發(fā)酵飼料對大午金鳳蛋雞生產(chǎn)性能、蛋品質(zhì)和抗氧化能力的影響

■易春霞 劉曉蘭 王 燕 董 原

（齊齊哈爾大學(xué)食品與生物工程學(xué)院，黑龍江齊齊哈爾161006）

我國玉米產(chǎn)量居世界第二位，近10多年來，我國玉米深加工產(chǎn)能擴張迅速，深加工量（含飼料加工）年均增長11%。玉米深加工副產(chǎn)物玉米黃粉和玉米胚芽粕產(chǎn)量大，目前主要作為飼料使用。玉米黃粉蛋白質(zhì)含量高，但是主要以醇溶蛋白為主，水溶性差，且氨基酸組成不平衡，適口性差，直接作為飼料使用蛋白質(zhì)消化利用率低。玉米胚芽粕蛋白質(zhì)含量低且粗纖維含量較高，限制了其在單胃動物飼料中的應(yīng)用[1-3]。

微生物發(fā)酵飼料通過微生物的菌體繁殖和代謝，將飼料中的大分子物質(zhì)和抗?fàn)I養(yǎng)因子進行分解或轉(zhuǎn)化，含有高活性益生菌及其代謝產(chǎn)物[4]。微生物發(fā)酵飼料具有提高飼料消化利用率，改善畜禽生產(chǎn)性能，促進動物腸道健康和具有替抗?jié)摿Φ葍?yōu)點，在蛋雞養(yǎng)殖中廣泛應(yīng)用[5-7]。黃竹等[8]研究結(jié)果表明，在基礎(chǔ)日糧中添加不同比例的玉米-豆粕發(fā)酵飼料，可在一定程度上提高海蘭褐蛋雞的生產(chǎn)性能及蛋品質(zhì)，5%添加水平的效果最佳。丁小青等[9]研究結(jié)果表明，以茶渣、豆粕和麩皮為底物的發(fā)酵飼料使仙居雞血清超氧化物歧化酶和過氧化氫酶活性顯著升高，丙二醛含量顯著降低，有效改善機體抗氧化能力。

大午金鳳蛋雞具有紅羽產(chǎn)粉殼蛋、啄死淘率低、生產(chǎn)性能穩(wěn)定、蛋殼顏色好等特點，近幾年在粉殼蛋雞市場占有率大幅提高[10]。以玉米黃粉和玉米胚芽粕為底物的發(fā)酵飼料在大午金鳳蛋雞中的應(yīng)用未見報道。本試驗以玉米黃粉和玉米胚芽粕為底物，采用益生菌發(fā)酵制備發(fā)酵飼料，研究在玉米-豆粕型日糧中添加發(fā)酵飼料對大午金鳳蛋雞生產(chǎn)性能、雞蛋品質(zhì)和抗氧化能力的影響，旨在為發(fā)酵飼料在大午金鳳蛋雞生產(chǎn)中合理利用提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

原料：玉米黃粉購自黑龍江某公司；玉米胚芽粕購自公主嶺某公司；結(jié)晶葡萄糖母液購自黑龍江某公司。

菌種：地衣芽孢桿菌、啤酒酵母菌和保加利亞乳桿菌菌種均保藏于齊齊哈爾大學(xué)食品學(xué)院生物工程實驗室。

1.2 發(fā)酵飼料的制備

采用單向閥發(fā)酵袋（25 kg）進行生料發(fā)酵，裝料量為15 kg/袋，物料配比為玉米黃粉∶玉米胚芽粕=2∶3（w/w），料水比為1∶1（g/ml），總接種量4 ml/100 g濕基，菌液體積比為地衣芽孢桿菌、啤酒酵母菌和保加利亞乳桿菌數(shù)量比1∶1∶1，活菌數(shù)108cfu/ml，發(fā)酵溫度30 ℃，發(fā)酵時間4 d。發(fā)酵結(jié)束后，60 ℃烘干8 h即為發(fā)酵飼料（含水量≤10%）。

