屎腸球菌8296對(duì)斷奶仔豬生長(zhǎng)性能、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)表觀消化率和血清生化指標(biāo)的影響

李英英 陳曦 宋鐵英

摘要：[目的]研究飼糧中添加屎腸球菌8296對(duì)斷奶仔豬生長(zhǎng)性能、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)表觀消化率和血清生化指標(biāo)的影響，為斷奶仔豬應(yīng)激能力提升提供依據(jù)。[方法]選取60頭21日齡外三元（杜長(zhǎng)大）斷奶仔豬，隨機(jī)分為3組（每組5個(gè)重復(fù)，每重復(fù)4頭）：對(duì)照組飼喂基礎(chǔ)飼糧，2個(gè)屎腸球菌組（EFl組和EF2組）分別飼喂添加0.1%和0.3%屎腸球菌8296的基礎(chǔ)飼糧，試驗(yàn)周期30d.測(cè)定并比較3組仔豬的生長(zhǎng)性能、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)表觀消化率和血清生化指標(biāo)。[結(jié)果]①與對(duì)照組相比，EFl組仔豬的平均日增重（ADG）顯著提高（P<0.05），料重比（F/G）顯著降低（P<0.05）;EF2組ADG和平均日采食量（ADFI）分別極顯著（P<0.01）和顯著（P<0.05）提高，F(xiàn)/G極顯著降低（P<0.01）。②EF2組仔豬的粗脂肪（EE）和鈣（Ca）的表觀消化率顯著高于對(duì)照組（P<0.05），磷（P）的表觀消化率極顯著高于對(duì)照組（P<0.01）。③與對(duì)照組相比，EFl組仔豬血清中谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）活性極顯著降低（P<0.01），免疫球蛋白M（IgM）含量顯著升高（P<0.05）;EF2組球蛋白（GLO）、磷（P）、免疫球蛋白G（IgG）的含量顯著降低（P<0.05），AST活性極顯著降低（P<0.01），甘油三酯（/G）和IgM的含量顯著上升（戶<0.05），免疫球蛋白A（IgA）含量極顯著上升（P<0.01）。[結(jié)論]在飼糧中添加屎腸球菌8296可改善斷奶仔豬生長(zhǎng)性能、提高仔豬對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收能力，增強(qiáng)免疫力;添加劑量為0.3%時(shí)效果更顯著。

關(guān)鍵詞：屎腸球菌，斷奶仔豬，生長(zhǎng)性能，營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)表觀消化率，血清生化指標(biāo)

中圖分類號(hào)：S816文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號(hào)：1008-0384（2020）03-0266-07

0 引言

（研究意義）仔豬斷奶時(shí)由于飼糧、環(huán)境等因素的改變，常會(huì)引起采食量下降、生長(zhǎng)緩慢和腹瀉等癥狀，嚴(yán)重的甚至死亡，造成較大的經(jīng)濟(jì)損失。屎腸球菌屬于養(yǎng)殖動(dòng)物中允許添加的菌種（《飼料添加劑品種目錄2013》——中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部公告第2045號(hào)），具有改善腸道環(huán)境、促進(jìn)消化吸收、降低料肉比、提高免疫力等作用;另一方面，作為內(nèi)源性微生物，屎腸球菌具有無污染、無副作用等優(yōu)點(diǎn)。因此，在斷奶仔豬飼糧中添加屎腸球菌改善應(yīng)激成為當(dāng)前的研究熱點(diǎn)。（前人研究進(jìn)展）目前屎腸球菌的研究存在菌種多樣、應(yīng)用效果不一致等問題，篩選易培養(yǎng)、抗逆性好、應(yīng)用效果好的菌株，可以為屎腸球菌在畜禽養(yǎng)殖中的推廣應(yīng)用提供參考資料。前期研究中課題組自主分離到1株抗逆性較好的豬源屎腸球菌（屎腸球菌8296），通過包被和噴霧干燥工藝，制備成微膠囊制劑，使其對(duì)高溫、胃酸和消化酶等條件具有較好的耐受性;并已證實(shí)其具有改善斷奶仔豬腸道菌群結(jié)構(gòu)、改善斷奶仔豬生長(zhǎng)性能的作用。（本研究切入點(diǎn)）但屎腸球菌8296對(duì)斷奶仔豬消化力和免疫功能的影響尚待研究。（擬解決的關(guān)鍵問題）本試驗(yàn)通過在斷奶仔豬飼糧中添加屎腸球菌8296，探討該菌株對(duì)斷奶仔豬的生長(zhǎng)性能、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)表觀消化率和血清生化指標(biāo)的影響，為屎腸球菌8296在斷奶仔豬中的應(yīng)用研究提供參考資料。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)菌株

