Th1/Th2型細(xì)胞因子在HARRT免疫重建炎性綜合征中的分析*

薛 冰,閆 慧,景博瓊

新疆醫(yī)科大學(xué)第五附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科,新疆烏魯木齊 830011

高效抗逆轉(zhuǎn)錄病毒治療(HAART)是目前治療人類免疫缺陷病毒(HIV)慢性感染和獲得性免疫缺陷綜合征(AIDS)最主要的手段，該療法在一定程度上能夠?qū)崿F(xiàn)HIV和AIDS的免疫重建，延緩 HIV感染的疾病進(jìn)程，提高AIDS患者的生活質(zhì)量，延長其生命。但是有部分患者在HAART治療過程中，多數(shù)在抗病毒治療后3個(gè)月至6個(gè)月期間，對(duì)感染性致病源或非感染性致病源出現(xiàn)過度的炎性反應(yīng),導(dǎo)致臨床癥狀加重,表現(xiàn)為原本已有效治療的機(jī)會(huì)性感染惡化、出現(xiàn)新發(fā)感染等,稱為免疫重建炎性綜合征(IRIS)[1],本研究通過對(duì)HIV新發(fā)現(xiàn)且尚未治療者和既往感染并已規(guī)范啟動(dòng)HARRT者(按有無發(fā)生IRIS進(jìn)行分組)進(jìn)行血清Th1型細(xì)胞因子白細(xì)胞介素(IL)-2、γ-干擾素(IFN-γ)和Th2型細(xì)胞因子IL-4、IL-10以及外周血中CD4+T細(xì)胞數(shù)量的測定，分析了Th1和Th2細(xì)胞因子在HARRT治療中和治療后發(fā)生IRIS時(shí)的變化特點(diǎn)。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2017年6月至2018年12月在新疆醫(yī)科大學(xué)第五附屬醫(yī)院艾滋病自愿咨詢檢測(VCT)門診就診的HIV攜帶者或AIDS患者共69例。將其中23例新確診患者納入HIV新確診組，該組中男17例、女6例，年齡30～60歲，平均(45.24±15.31)歲。既往已確診并啟用HARRT治療46例，選擇治療方案為齊多夫定(AZT)+拉米夫定(3TC)+奈韋拉平(NVP)和AZT+3TC+依非韋倫(EFV)。將其中22例治療后出現(xiàn)IRIS患者納入IRIS組，該組中男16例、女6例；年齡27～53歲，平均(39.12±13.35)歲；將24例治療后未出現(xiàn)IRIS患者納入非IRIS組，其中男18例、女6例；年齡25～60歲，平均(42.66±17.81)歲。將研究期間來本院進(jìn)行健康體檢的24例健康體檢者納入健康對(duì)照組，其中男14例、女10例，年齡23～48歲，平均(35.32±12.81)歲。各組間性別比例及年齡比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，具有可比性。

1.2納入標(biāo)準(zhǔn) AIDS 診斷標(biāo)準(zhǔn)均符合中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)HIV/AIDS診斷標(biāo)準(zhǔn)及處理原則(2002)。HARRT后IRIS的診斷符合抗逆轉(zhuǎn)錄病毒治療后出現(xiàn)免疫反應(yīng)，CD4+T細(xì)胞計(jì)數(shù)基線上升，患者出現(xiàn)的癥狀不能用藥物毒性作用、不良反應(yīng)或耐藥性等原因解釋。本研究中IRIS組的臨床感染類型包括結(jié)核桿菌感染12例，單純皰疹2例，帶狀皰疹3例，乙型肝炎2例，梅毒3例。

1.3樣本采集 每位受試者分別抽取肘靜脈采血，乙二胺四乙酸二鉀(EDTA-K2)抗凝管采集2 mL，用于外周血CD4+T細(xì)胞計(jì)數(shù)，標(biāo)本采集后4 h內(nèi)完成檢測；另一管無添加劑，用于細(xì)胞因子檢測，標(biāo)本采集后2 h內(nèi)分離血清，并儲(chǔ)存在-70 ℃的低溫冰箱中，全部樣本收集完成后統(tǒng)一檢測。

1.4檢測方法

1.4.1細(xì)胞因子 使用武漢博士德生物工程有限公司生產(chǎn)的人IL-2、人IL-4、人IL-10、人IFN-γ雙抗體夾心酶聯(lián)免疫試劑盒測定細(xì)胞因子，奧地利賽默飛MK-Ⅱ酶標(biāo)儀比色分析結(jié)果。

1.4.2CD4+T細(xì)胞計(jì)數(shù) 采用BD FACS Count流式細(xì)胞儀及配套試劑盒檢測。

2 結(jié) 果

2.1HIV新確診組和健康對(duì)照組血清細(xì)胞因子水平和外周血CD4+T細(xì)胞數(shù)量比較 HIV新確診組外周血的IL-2、IFN-γ、CD4+T細(xì)胞數(shù)量明顯低于健康對(duì)照組，IL-4、IL-10明顯高于健康對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

2.2IRIS組和非IRIS組血清細(xì)胞因子水平和外周血CD4+T細(xì)胞數(shù)的比較 IRIS組外周血CD4+T細(xì)胞數(shù)明顯低于非IRIS組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。IRIS組IL-2、IFN-γ明顯低于非IRIS組，IL-4、IL-10明顯高于非IRIS組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表1 HIV新確診組和健康對(duì)照組血清細(xì)胞因子水平和CD4+T細(xì)胞數(shù)的比較

