刺芪參膠囊活性成分含量測(cè)定及安全性評(píng)價(jià)

王曉林 - 戴鸝瑩 - 邸 松 鐘方麗 -

(吉林化工學(xué)院化學(xué)與制藥工程學(xué)院，吉林 吉林 132022)

中藥類保健食品是在中醫(yī)藥理論指導(dǎo)下以中藥材為主要成分的具有保健功能的特殊食品[1]。刺芪參膠囊是由人參、黃芪、刺玫果3味中藥材制成的保健食品，其中，人參具有抗氧化、增強(qiáng)免疫、降血糖等活性[2-4]，作為新食品原料，其主要應(yīng)用范圍已逐漸從臨床醫(yī)療擴(kuò)大到保健、食品等領(lǐng)域[5]；刺玫果含有三萜皂苷、黃酮、多糖類活性成分，具有較強(qiáng)的增強(qiáng)免疫及藥食同源的開發(fā)價(jià)值[6-7]，刺玫果與人參可以配伍使用[8]。黃芪對(duì)免疫系統(tǒng)具有良好的調(diào)節(jié)作用[9]，能提高人體的活力[10]、運(yùn)動(dòng)性能，具有抗疲勞的作用[11-12]，人參與黃芪配伍使用可提高機(jī)體免疫力[13-14]。課題組擬將人參、黃芪、刺玫果三者配伍，按《保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范》測(cè)定其標(biāo)志性成分人參皂苷及多糖的含量，并進(jìn)行急性毒性試驗(yàn)、三項(xiàng)遺傳毒性試驗(yàn)等試驗(yàn)，旨在為其研究開發(fā)提供依據(jù)。

1 試驗(yàn)部分

1.1 試劑與儀器

刺芪參膠囊：0.4 g/粒，每粒含人參0.187 5 g、黃芪0.312 5 g、刺玫果0.375 0 g，自制；

人參皂苷Rg1、Re、Rb1對(duì)照品：純度≥98.0%，北京馬踏飛燕有限公司；

葡萄糖對(duì)照品：純度≥98.0%，上海源葉生物有限公司；

乙腈、甲醇：HPLC級(jí)，天津市大茂化學(xué)試劑廠；

蒽酮：分析純，上海源葉生物有限公司；

生化試劑盒：四川新健康成生物股份有限公司；

血液學(xué)試劑盒：深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司；

環(huán)磷酰胺：江蘇盛迪醫(yī)藥有限公司；

1.8-二羥基蒽醌：上海晶純?cè)噭┯邢薰荆?/p>

氧化型輔酶II、2-氨基芴：美國(guó)Fluka公司；

敵克松：上海金橋化工廠；

疊氮鈉：ACROS公司；

水為重蒸餾水；

其他化學(xué)試劑均為分析純；

高效液相色譜儀：Agilent-1260型，搭載DAD陣列檢測(cè)器，安捷倫科技有限公司；

全自動(dòng)生化分析儀：7600型，日本日立株式會(huì)社；

奧林巴斯生物顯微鏡：CX31型，日本Olympus Corporation公司；

紫外分光光度計(jì)：TU-1810型，北京普析通用儀器有限公司；

獸用全自動(dòng)血液細(xì)胞分析儀：BC-5300Vet型，武漢盛世達(dá)醫(yī)療設(shè)備有限公司。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物

SPF級(jí)昆明種小鼠、SPF級(jí)SD大鼠：動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)為SCXK(湘)2016-0002，動(dòng)物檢疫時(shí)間為3～5 d，湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司；

輻照滅菌清潔級(jí)大鼠飼料：生產(chǎn)許可證號(hào)為SCXK(京)2014-0010，北京科澳協(xié)力飼料有限公司。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 刺芪參膠囊中人參皂苷含量的測(cè)定 按《中國(guó)藥典》2015年版一部中的方法測(cè)定。

(1) 色譜條件：以十八烷基鍵和硅膠為填充劑，乙腈為流動(dòng)相A，水為流動(dòng)相B，檢測(cè)波長(zhǎng)203 nm，流速1.0 mL/min，洗脫程序見表1。