屎腸球菌8296：由福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院生物技術(shù)研究所自主分離得到的1株抗逆性較好的豬源屎腸球菌，通過噴霧干燥工藝制成微膠囊制劑，活菌數(shù)：3×10¹⁰CFU·g^-1。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物及飼喂管理辦法

試驗(yàn)仔豬由福建省閩清縣后洋豬場(chǎng)提供，選取60頭21日齡外三元（杜長(zhǎng)大）斷奶仔豬，隨機(jī)分為3組，每組5個(gè)重復(fù)，每重復(fù)4頭。參考前期預(yù)試驗(yàn)結(jié)果，對(duì)照組飼喂基礎(chǔ)飼糧，兩個(gè)屎腸球菌組（EFl組和EF2組）分別飼喂添加0.1%和0.3%的屎腸球菌8296微膠囊制劑的基礎(chǔ)飼糧?；A(chǔ)飼糧為福建省金華龍飼料有限公司提供的斷奶仔豬教槽料（100A），其組成及營(yíng)養(yǎng)水平見表1.試驗(yàn)期間采取自由采食、自由飲水，日常管理和免疫按常規(guī)程序進(jìn)行，試驗(yàn)周期為30d，第30d的20：00停止喂食。

1.3 指標(biāo)測(cè)定

1.3.1生長(zhǎng)性能指標(biāo) 在試驗(yàn)第1d及第31d清晨對(duì)仔豬空腹稱重，試驗(yàn)期間，每天7：00～8：00、11：00～12：00、17：00～18：00觀察仔豬排糞情況，記錄腹瀉頭數(shù)。試驗(yàn)期間記錄仔豬死淘情況及每天的用料量，計(jì)算初始體重（IBW）、終末體重（FBW）、平均日增重（ADG）、平均日采食量（ADFI）、料重比（F/G）、腹瀉率及死淘率。

1.3.2營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)表觀消化率 在試驗(yàn)結(jié)束前3d每天8：00～10：00、15：00～17：00收集新鮮糞樣，加入10%鹽酸固氮后置于烘箱中65℃烘干，烘干的樣品粉碎混勻后裝入密封袋內(nèi)4℃保存，用于營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)分析。飼料樣品的采集采用四分法，粉碎后同樣裝入密封袋內(nèi)4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

粗蛋白（CP）含量測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)參照GB/T643-1994，使用儀器為上海纖檢凱氏定氮儀KD-N2;粗脂肪（EE）含量測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)參照GB/T 6433-006，使用儀器為意大利VELP公司SERl48脂肪測(cè)定儀;鈣（Ca）含量測(cè)定采用火焰原子吸收分光光度法，使用儀器為北分瑞利原子吸收分光光度計(jì)WTX-l 10B;磷（P）含量測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)參照GB/T64372002，采用釩鉬黃比色法;營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)表觀消化率測(cè)定采用鹽酸不溶灰分（AIA）內(nèi)源指示劑法（鹽酸不溶灰分測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)參照GB/T 23742-2009）。營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)表觀消化率計(jì)算公式為：

Dd/%=100-（Id/If）×（Af/Ad）×100（1）

式中：Dd為營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)表觀消化率，%;Id為試驗(yàn)飼糧中鹽酸不溶灰分的含量，%;If為糞中鹽酸不溶灰分的含量，%;Af為糞中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)含量，%;Ad為試驗(yàn)飼糧中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)含量，%。