1.3 試驗設(shè)計及飼養(yǎng)飼糧

試驗在齊齊哈爾市齊佳生態(tài)養(yǎng)殖場進行，采用單層直形式籠養(yǎng)，自由采食和自由飲水，每天早上8:00和下午16:00 喂食2 次。每天下午16:00 撿蛋1 次，每天清掃雞籠1次。光照時間為每天16 h，溫度控制在21～22 ℃。按正常免疫程序接種免疫。選用健康且產(chǎn)蛋性能相近的56 周齡大午金鳳蛋雞160 只，隨機分成2 組，每組5 個重復(fù)，每個重復(fù)16 只雞。預(yù)飼期7 d，正式試驗期分前期（1～21 d）和后期（22～42 d）共42 d。參照NY/T 33—2004《雞飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)》配制日糧。各組飼糧配方及營養(yǎng)水平見表1。對照組飼喂基礎(chǔ)日糧；試驗組：10%發(fā)酵飼料替代10 %基礎(chǔ)日糧的配方日糧。

1.4 樣品采集與制備

在試驗第21 d 和第42 d 時，以每組每重復(fù)為單位隨機選取6枚雞蛋測定雞蛋品質(zhì)，每組每重復(fù)隨機選取2只健康蛋雞進行翅下靜脈采血，采血前禁食不禁水12 h，每只雞采集5 ml 血液，采用肝素鈉負壓采血管，待血清自然析出后，3 000 r/min 離心10 min，分離出血清，待測血清抗氧化指標(biāo)。第42 d 時采血后解剖取左側(cè)肝臟約2 g 置于無菌試管中，液氮速凍，保存于-80 ℃，待測肝臟抗氧化指標(biāo)。

1.5 試驗指標(biāo)和測定方法

1.5.1 發(fā)酵飼料營養(yǎng)成分測定

常規(guī)營養(yǎng)成分粗蛋白質(zhì)、粗纖維、氨基酸、鈣、磷和活菌數(shù)分別參考中華人民共和國農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)GB/T 6432—1994、GB/T 6434—2006、GB/T 18246—2000、GB/T 6436—2002、GB/T 6437—2002 和GB 4789.2—2016 方法測定[11-16]，可溶性蛋白含量采用Folin-酚法測定[17]。

表1 試驗日糧組成及營養(yǎng)水平（風(fēng)干基礎(chǔ)）

1.5.2 蛋雞生產(chǎn)性能測定

試驗期間每天按每重復(fù)為單位記錄產(chǎn)蛋數(shù)量、產(chǎn)蛋重量、投料量和破軟蛋數(shù)。并計算1～21 d 和22～42 d平均蛋重、產(chǎn)蛋率、料蛋比、平均日采食量和破軟蛋率。

1.5.3 雞蛋品質(zhì)指標(biāo)測定

雞蛋品質(zhì)指標(biāo)包括蛋殼強度、蛋殼厚度、蛋殼顏色、蛋黃顏色、蛋白高度、哈氏單位和蛋形指數(shù)。分別采用日本Robotmation 公司的EFG-0503 蛋殼強度測定儀、EFT-1601 蛋殼厚度測定儀和EMT7300 多功能蛋品質(zhì)分析儀測定。

1.5.4 蛋雞抗氧化指標(biāo)測定

血清用于測定總抗氧化能力（T-AOC）、過氧化氫酶活力（CAT）、丙二醛含量（MDA）、超氧化物歧化酶活力（SOD）和谷胱甘肽過氧化物酶活力（GSH-Px）；肝臟組織液測定T-AOC、MDA、SOD 和GSH-Px。測定過程嚴(yán)格按照南京建成生物研究所提供的試劑盒說明書進行測定。

1.6 統(tǒng)計分析

試驗數(shù)據(jù)運用SPSS 17.0 軟件進行統(tǒng)計，用單因子方差分析進行差異顯著性檢驗，最小顯著差數(shù)法（LSD）進行多重比較，結(jié)果均以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，“P＜0.05”作為差異顯著性判斷標(biāo)準(zhǔn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 發(fā)酵前后飼料的營養(yǎng)成分

