復(fù)方氨酚烷胺膠囊（片）膽紅素的含量考察

（菏澤市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)研究院，山東 菏澤 274000）

復(fù)方氨酚烷胺制劑適用于緩解普通感冒及流行性感冒引起的發(fā)熱、頭痛、四肢酸痛、打噴嚏、流鼻涕、鼻塞、咽痛等癥狀。本品為復(fù)方制劑，膠囊劑和片劑處方為每粒（片）含對(duì)乙酰氨基酚250 mg，鹽酸金剛烷胺100 mg，人工牛黃10 mg，咖啡因15 mg，馬來(lái)酸氯苯那敏2 mg。本品有解熱、鎮(zhèn)痛效果，能解除或改善感冒引起的各種癥狀。目前，國(guó)內(nèi)共130家復(fù)方氨酚烷胺片生產(chǎn)企業(yè)，涉及130個(gè)批準(zhǔn)文號(hào)；121家復(fù)方氨酚烷胺膠囊生產(chǎn)企業(yè)，涉及120多個(gè)批準(zhǔn)文號(hào)。復(fù)方氨酚烷胺膠囊、片劑的現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)[1-3]均未對(duì)人工牛黃中主要成分膽紅素進(jìn)行質(zhì)量控制。在該制劑質(zhì)量控制方面，對(duì)復(fù)方氨酚烷胺膠囊劑和片劑中的對(duì)乙酰氨基酚、鹽酸金剛烷胺、咖啡因和馬來(lái)酸氯苯那敏進(jìn)行控制的研究較多[4-10]，對(duì)人工牛黃成分含量分析的不多[11]。復(fù)方氨酚烷胺類(lèi)制劑是我省風(fēng)險(xiǎn)監(jiān)測(cè)探索研究品種，我們對(duì)28個(gè)廠(chǎng)家生產(chǎn)的61批次樣品中人工牛黃膽紅素進(jìn)行了考察。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent 1260型高效液相色譜儀（美國(guó)安捷倫公司），DAD檢測(cè)器，安捷倫色譜工作站；FRQ-1010T型超聲波清洗器（杭州法蘭特公司），輸出功率 600 W，工作頻率42 kHz；Mettler XS 105十萬(wàn)分之一天平（Mettler Toledo）。

1.2 試藥

膽紅素對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：100077-201808，含量98.9 %）；復(fù)方氨酚烷胺膠囊（來(lái)自12個(gè)廠(chǎng)家，共22個(gè)批次）；復(fù)方氨酚烷胺片（來(lái)自17個(gè)廠(chǎng)家，共38個(gè)批次）；其他試劑均為色譜純。

2 方法與結(jié)果

2.1 對(duì)照品與供試品溶液制備

2.1.1 對(duì)照品溶液制備 取膽紅素對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，加三氯甲烷制成每1 ml含8 μg的溶液，即得。

2.1.2 供試品溶液制備 分別取裝量差異檢測(cè)合格的膠囊內(nèi)容物或重量差異檢測(cè)合格的片劑供試品，研細(xì)，精密稱(chēng)取細(xì)粉適量（約相當(dāng)于人工牛黃30 mg），置25 ml量瓶中，加三氯甲烷-甲醇-水-鹽酸（900:100:3:0.3）適量，振搖，超聲15 min溶解，迅速冷卻至室溫，加上述溶液稀釋至刻度，搖勻，過(guò)濾，取續(xù)濾液，即得。

2.2 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱：Agilent C18（4.6 mm×250 mm，5μm）；以甲醇-三氯甲烷-1 %磷酸溶液（81:13:6）為流動(dòng)相；流速1.0 ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)449 nm；柱溫30 ℃；進(jìn)樣體積10 μl。理論板數(shù)按膽紅素峰計(jì)算應(yīng)不低于3000，分離度應(yīng)符合規(guī)定。色譜圖見(jiàn)圖1。色譜峰面積大，峰型好，沒(méi)有拖尾現(xiàn)象，主峰前后沒(méi)有肩峰，各項(xiàng)系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)參數(shù)均達(dá)到藥典要求。

圖1 對(duì)照品溶液、供試品溶液及空白溶液HPLC圖譜

2.3 方法學(xué)考察

2.3.1 線(xiàn)性關(guān)系考察 取膽紅素對(duì)照品適量（約 16 mg），精密稱(chēng)定，置100 ml 量瓶中，加三氯甲烷溶液適量溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品貯備液；分別精密量取貯備液3，2，1，0.5，0.2 ml，分別置10 ml量瓶中，并用三氯甲烷稀釋至刻度，搖勻，進(jìn)樣分析，記錄色譜圖，以濃度（μg/ml）為橫坐標(biāo)（X），峰面積（A）為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。得回歸方程：A=53.39X-40.15（r=0.9996，n=5，膽紅素線(xiàn)性范圍為 3.17～47.56 μg/ml 。

2.3.2 精密度試驗(yàn)