1.3.3血清生化指標(biāo) 在試驗(yàn)第31d清晨空腹前腔靜脈采血，每個(gè)重復(fù)內(nèi)隨機(jī)選擇1頭仔豬，采血3mL于真空促凝管中，靜置30min后，4℃，3000r·min^-1離心30min，取上層血清用于檢測(cè)血清生化指標(biāo)，包括總蛋白TP（g·L^-1）、白蛋白ALB（g·L^-1）、血糖GLU（mmol·L^-1）、甘油三酯TG（mmol·L^-1）、谷草轉(zhuǎn)氨酶AST（IU·L^-1）、尿素氮UN（mmol·L^-1）、磷P（mmol·L^-1）和免疫球蛋白（IgG、IgM、IgA）（mg·L^-1）。血清生化檢測(cè)使用美國(guó)愛德士VETTEST 8008生化儀，免疫球蛋白檢測(cè)使用江蘇科晶生物有限公司的豬免疫球蛋白G（IgG）ELISA檢測(cè)試劑盒、豬免疫球蛋白M（IgM）ELISA檢測(cè)試劑盒、豬免疫球蛋白A（IgA）ELISA檢測(cè)試劑盒。

1.4 數(shù)據(jù)分析

采用SPSS 16.0for Windows對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行單因子方差分析，Duncan法進(jìn)行多重比較，當(dāng)P<0.05時(shí)差異顯著，P<0.01時(shí)差異極顯著。數(shù)據(jù)用“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 屎腸球菌8296對(duì)斷奶仔豬生長(zhǎng)性能的影響

斷奶仔豬的生長(zhǎng)性能測(cè)定結(jié)果見表2.與對(duì)照組相比，EFl組仔豬的ADG顯著提高（P<0.05），F(xiàn)/G顯著降低（P<0.05）;EF2組ADG極顯著提高（P<0.01），ADFI顯著增加（P<0.05），F(xiàn)/G極顯著降低（P<0.01）。但2個(gè)屎腸球菌組的腹瀉率與對(duì)照組相比未見降低，試驗(yàn)期間3組仔豬均未有死亡或者淘汰。

2.2 屎腸球菌8296對(duì)斷奶仔豬營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)表觀消化率的影響

表3為斷奶仔豬營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)表觀消化率的結(jié)果，可以看出，EFl組仔豬的CP、EE、Ca、P的表觀消化率與對(duì)照組差異均不顯著（P>0.05），但EF2組仔豬的EE和Ca的表觀消化率均顯著高于對(duì)照組（P<0.05），P的表觀消化率極顯著高于對(duì)照組（P<0.01）。

2.3 屎腸球菌8296對(duì)斷奶仔豬血清生化指標(biāo)的影響

表4為斷奶仔豬血清生化檢測(cè)的結(jié)果，2個(gè)屎腸球菌組及對(duì)照組仔豬血清中TP、ALB、UN的含量均在正常范圍內(nèi)，GLO、AST和P的含量均偏高，GLU含量均偏低;對(duì)照組和EFl組的TG含量也低于正常值，僅有EF2組在正常范圍內(nèi)。差異性分析結(jié)果顯示：與對(duì)照組相比，EFl組仔豬血清中AST活性極顯著降低（P<0.01），IgM含量顯著升高（P<0.05）;EF2組GLO、IgG的含量顯著降低（P<0.05），TG、P和IgM的含量顯著上升（P<0.05），AST活性極顯著降低（P<0.01），IgA含量極顯著上升（P<0.01）;EFl組中TP、ALB、GLO、GLU、TG、UN、P、IgG、IgA和EF2組中TP、ALB、GLU、UN與對(duì)照組相比差異不顯著（P>0.05）。

3 討論與結(jié)論

3.1 屎腸球菌8296對(duì)斷奶仔豬生長(zhǎng)性能和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)表觀消化率的影響