成分分析是飼料評價的基礎(chǔ)，通過對發(fā)酵物的成分分析可以更好地評價其價值和品質(zhì)，發(fā)酵前后的飼料常規(guī)成分含量的變化如表2所示。與發(fā)酵前相比，發(fā)酵后可溶性蛋白含量提高了181.31%，蛋雞第一、第二限制性氨基酸蛋氨酸和賴氨酸含量分別增加了46.42%和26.92%，必需氨基酸總和增加了25.76%；檢測到的17 種氨基酸總和增加了23.47%，活菌數(shù)增加了40.19%，差異均顯著（P＜0.05）；粗蛋白質(zhì)、鈣和磷含量均有增加，粗纖維含量降低了3.92%，差異均不顯著（P＞0.05）。

表2 發(fā)酵前后的飼料營養(yǎng)成分變化

2.2 發(fā)酵飼料對蛋雞生產(chǎn)性能的分析

生產(chǎn)性能是蛋雞養(yǎng)殖中最關(guān)鍵的指標(biāo)，與經(jīng)濟效益密切相關(guān)。發(fā)酵飼料對蛋雞生產(chǎn)性能的影響如表3所示。與對照組相比，試驗組蛋雞試驗前期的平均產(chǎn)蛋率顯著增加（P＜0.05）和破損蛋率顯著降低（P＜0.05）；試驗后期的平均產(chǎn)蛋率增加了3.85%（P＞0.05）；整個試驗期間，試驗組平均采食量有所增加，料蛋比和蛋重略有下降，但無明顯差異（P＞0.05）。

2.3 發(fā)酵飼料對雞蛋品質(zhì)的分析

發(fā)酵飼料的添加對雞蛋的品質(zhì)影響如表4所示，試驗第21 d 時，兩組蛋雞所產(chǎn)雞蛋品質(zhì)無顯著差異（P＞0.05）；試驗第42 d時，與對照組相比，試驗組蛋雞所產(chǎn)雞蛋的蛋白高度和哈氏單位均顯著提高（P＜0.05），蛋殼厚度顯著下降（P＜0.05）。隨著蛋雞周齡的增加，對照組雞蛋的蛋黃顏色逐漸變淺，而試驗組雞蛋蛋黃顏色逐漸加深。

2.4 發(fā)酵飼料對蛋雞抗氧化指標(biāo)的影響

2.4.1 發(fā)酵飼料對蛋雞血清抗氧化指標(biāo)的影響

發(fā)酵飼料的添加對蛋雞的血清抗氧化指標(biāo)的影響如表5 所示。試驗第21 d 時，與對照組相比，試驗組蛋雞的血清MDA 和CAT 含量顯著降低（P＜0.05）；試驗第42 d 時，與對照組相比，試驗組蛋雞的血清CAT、SOD和GSH-Px含量均顯著增加（P＜0.05）。

表3 發(fā)酵飼料對蛋雞生產(chǎn)性能的影響

表4 發(fā)酵飼料對蛋品質(zhì)的影響

表5 發(fā)酵飼料對蛋雞血清抗氧化指標(biāo)的影響

2.4.2 發(fā)酵飼料對蛋雞肝臟抗氧化指標(biāo)的影響

發(fā)酵飼料對蛋雞的肝臟抗氧化功效的影響如表6所示，與對照組相比，試驗組蛋雞的肝臟T-AOC、SOD 和GSH-Px 含量都有升高趨勢，但差異均不顯著（P＞0.05）；MDA 含量降低了35.37%，差異不顯著（P＞0.05）。