(2) 線性關(guān)系的考察：精密稱取人參皂苷Rg1、Re、Rb1對(duì)照品5.31，4.91，4.87 mg，加甲醇定容至5 mL容量瓶中，精密吸取上述混合對(duì)照品溶液0.2，0.5，1.0，2.0，3.0，6.0 mL置于10 mL容量瓶中定容，在色譜條件下進(jìn)樣10 μL，記錄峰面積。

表1 梯度洗脫程序Table 1 Flow phase gradient elution procedure

(3) 供試品溶液配制：稱取研磨混合均勻的樣品2.50 g，采用氯仿用索氏提取器加熱回流脫脂3 h，將氯仿液回收再利用，剩余藥渣的溶劑揮干，將濾紙筒和藥渣一起移至具塞錐形瓶中，精密加入50 mL正丁醇飽和溶液，密塞，放置過(guò)夜，超聲處理30 min，過(guò)濾，棄去初濾液，精密量取續(xù)濾液25 mL于蒸發(fā)皿中蒸干溶劑，加適量甲醇將蒸發(fā)皿中的殘?jiān)芙?，并轉(zhuǎn)移到5 mL容量瓶中，甲醇定容，得供試品溶液。

(4) 方法學(xué)考察試驗(yàn)：精密吸取人參皂苷Rg1、Re、Rb1的混合對(duì)照品溶液，按規(guī)定色譜條件下重復(fù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積，計(jì)算RSD值，考察儀器精密度。取同一批樣品制備6份供試品溶液，按色譜條件進(jìn)樣，記錄人參皂苷Rg1、Re、Rb1的峰面積，計(jì)算樣品中人參皂苷的含量及RSD值，考察方法的重復(fù)性。

(5) 檢出限試驗(yàn)：精密吸取質(zhì)量濃度分別為21.24，19.64，19.48 μg/mL的人參皂苷Rg1、Re、Rb1的混合對(duì)照品溶液進(jìn)行稀釋，按規(guī)定色譜條件進(jìn)樣，以信號(hào)噪音比≥3為指標(biāo)，對(duì)儀器檢出限進(jìn)行考察。

(6) 加標(biāo)回收率試驗(yàn)和刺芪參膠囊中人參皂苷含量的測(cè)定：稱取研磨混合均勻的樣品6份(已知人參皂苷含量)，精密稱定，將適量的質(zhì)量濃度已知的人參皂苷Rg1、Re、Rb1對(duì)照品溶液加入到6份樣品中，使加入的對(duì)照品與樣品質(zhì)量比分別約為1∶1，制備6份供試品溶液，按色譜條件于203 nm處測(cè)定峰面積值，計(jì)算加標(biāo)回收率。

1.3.2 刺芪參膠囊中多糖含量的測(cè)定 參照《保健食品功效成分檢測(cè)方法》中的蒽酮—硫酸分光光度測(cè)定法。

(1) 線性關(guān)系的考察：精密稱取葡萄糖對(duì)照品5.55 mg，加水定容至50 mL容量瓶中，配制葡萄糖對(duì)照品溶液，精密吸取上述對(duì)照品溶液0.2，0.4，0.6，0.8，1.0，1.2 mL于10 mL比色管中，加水至2.0 mL，制備系列葡萄糖對(duì)照品溶液，按照規(guī)定的方法顯色，測(cè)定625 nm處的吸光度。

(2) 供試品溶液配制：稱取研磨混合均勻的樣品于100 mL容量瓶中，加水80 mL，沸水浴加熱1 h，冷卻，定容，過(guò)濾，取濾液50 mL，加糖化酶0.5 g于60 ℃以下水浴水解1 h，滅酶，冷卻，定容至50 mL，過(guò)濾，取續(xù)濾液5.0 mL于離心管中，加入無(wú)水乙醇20 mL，混勻，于4 ℃冰箱靜置4 h，離心，棄去上清液，殘?jiān)?0%乙醇洗滌，離心，殘?jiān)铀芙獠⒍ㄈ葜?5 mL容量瓶，作為供試品溶液。