2.3.2.1 重復(fù)性 取同廠(chǎng)家同批號(hào)樣品（批號(hào)：20190301），按2.1.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，測(cè)定含量6次，平均含量為0.1670 mg/粒，RSD=0.60 %，表明本方法精密度良好。

2.3.2.2 中間精密度 在不同日期，取同廠(chǎng)家同批號(hào)樣品（批號(hào)：20190301），按2.1.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按2.2項(xiàng)色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，平均含量為0.1659 mg/粒，RSD=1.1 %；不同實(shí)驗(yàn)人員，取同廠(chǎng)家同批號(hào)樣品（批號(hào)：20190301），按2.1.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按2.2項(xiàng)色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，平均含量為0.1732 mg/粒，RSD=1.4 %；使用不同品牌的十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的色譜柱[Agilent（4.6 mm×250 mm，5 μm）；Phenomenex（4.6 mm×250 mm，5 μm）；Kromasil 100-5（4.6 mm×250 mm，5μm）]，取同廠(chǎng)家同批號(hào)樣品（批號(hào)：20190301），按2.1.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按2.2項(xiàng)色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，平均含量為0.1632 mg/粒，RSD=1.0 %。

2.3.3 加樣回收率測(cè)定 分別取重量差異檢測(cè)合格的6批供試品（批號(hào)：20190301，20190302，20190303，20190304，20190210，20190810），研細(xì)，精密稱(chēng)取細(xì)粉適量（約相當(dāng)于人工牛黃30 mg），置25 ml量瓶中，加入一定量的膽紅素對(duì)照品，按2.1.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按2.2項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 膽紅素加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.3.4 定量限與檢測(cè)限 取2.1.1項(xiàng)下的膽紅素對(duì)照品溶液，以三氯甲烷為溶劑，進(jìn)行系列稀釋?zhuān)M(jìn)樣測(cè)定，測(cè)得定量限（S/N≈10）為0.751 μg/ml（7.51 ng）；檢測(cè)限（S/N≈3）為0.250 μg/ml（2.50 ng）。

2.3.5 耐用性試驗(yàn) 采用不同品牌的高效液相色譜儀和色譜柱進(jìn)行含量測(cè)定，并適當(dāng)調(diào)整流動(dòng)相的比例、pH值與流速，或在適當(dāng)范圍內(nèi)調(diào)整柱溫箱溫度，均可得到滿(mǎn)意的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，表明該含量測(cè)定方法有良好的耐用性。

2.4 含量測(cè)定結(jié)果

取28個(gè)廠(chǎng)家的61批次復(fù)方氨酚烷胺制劑，按2.1.2項(xiàng)方法制備供試品溶液，分別精密量取供試品溶液與對(duì)照品溶液各10 μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，計(jì)算樣品中膽紅素的含量與轉(zhuǎn)移率。結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 復(fù)方氨酚烷胺膠囊（片）人工牛黃中膽紅素含量測(cè)定結(jié)果

注：*轉(zhuǎn)移率低于85 %

3 討論

《中國(guó)藥典》2015年版一部[12]規(guī)定：藥材人工牛黃中，按干燥品計(jì)算，含膽紅素不得少于0.63 %。由表2可見(jiàn)，61批次樣品中，人工牛黃中膽紅素含量為0.43 %～0.65 %，平均含量為0.58 %，人工牛黃中膽紅素投料轉(zhuǎn)移率為68.3 %～103.2 %，平均轉(zhuǎn)移率為92.4 %。有3個(gè)廠(chǎng)家的8批次膽紅素轉(zhuǎn)移率低于85 %，最低轉(zhuǎn)移率為廠(chǎng)家代碼21的68.3 %，值得引起我們的重視。61批次復(fù)方氨酚烷胺制劑膽紅素含量整體偏低，含量均值、轉(zhuǎn)移率均值都低于藥材人工牛黃膽紅素含量的低限，原因值得進(jìn)一步研究。

由于現(xiàn)行的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)僅對(duì)人工牛黃中膽酸進(jìn)行化學(xué)鑒別，質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)存在明顯的漏洞，部分企業(yè)為降低成本，牟取更大利益，有可能鉆質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的空子，使用劣質(zhì)人工牛黃，導(dǎo)致膽紅素含量偏低。生產(chǎn)環(huán)境條件不佳，特別是生產(chǎn)過(guò)程不注意避光，也有可能導(dǎo)致膽紅素含量偏低。

建議對(duì)膽紅素含量偏低的企業(yè)進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)提示，督促其改進(jìn)生產(chǎn)工藝，并規(guī)范倉(cāng)儲(chǔ)條件，必要時(shí)對(duì)涉嫌企業(yè)進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)檢查。藥品監(jiān)督管理部門(mén)應(yīng)完善并提高質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，嚴(yán)格控制該制劑質(zhì)量，有效防范可能出現(xiàn)的質(zhì)量風(fēng)險(xiǎn)。