表6 發(fā)酵飼料對蛋雞肝臟抗氧化指標(biāo)的影響

3 討論

3.1 發(fā)酵對物料營養(yǎng)成分的影響

發(fā)酵飼料的營養(yǎng)成分受所用菌種和發(fā)酵參數(shù)的影響。本試驗中，采用單向閥發(fā)酵袋作為發(fā)酵介質(zhì)，結(jié)合了好氧菌和厭氧菌的發(fā)酵優(yōu)勢，在發(fā)酵過程中微生物快速大量繁殖，使得發(fā)酵飼料中活菌數(shù)顯著增加和粗蛋白質(zhì)含量有所提高；微生物代謝過程中產(chǎn)生蛋白酶將大分子蛋白質(zhì)水解成小分子的小肽和游離氨基酸，使得蛋氨酸、賴氨酸、必需氨基酸和總氨基酸含量顯著增加，改善了飼料中玉米黃粉賴氨酸不足和氨基酸組成不平衡的缺點，提高了其蛋白質(zhì)水溶性，也解釋了可溶性蛋白質(zhì)含量的增加。地衣芽孢桿菌在發(fā)酵過程中分泌纖維素酶，對玉米胚芽粕中部分纖維素進行降解，使得發(fā)酵飼料中粗纖維含量降低，提高飼料的利用率。韓國棟等[3]利用枯草芽孢桿菌、啤酒酵母菌和嗜熱乳桿菌混菌固態(tài)發(fā)酵玉米黃粉、豆粕和麩皮，可溶性蛋白含量由發(fā)酵前的59.09 mg/g 提高到發(fā)酵后的103.55 mg/g。魏炳棟等[18]利用復(fù)合菌發(fā)酵玉米黃粉，結(jié)果表明總必需氨基酸和總氨基酸含量分別增加了12.58%和12.37%。以上結(jié)果與本試驗基本一致。

3.2 發(fā)酵飼料的添加對蛋雞生產(chǎn)性能的影響

生產(chǎn)性能是蛋雞養(yǎng)殖中最關(guān)鍵的指標(biāo)，與經(jīng)濟效益密切相關(guān)。產(chǎn)蛋后期，蛋雞因機體退化，免疫力下降等原因，導(dǎo)致產(chǎn)蛋性能下降，蛋品質(zhì)受損。所以在產(chǎn)蛋后期，如何維持良好的產(chǎn)蛋性能尤其重要[19]。夏圣奎等[20]在蛋雞飼糧中添加2.5%玉米豆粕發(fā)酵飼料，結(jié)果發(fā)現(xiàn)能延緩產(chǎn)蛋率和破蛋率下降幅度，降低次蛋率和死淘率。Linguo Zhao 等[21]將發(fā)酵銀杏葉飼料飼喂給海蘭褐蛋雞，發(fā)現(xiàn)黑曲霉發(fā)酵組和混菌（產(chǎn)朊假絲酵母菌和黑曲霉）發(fā)酵組顯著提高產(chǎn)蛋率和飼料轉(zhuǎn)化率（P＜0.05）。上述的結(jié)論與本試驗結(jié)果基本一致。

產(chǎn)蛋率是衡量家禽產(chǎn)蛋性能的一個重要指標(biāo)，蛋雞進入產(chǎn)蛋后期，產(chǎn)蛋率會因為自身的機體退化等加速降低。本試驗表明，添加10%發(fā)酵飼料顯著提高了平均產(chǎn)蛋率，隨著蛋雞日齡增加，產(chǎn)蛋率趨于平穩(wěn)甚至有小增長趨勢，可能原因是發(fā)酵飼料中富含益生菌，提高了機體抗氧化和免疫性能，延緩了機體退化，從而穩(wěn)定了產(chǎn)蛋率。破損蛋主要受飼料營養(yǎng)、蛋自身、環(huán)境等因素影響，而飼料營養(yǎng)中對蛋殼質(zhì)量影響較大的是鈣、磷與維生素D[22]。本試驗表明，在試驗前期飼喂發(fā)酵飼料替代豆粕顯著降低了破損蛋率，試驗后期無顯著影響?？赡苁且驗榘l(fā)酵飼料中鈣磷含量較高和啤酒酵母菌菌體本身所富含的氨基酸、消化酶、維生素、核糖核酸等有益物質(zhì)可以提高飼料的消化性和營養(yǎng)價值，從而降低了破損蛋率；而隨著產(chǎn)蛋周期的增加，蛋雞機體受損，破損蛋率都有所增加。料蛋比是衡量家禽養(yǎng)殖經(jīng)濟效益的一個重要指標(biāo)，在保證產(chǎn)蛋重量的前提下，料蛋比越低，養(yǎng)殖利潤越大。本試驗表明，飼喂發(fā)酵飼料替代基礎(chǔ)日糧對料蛋比有降低作用，可能原因是玉米黃粉和玉米胚芽粕經(jīng)過益生菌發(fā)酵后，飼料中部分大分子蛋白質(zhì)降解成易吸收的小分子的小肽、游離必需氨基酸等增加了動物采食量，提高了飼料利用率。