仔豬斷奶是養(yǎng)豬生產(chǎn)中的關(guān)鍵階段，由于食物、環(huán)境、群體等方面的應(yīng)激，仔豬采食量會(huì)下降、營(yíng)養(yǎng)缺乏，進(jìn)而造成腸黏膜損傷、消化功能障礙，同時(shí)對(duì)病原體的抵抗力變?nèi)?，易引發(fā)疾病，最終導(dǎo)致生產(chǎn)性能降低。屎腸球菌是一種常用的益生菌制劑，飼喂后可抑制動(dòng)物腸道內(nèi)致病菌的生長(zhǎng)，改善腸道菌群結(jié)構(gòu)，增強(qiáng)仔豬小腸上皮細(xì)胞的完整性和代謝活性，促進(jìn)腸道絨毛發(fā)育和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收，提高其生長(zhǎng)性能。課題組前期研究發(fā)現(xiàn)在斷奶仔豬的飼糧中添加屎腸球菌8296后，腸道內(nèi)的菌群結(jié)構(gòu)發(fā)生了明顯變化，主要表現(xiàn)在厚壁菌門的豐度明顯增加，擬桿菌門的豐度明顯下降。厚壁菌門的變化主要在乳桿菌屬和梭菌目，前者的增加表明機(jī)體營(yíng)養(yǎng)吸收和免疫能力提高，而后者包含很多產(chǎn)丁酸的菌種，與小腸上皮的修復(fù)相關(guān)。因此，厚壁菌門的豐度增加常被認(rèn)為有利于動(dòng)物的增重和健康;而擬桿菌門內(nèi)普氏菌屬在腸道內(nèi)的豐度較高，且其內(nèi)所含菌種大多與感染和炎癥有關(guān)，故擬桿菌門在腸道內(nèi)豐度降低可能代表機(jī)體感染病原的風(fēng)險(xiǎn)降低，健康狀況得到改善。

本試驗(yàn)的結(jié)果顯示：飼糧中添加0.1%和0.3%屎腸球菌8296，斷奶仔豬的采食量均有提高，料重比均有所下降，生長(zhǎng)性能得到改善;但0.3%組仔豬的生長(zhǎng)性能改善效果更明顯。同時(shí)，0.3%組仔豬對(duì)于飼糧中EE、Ca和P的表觀消化率也有明顯提高。該結(jié)果與以往認(rèn)為的屎腸球菌可有效改善動(dòng)物生長(zhǎng)性能、提高其對(duì)飼糧中營(yíng)養(yǎng)成分的消化率的觀點(diǎn)基本一致，推測(cè)屎腸球菌進(jìn)入動(dòng)物腸道后，可能通過影響腸道菌群結(jié)構(gòu)和腸絨毛結(jié)構(gòu)進(jìn)而影響機(jī)體的消化吸收能力，改善生長(zhǎng)性能，但具體機(jī)理仍需進(jìn)一步研究。本試驗(yàn)中，屎腸球菌8296降低腹瀉率及死淘率的作用未見體現(xiàn)，可能是受到季節(jié)和飼養(yǎng)水平的影響，對(duì)照組和2個(gè)處理組的腹瀉率均處于較低的水平，且3組仔豬均沒有死亡或者淘汰，所以未見明顯區(qū)別。

3.2 屎腸球菌8296對(duì)斷奶仔豬血清生化指標(biāo)的影響

血液是機(jī)體內(nèi)環(huán)境重要的組成部分，參與機(jī)體的新陳代謝，血液成分的變化可反映機(jī)體代謝的情況。血清中TP反應(yīng)機(jī)體對(duì)蛋白質(zhì)的代謝情況，由ALB和GLO組成，ALB反應(yīng)機(jī)體對(duì)蛋白的代謝吸收能力;GLO則與機(jī)體的免疫應(yīng)答密切相關(guān)。動(dòng)物攝人飼糧后，三大營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)糖類、脂質(zhì)和蛋白質(zhì)需分解成小分子物質(zhì)后才能進(jìn)入血液循環(huán)，被機(jī)體吸收利用，血清中GLU、TG和ALB分別反映機(jī)體對(duì)糖、脂肪和蛋白質(zhì)的代謝吸收水平，因此，臨床上常通過這3個(gè)指標(biāo)判斷機(jī)體的營(yíng)養(yǎng)狀況。當(dāng)肝臟受損時(shí)，血清中AST活性會(huì)升高，因此常將其在血液中的含量作為判斷肝臟功能的標(biāo)準(zhǔn)。血中的UN和P主要由腎臟排出體外，其含量與腎功能密切相關(guān)，臨床上將它們作為腎臟健康狀況的指標(biāo)。本試驗(yàn)中，2個(gè)屎腸球菌組及對(duì)照組仔豬血清中GLO含量均偏高，但隨著屎腸球菌添加量提高，仔豬血清中GLO水平呈負(fù)相關(guān)，其中0.3%屎腸球菌組的GLO含量已接近正常值，可能是由于仔豬在斷奶期間，由于環(huán)境和食物的變化引起應(yīng)激反應(yīng)，導(dǎo)致GLO升高，加人屎腸球菌8296后，降低了仔豬的免疫應(yīng)激反應(yīng)，其體內(nèi)GLO含量趨于正常，免疫狀況優(yōu)于對(duì)照組。同時(shí)，仔豬飼糧中添加屎腸球菌8296后其血清中AST活性和P含量也隨著添加劑量提高而降低，且0.3%屎腸球菌組仔豬的AST活性和P含量也接近正常值，與GLO的改變趨勢(shì)一致，可能顯示屎腸球菌組仔豬腎臟健康狀況優(yōu)于對(duì)照組。血清生化指標(biāo)中，代表仔豬營(yíng)養(yǎng)狀況的ALB、GLU和TG在對(duì)照組和0.1%屎腸球菌組間并沒有明顯區(qū)別，但0.3%屎腸球菌組仔豬血清中的含量均高于對(duì)照組;特別是TG含量，對(duì)照組和0.1%屎腸球菌組均偏低，僅0.3%屎腸球菌組在正常范圍內(nèi)，說明飼糧中添加0.3%屎腸球菌8296后仔豬糖、脂肪和蛋白質(zhì)的代謝吸收水平均有升高。以上結(jié)果說明飼糧中添加屎腸球菌8296可改善斷奶仔豬的營(yíng)養(yǎng)狀況以及肝臟、腎臟等免疫器官的健康狀況，增強(qiáng)機(jī)體抵抗力。這與屎腸球菌可增強(qiáng)機(jī)體免疫力、降低早期斷奶對(duì)仔豬造成的應(yīng)激損傷的結(jié)論基本一致。