表2 IRIS組和非IRIS組血清細(xì)胞因子水平和CD4+T細(xì)胞數(shù)比較

3 討 論

CD4是HIV糖蛋白的特異性受體，因此HIV主要感染CD4+T細(xì)胞，此外還能感染巨噬細(xì)胞，樹突細(xì)胞、B細(xì)胞、腦小膠質(zhì)細(xì)胞及EB病毒轉(zhuǎn)化的B淋巴母細(xì)胞等。巨噬細(xì)胞及DC細(xì)胞可以產(chǎn)生IL-1，IL-12，它們可以促使CD4+T細(xì)胞成熟，CD4+T細(xì)胞計(jì)數(shù)能夠反映人體的免疫功能，HIV感染人體后，除了會(huì)引起外周血CD4+T細(xì)胞數(shù)量的減少，還會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞功能紊亂和細(xì)胞因子分泌異常而進(jìn)一步影響免疫功能[3]。成熟的CD4+T細(xì)胞根據(jù)其生成細(xì)胞因子的不同，可分為Th1型細(xì)胞和Th2型細(xì)胞。Th1型細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子IL-2及IFN-γ能夠阻止細(xì)胞凋亡，而Th2型細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子IL-4及IL-10可促進(jìn)細(xì)胞凋亡[4]。

HARRT通常依據(jù)患者CD4+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)和病毒載量啟動(dòng)治療，通常為CD4+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)<200/μL ，但越來越多的研究顯示，越早開始HARRT，啟動(dòng)治療時(shí)基線的CD4+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)越高，越有可能將CD4+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)維持在正常水平[5]。根據(jù)本文結(jié)果分析，即使CD4+T細(xì)胞沒有降低至需要治療的數(shù)量，Th1型和Th2型細(xì)胞因子水平與健康人相比也已開始發(fā)生變化，提示一旦機(jī)體受到HIV感染，除CD4+T細(xì)胞會(huì)受到病毒的持續(xù)攻擊之外，細(xì)胞免疫功能也會(huì)受到影響，表現(xiàn)為Th1/Th2型細(xì)胞因子穩(wěn)態(tài)的變化。2016年美國衛(wèi)生與人類服務(wù)部(DHHS)正式提出只要HIV檢測呈陽性，即不論 CD4+T 淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)為多少，都應(yīng)盡早進(jìn)行HARRT[6]。經(jīng)過HARRT治療，大多數(shù)人的免疫功能都會(huì)恢復(fù)，但是約20%的人可出現(xiàn)IRIS[7]，這可能是因?yàn)殡S著抗病毒治療后免疫功能的恢復(fù)，免疫系統(tǒng)功能增強(qiáng)，對(duì)先前潛伏感染的反應(yīng)增加，使原來已被控制的感染加重或惡化。IRIS多出現(xiàn)在抗病毒治療后3個(gè)月至6個(gè)月之間,常見的IRIS臨床類型有結(jié)核及非結(jié)核分枝桿菌感染、皰疹病毒及深部真菌如隱球菌感染等[8-9]。

細(xì)胞因子通過影響細(xì)胞免疫和體液免疫反應(yīng)的程度，影響HIV的復(fù)制，誘導(dǎo)感染者出現(xiàn)癥狀，其關(guān)系復(fù)雜，本文也顯示在HIV感染早期即可出現(xiàn)細(xì)胞因子失衡的情況[10]，如促進(jìn)細(xì)胞免疫功能的IL-2、IFN-γ的水平明顯低于健康對(duì)照組，證明在發(fā)生IRIS時(shí)機(jī)體的細(xì)胞免疫功能極度低下，大量參與細(xì)胞免疫的細(xì)胞因子被耗竭，弱化了其抗感染的能力，正常情況下IFN-γ可誘導(dǎo)Th0型細(xì)胞向Th1亞群分化，而低水平的IFN-γ表達(dá)也會(huì)減少Th1生成，導(dǎo)致CD4+T細(xì)胞免疫功能進(jìn)一步減弱；IL-4則促進(jìn)Th2活化，活化的Th2細(xì)胞分泌IL-4、IL-10等，同時(shí)HIV也可刺激外周血單個(gè)核細(xì)胞產(chǎn)生 IL-10，而IL-10抑制Th1細(xì)胞的活化和增殖，而Th1細(xì)胞產(chǎn)生的IL-2，可增強(qiáng)活化誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡(AICD)效應(yīng)[11-12]。

根據(jù)本研究，筆者認(rèn)為HIV一經(jīng)確診，就應(yīng)該對(duì)感染者進(jìn)行抗病毒治療，有利于維持CD4+T細(xì)胞數(shù)量，使其保持在較高水平，保持細(xì)胞因子穩(wěn)態(tài)，更好地發(fā)揮抗病毒、抗感染的免疫作用，此外，雖然HARRT治療過程中會(huì)發(fā)生IRIS或者有耐藥現(xiàn)象產(chǎn)生，但是HARRT仍是治療HIV/AIDS最好的臨床方法，本文通過分析新確診HIV感染者和HARRT治療后有無發(fā)生IRIS患者血清中Th1/Th2型細(xì)胞因子水平變化，為今后使用細(xì)胞因子治療HIV提供了理論支持[13]。