3.3 發(fā)酵飼料的添加對雞蛋品質(zhì)的影響

蛋白高度和哈氏單位是衡量蛋白品質(zhì)的有效指標(biāo)，數(shù)值越大，蛋白黏稠度越高，雞蛋品質(zhì)越好[8]。研究表明，在蛋雞日糧中添加發(fā)酵飼料可以有效提高雞蛋哈氏單位[9，23]。在本試驗中，試驗后期，試驗組雞蛋的蛋白高度和哈氏單位顯著高于對照組。蛋殼強度越大，在運輸中受損幾率越小，蛋的保鮮程度越高。本試驗表明，試驗后期添加發(fā)酵飼料使蛋殼厚度均顯著降低，但整個試驗期間，兩組雞蛋的蛋殼強度無明顯差異，這可能是由于隨著蛋雞日齡的增加，蛋雞對鈣的吸收降低，整體蛋殼厚度下降。蛋黃顏色是衡量雞蛋品質(zhì)的一項重要指標(biāo)，一般認為蛋黃顏色越黃，營養(yǎng)價值越高，且蛋黃顏色鮮艷或者蛋黃比例大更易受到消費者青睞[24-25]。本試驗表明，兩組雞蛋的蛋黃顏色無顯著差異，但隨著飼喂時間延長，飼喂發(fā)酵飼料的雞蛋蛋黃顏色加深，可能原因是玉米黃粉富含葉黃素，而蛋黃的著色程度與飼料中的葉黃素的有效供給量和在蛋雞體內(nèi)沉積的總量有關(guān)[26]。飼喂發(fā)酵飼料可以部分改善雞蛋品質(zhì)，說明發(fā)酵玉米黃粉和玉米胚芽粕飼料對蛋雞的養(yǎng)殖具有有利影響。

3.4 發(fā)酵飼料對蛋雞抗氧化指標(biāo)的影響

超氧化物歧化酶、谷胱甘肽過氧化物酶和過氧化氫酶能共同清除機體活性氧和自由基，減輕和阻止活性氧的過氧化作用[27]?？偪寡趸芰捅┖扛叩涂梢苑从硻C體細胞受自由基攻擊的嚴(yán)重程度及機體健康程度[28]。本研究表明，玉米黃粉和玉米胚芽粕經(jīng)過發(fā)酵后對蛋雞的血清抗氧化能力有顯著提高作用，具體表現(xiàn)為試驗前期蛋雞的血清MDA 含量顯著降低，試驗后期蛋雞的血清CAT、SOD和GSH-Px含量顯著增加。可能是因為發(fā)酵過程中益生菌的生長和微生物降解作用產(chǎn)生的小肽類物質(zhì)可以提高飼料的抗氧化功能。飼喂發(fā)酵飼料可以部分改善蛋雞的肝臟抗氧化功能，說明發(fā)酵玉米黃粉和玉米胚芽粕飼料可以有效改善機體抗氧化水平，進而保障蛋雞的健康養(yǎng)殖。

4 結(jié)論

本試驗條件下，①玉米黃粉和玉米胚芽粕經(jīng)過益生菌發(fā)酵后營養(yǎng)價值提高。②大午金鳳蛋雞日糧添加10%發(fā)酵飼料后，在生產(chǎn)性能方面，可以顯著提高蛋雞產(chǎn)蛋率，對降低料蛋比和破損蛋率有一定效果；在雞蛋品質(zhì)方面，雞蛋的蛋白高度和哈氏單位顯著提高；在抗氧化指標(biāo)方面，蛋雞血清抗氧化功效顯著改善，對肝臟抗氧化功效起到積極作用。綜上所述，本試驗結(jié)果在一定程度上提高了玉米深加工副產(chǎn)物的附加值，發(fā)酵飼料在大午金鳳蛋雞的應(yīng)用上得到較好的結(jié)果，有一定的經(jīng)濟價值。