0 4.2±2.3 5.3±3.1黃芩苷物質(zhì) 7.5±3.9 9.7±4.6 17.6±6.5黃芩素物質(zhì) 9.3±4.6 12.4±5.2 13.8±7.1聯(lián)合處理 19.5±7.0 35.1±10.2 41.2±12.7

2.2 黃芩苷物質(zhì)、黃芩素物質(zhì)對(duì)乳腺癌MCF-7細(xì)胞相關(guān)蛋白質(zhì)表達(dá)的影響作用比較

與空白對(duì)照組比較，黃芩苷物質(zhì)、黃芩素物質(zhì)對(duì)乳腺癌MCF-7細(xì)胞相關(guān)蛋白質(zhì)表達(dá)水平具備影響作用。詳情參見表2：

3 討 論

最近幾年以來，盡管腫瘤科臨床事業(yè)領(lǐng)域在針對(duì)乳腺癌患者展開治療過程中引入運(yùn)用的方法技術(shù)呈現(xiàn)多樣性，其技術(shù)整體發(fā)展水平也在逐漸提升，但是乳腺癌疾病的臨床死亡率卻依然處于較高水平，且腫瘤細(xì)胞發(fā)生的侵襲，以及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移行為，是臨床中誘導(dǎo)乳腺癌患者發(fā)生因病死亡結(jié)果的重要原因[3-4]。生理學(xué)基本理論顯示，人體細(xì)胞生理機(jī)制穩(wěn)態(tài)的維持，需要細(xì)胞生殖生理過程與細(xì)胞死亡生理過程之間的相互平衡，其中就包含細(xì)胞凋亡生理機(jī)制的相關(guān)內(nèi)容，而細(xì)增殖生理過程失控和細(xì)胞凋亡生理過程執(zhí)行不足，是引致人體腫瘤病理組織發(fā)生持續(xù)增長(zhǎng)的重要原因，而積極選擇運(yùn)用適當(dāng)藥物制劑對(duì)腫瘤細(xì)胞的凋亡生理機(jī)制展開誘導(dǎo)干預(yù)，對(duì)于支持和保障乳腺癌患者的臨床病情獲取到優(yōu)質(zhì)且良好的臨床控制和改善具備重要意義[5-6]。

表2 黃芩苷物質(zhì)、黃芩素物質(zhì)對(duì)乳腺癌MCF-7細(xì)胞相關(guān)蛋白質(zhì)表達(dá)的影響作用比較（n=10，±s）

表2 黃芩苷物質(zhì)、黃芩素物質(zhì)對(duì)乳腺癌MCF-7細(xì)胞相關(guān)蛋白質(zhì)表達(dá)的影響作用比較（n=10，±s）

備注：*與空白組對(duì)比P＜0.05，#與聯(lián)合組對(duì)比P＜0.05

組別 Caspase-3 Caspase-9 Bcl-2 Bax p56 p-p38空白對(duì)照 0.02±0.01 0.03±0.01 1.01±0.01 1.01±0.01 1.01±0.01 1.01±0.01黃芩苷物質(zhì) 0.06±0.02 0.04±0.01 0.93±0.09 1.03±0.06 0.99±0.12 1.31±0.10#黃芩素物質(zhì) 0.03±0.01 0.06±0.02 0.99±0.07 1.08±0.08 0.98±0.11 1.51±0.13#聯(lián)合處理 0.66±0.10* 0.69±0.09* 0.56±0.03* 1.51±0.18* 1.36±0.15* 2.76±0.20*

本次研究中獲取的數(shù)據(jù)測(cè)算結(jié)果顯示，黃芩苷物質(zhì)和黃芩素物質(zhì)均能誘導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞發(fā)生凋亡生理過程，且在黃芩苷物質(zhì)與黃芩素物質(zhì)聯(lián)合運(yùn)用條件下，其凋亡誘導(dǎo)作用會(huì)顯著增強(qiáng)。

在腫瘤科臨床實(shí)踐工作開展過程中，為乳腺癌患者運(yùn)用適當(dāng)劑量的黃芩苷藥物制劑，或者是黃芩素藥物制劑，能誘導(dǎo)患者的乳腺癌病理組織細(xì)胞發(fā)生凋亡過程，抑制乳腺病理組織細(xì)胞的增殖生理過程，助力患者臨床病情的逐漸治療轉(zhuǎn)歸。