HPLC-CAD法測定薏苡仁中的甘油三油酸酯

馮永巍，鄒 鳳

無錫市食品安全檢驗檢測中心 (無錫 214142)

薏苡仁，又名薏仁、米仁, 具有具健脾滲濕，除痹止瀉，清熱排膿之功效[1]。

薏苡仁也是一種藥食同源的食品，深受消費者的喜愛?，F(xiàn)代藥理學研究表明薏苡仁中的甘油三油酸酯等甘油三酯成分具有抗腫瘤活性，并把甘油三油酸酯含量作為評價薏苡仁質(zhì)量的重要指標[2]。甘油三酯是一類非極性化合物且紫外吸收較弱，其含量檢測以高效液相色譜-蒸發(fā)光散射(HPLC-ELSD)技術為主[3-7]。但蒸發(fā)光檢測器存在響應與物質(zhì)濃度線性關系較差、易受環(huán)境溫度影響等缺陷[8]。電霧檢測器(Charged aerosol detector ,CAD)是近年來發(fā)展的一種新型通用檢測器,具有靈敏度高、線性關系好的特點，適用于皂苷類、糖類、生物堿類、脂類等無紫外吸收或弱紫外吸收成分的分析與檢測[9-12]。王莉等分別用ELSD檢測器和CAD檢測器分析了人參中三萜類皂苷化合物，結果表明CAD檢測器的靈敏度和重現(xiàn)性都優(yōu)于ELSD檢測器[13]。白長財?shù)冗\用HPLC-CAD建立了三七藥材的指紋圖譜，并與ELSD和UVD兩種檢測器進行了比較，結果顯示CAD檢測器具有較為平穩(wěn)的基線和較高的靈敏度，更加適用于含有較弱或無紫外吸收成分藥材的指紋圖譜分析[14]。應用HPLC-CAD技術檢測甘油三酯類物質(zhì)的研究尚處于起步階段，相關報道還很少。本研究旨在以甘油三油酸酯為目標物，建立薏苡仁中甘油三酯類物質(zhì)的高效液相色譜電噴霧檢測器測定方法，為薏苡仁的功效成分分析和質(zhì)量控制提供有效的技術手段。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

Ultimate 3000型高效液相色譜儀，美國賽默飛世爾公司；Corona VEO RS型CAD檢測器，美國賽默飛世爾公司； ME204E型電子天平，瑞士梅特勒公司；乙腈、二氯甲烷均為色譜純，購于上海安譜實驗科技股份有限公司；甘油三油酸酯標準品，純度98%，購于上海安譜實驗科技股份有限公司；薏苡仁樣品，均購自本地超市；中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)軟件 (2.0版)，國家藥典委員會。

1.2 方法

1.2.1色譜條件

色譜柱：Acclaim 120 C18(250×4.6 mm，5 μm)；流動相∶乙腈-二氯甲烷(70∶30，v/v)；柱溫30 ℃；流速0.6 mL/min；檢測器采集頻率10 Hz；檢測器霧化溫度35 ℃；進樣量5 μL；洗脫時間30 min。

1.2.2標準物質(zhì)的制備

將20 mg甘油三油酸酯標準品至于25 mL容量瓶中，加入乙腈定容至刻度，得到濃度0.8 mg/mL的標準儲備液。

1.2.3樣品的制備

薏苡仁樣品10 g，粉碎，過40目篩。準確稱取粉碎樣品0.6 g，置于磨口圓底燒瓶中, 加入流動相50 mL，稱定重量，回流提取30 min。冷卻至室溫，稱重，用流動相補足損失的重量，搖勻，濾紙過濾。收集濾液過微孔濾膜(0.45 μm)，待上機。

1.2.4標準曲線的繪制

取適量標準儲備液，用流動相配制成濃度為0.06、0.16、0.20、0.30和0.40 mg/mL的系列標準工作溶液，上機測定。以進樣濃度為橫坐標、峰面積為縱坐標繪制標準曲線。

1.2.5精密度試驗

將薏苡仁樣品按照1.2.3的方法進行制備，重復進樣6次，以峰面積的響應值，計算精密度。

1.2.6樣品檢測和相似度評價

從超市購買6個不同品牌的薏苡仁樣品，分別編號S1、S2、S3、S4、S5、S6。按照上述方法制備、上機。測定不同樣品中甘油三油酸酯的含量。將6個樣品的色譜圖導入國家藥典委員會“中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng) (2.0版) ”軟件, 對不同品牌薏苡仁的甘油三酯圖譜進行相似度評價。

2 結果與討論

2.1 定量檢測結果

圖1為高效液相色譜-電噴霧檢測器法檢測甘油三油酸酯標準品的色譜圖(濃度0.1 mg/mL)。圖1所示，甘油三油酸酯在16.4左右出峰，峰型左右對稱、基線平滑。

圖1 甘油三油酸酯高效液相色譜電噴霧檢測器色譜圖

2.2 標準曲線

甘油三油酸酯在0.06～0.4 mg/mL范圍內(nèi)，線性關系良好，相關系數(shù)R = 0.998 6，校準曲線方程為 y=0.782 6x +2.571 6。

2.3 精密度

HPLC-CAD法檢測甘油三油酸酯精密度測試結果見表1。如表1所示，峰面積響應值的相對標準偏差(RSD)為1.26%。

表1 精密度測定結果

2.4 實際樣品的檢測

圖2為薏苡仁樣品色譜圖。由圖2可見，薏苡仁樣品中含有個甘油三酯組分。在試驗條件下，各組分實現(xiàn)了基線分離，甘油三油酸酯的保留時間與標準品的保留試驗吻合，鄰近無重疊峰的干擾，易于定性、定量。S1～S6號樣品的甘油三油酸酯含量檢測結果見表2。結果顯示，6種薏苡仁樣品的甘油三油酸酯含量范圍在0.824%～0.995%之間。

圖2 樣品中甘油三酯的色譜圖

表2 實際樣品含量測定結果

2.5 指紋圖譜相似度比較結果

將樣品編號S1～S6的HPLC圖譜導入中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng) (2.0版)軟件，軟件根據(jù)各圖譜的共有峰，生成了對照指紋圖譜R(見圖3)。再將S1～S6號樣品與對照指紋圖譜匹配進行相似度比較，比較結果見表3。如表3所示，S1～S6號樣品與對照指紋圖譜的相似度分別為0.999、0.995、0.993、0.999、0.999、0.999，與對照圖譜的相似度均≥0.99，說明各樣品質(zhì)量具有較好一致性。

圖3 6種薏苡仁樣品指紋圖譜

表3 薏苡仁指紋圖譜相似度評價

3 結論

建立了高效液相色譜-電噴霧檢測器(HPLC-CAD)檢測薏苡仁樣品中甘油三油酸酯的方法。方法簡便、高效，重現(xiàn)性好。將該方法應用于薏苡仁中甘油三酯成分指紋圖譜的相似性分析，可有效識別不同樣品間的質(zhì)量差異。