(3) 方法學(xué)考察試驗(yàn)：精密吸取質(zhì)量濃度為0.11 mg/mL的葡萄糖對(duì)照品溶液，顯色，測(cè)定625 nm處的吸光度，重復(fù)測(cè)定6次，考察儀器精密度。取同一批樣品制備6份供試品溶液，顯色，測(cè)定625 nm處的吸光度，計(jì)算樣品中多糖的平均含量和RSD值，考察方法的重復(fù)性。

(4) 加標(biāo)回收率試驗(yàn)和刺芪參膠囊中多糖含量的測(cè)定：稱取研磨混合均勻的樣品6份(已知多糖含量)，精密稱定，將適量質(zhì)量濃度已知的葡萄糖對(duì)照品溶液加入到6份樣品中，使加入的對(duì)照品與樣品質(zhì)量比分別約為1∶1，按照供試品溶液制備方法進(jìn)行制備，顯色，測(cè)定625 nm處的吸光度，計(jì)算回收率。

1.3.3 大、小鼠急性經(jīng)口毒性試驗(yàn) 采用最大耐受劑量法試驗(yàn)。經(jīng)口灌胃給予刺芪參膠囊供試液，連續(xù)觀察14 d，記錄動(dòng)物的中毒癥狀和死亡情況，試驗(yàn)結(jié)束后稱重、處死動(dòng)物、解剖檢查[15]。

1.3.4 Ames試驗(yàn) 采用鼠傷寒沙門氏菌組氨酸缺陷型TA97a、TA98、TA100、TA102 4株標(biāo)準(zhǔn)突變型菌株進(jìn)行試驗(yàn)，并以多氯聯(lián)苯(PCB)誘導(dǎo)的大鼠肝微粒體酶(S-9)作為體外代謝活化系統(tǒng)。采用平板摻入法，在加與不加S-9的條件下進(jìn)行測(cè)試，計(jì)數(shù)每皿回復(fù)突變菌落數(shù)[16]。

1.3.5 小鼠骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn) 按照30 h兩次灌胃法試驗(yàn)，每次間隔24 h。試驗(yàn)時(shí)高、中、低劑量組動(dòng)物使用濃度為0.500，0.250，0.125 g/mL的供試液；陽(yáng)性對(duì)照組動(dòng)物使用濃度為2.000 mg/mL的環(huán)磷酰胺溶液。灌胃體積為20 mL/kg·BW，按照2003年版的《保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范》中該項(xiàng)試驗(yàn)的方法進(jìn)行操作，計(jì)算微核的千分率及嗜多染紅細(xì)胞與正染紅細(xì)胞比值[17]。

1.3.6 小鼠精子畸形試驗(yàn) 高、中、低劑量組動(dòng)物使用的供試液同1.3.5，設(shè)溶劑對(duì)照及環(huán)磷酰胺陽(yáng)性對(duì)照組(50 mg/kg·BW)，陽(yáng)性對(duì)照組動(dòng)物使用濃度為2.500 mg/mL的環(huán)磷酰胺溶液。各組動(dòng)物灌胃體積按20 mL/kg·BW每日經(jīng)口灌胃一次，連續(xù)灌胃5 d，按《保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范》中小鼠精子畸形試驗(yàn)中的規(guī)定，記錄畸形類型及精子畸形率[18]。

1.3.7 大鼠長(zhǎng)期喂養(yǎng)(30 d)試驗(yàn)

(1) 大鼠及分組：選用斷乳SD大鼠80只，對(duì)照組每組20只大鼠，設(shè)3個(gè)劑量組(相當(dāng)于人體推薦量的25，50，100倍)。采用喂飼法，樣品各劑量組喂飼加樣飼料，對(duì)照組喂飼不加樣的基礎(chǔ)飼料，連續(xù)喂養(yǎng)30 d。

(2) 觀察指標(biāo)：觀察大鼠是否中毒、死亡及行為和表現(xiàn)。每周稱1次體重和2次食物攝入量，計(jì)算每周食物利用率、總的食物利用率、總進(jìn)食量及總增重。于試驗(yàn)結(jié)束時(shí)禁食16 h取腹主動(dòng)脈血，測(cè)定血液學(xué)指標(biāo)和血清生化指標(biāo)；試驗(yàn)結(jié)束時(shí)處死大鼠，解剖，觀察其內(nèi)臟的變化，對(duì)其肝、腎、脾、睪丸進(jìn)行稱重，計(jì)算其臟體比，取肝、腎、脾、胃腸、睪丸(卵巢)作組織病理學(xué)檢查[19]。