IgG、IgM和IgA均為免疫球蛋白，由B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生，介導(dǎo)機(jī)體的體液免疫。機(jī)體啟動(dòng)體液免疫時(shí)，最先產(chǎn)生的免疫球蛋白是IgM，其殺菌、溶菌、溶血、調(diào)理及凝集等作用均高于IgG，但在機(jī)體產(chǎn)生大量IgG后會(huì)逐漸消失;IgG是哺乳動(dòng)物最主要的免疫球蛋白，占血清中免疫球蛋白總量的75%～80%，參與體內(nèi)多種免疫反應(yīng)，具有抗菌、抗病毒和抗毒素等作用;而IgA主要與機(jī)體的黏膜免疫相關(guān)，參與黏膜局部的抗菌、抗病毒反應(yīng)。前人研究中，關(guān)于益生菌對(duì)仔豬免疫球蛋白含量的影響并不一致。文靜等用屎腸球菌飼喂斷奶仔豬后發(fā)現(xiàn)，試驗(yàn)組仔豬血清中IgA和IgG含量均顯著提高，IgM含量未見明顯變化;而王永等用屎腸球菌飼喂斷奶仔豬時(shí)發(fā)現(xiàn)，試驗(yàn)組仔豬的IgG和IgM含量顯著高于對(duì)照組，IgA含量卻未見明顯變化。Zhang等在研究乳酸菌對(duì)感染大腸桿菌的模型仔豬的影響時(shí)，發(fā)現(xiàn)飼喂乳酸菌的仔豬空腸、回腸相關(guān)淋巴組織內(nèi)的分泌型IgA含量顯著高于對(duì)照組。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，飼喂屎腸球菌8296后仔豬血清中IgG含量未見提升，但I(xiàn)gM和IgA的含量均顯著高于對(duì)照組，并且隨著屎腸球菌8296添加量提高而增加，推測(cè)可能是由于屎腸球菌8296通過口服飼喂進(jìn)入腸道，促進(jìn)了仔豬的腸道黏膜免疫和體液免疫反應(yīng)，進(jìn)而增強(qiáng)其免疫力。

仔豬血清生化檢測(cè)結(jié)果的差異性分析結(jié)果顯示，0.1%屎腸球菌組與對(duì)照組僅有AST活性差異顯著;而0.3%屎腸球菌組與對(duì)照組血清中GLO、TG、P、IgG和IgM含量差異顯著，兩組間AST活性和IgA含量差異極顯著，說明屎腸球菌8296在飼糧中添加量為0.3%時(shí)，對(duì)斷奶仔豬血清生化指標(biāo)的影響較大。