1.4 數(shù)據(jù)處理

小鼠骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn)用泊松分布和卡方檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，小鼠精子畸形試驗(yàn)采用X2檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，長(zhǎng)期喂養(yǎng)(30 d)試驗(yàn)采用SPSS統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)各項(xiàng)檢測(cè)數(shù)據(jù)作單因素方差分析和(或)t檢驗(yàn)。

2 結(jié)果與討論

2.1 人參皂苷含量的測(cè)定

2.1.1 線性關(guān)系 由表2可知，人參皂苷Rg1、Re、Rb1分別在21.24～637.20，19.64～589.20，19.48～584.40 μg/mL呈線性關(guān)系。

2.1.2 方法學(xué)考察 結(jié)果(表3)表明，儀器精密度、方法重復(fù)性良好。

表2 線性關(guān)系考察結(jié)果Table 2 The results of linear relationship investigation

表3 方法學(xué)考察試驗(yàn)數(shù)據(jù)

Table 3 Methodological experimental data (n =6)%

2.1.3 檢出限 試驗(yàn)表明，當(dāng)人參皂苷Rg1、Re、Rb1對(duì)照品質(zhì)量濃度分別為5.31，4.91，4.87 μg/mL時(shí)，儀器的信號(hào)噪音比為3.8～5.9，上述濃度即定為利用該儀器檢測(cè)人參皂苷Rg1、Re、Rb1的檢出限值。

2.1.4 加標(biāo)回收率試驗(yàn)和刺芪參膠囊中人參皂苷含量測(cè)定 由表4可知，3批刺芪參膠囊中人參皂苷含量分別為0.283，0.279，0.274 g/100 g(以人參皂苷Rg1、Re、Rb1的三者之和計(jì))。

2.2 多糖含量的測(cè)定

2.2.1 線性關(guān)系 以葡萄糖對(duì)照品質(zhì)量的數(shù)據(jù)為橫軸，測(cè)定的吸光度值為縱軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程為y=4.558 4x-0.004 7，R2=0.999 4，說(shuō)明葡萄糖質(zhì)量在0.022～0.132 mg內(nèi)呈線性關(guān)系。

表4 加樣回收率結(jié)果Table 4 Result of recovery tests

2.2.2 方法學(xué)考察 試驗(yàn)表明，儀器在檢測(cè)葡萄糖對(duì)照品溶液的吸光度時(shí)，其RSD為0.39%(n=6)，表明該方法的儀器精密度良好；6份供試品的多糖含量分別為3.37，3.28，3.39，3.33，3.29，3.37 g/100 g，平值為3.34 g/100 g，RSD為1.37%，表明該方法的重復(fù)性良好。

2.2.3 加標(biāo)回收率試驗(yàn)和刺芪參膠囊中多糖含量測(cè)定

由表5可知，3批刺芪參膠囊中多糖含量分別為3.12，3.29，3.38 g/100 g(以葡萄糖計(jì))。

2.3 急性毒性試驗(yàn)

由表6可知，雌、雄昆明小鼠和SD雌、雄大鼠在觀察期內(nèi)均未出現(xiàn)死亡和明顯中毒癥狀，刺芪參膠囊對(duì)大、小鼠急性經(jīng)口MTD值>24.0 g/kg·BW，屬于無(wú)毒級(jí)。

2.4 遺傳毒性試驗(yàn)

2.4.1 Ames試驗(yàn) 由表7、8可知，刺芪參膠囊各劑量對(duì)各試驗(yàn)菌株在加與不加S-9代謝活化系統(tǒng)情況下，回復(fù)突變數(shù)均未小于自發(fā)回復(fù)突變菌落數(shù)的2倍，并且沒有劑量—反應(yīng)關(guān)系，而陽(yáng)性對(duì)照組的平均回變菌落數(shù)均大于溶劑對(duì)照組2倍以上，呈現(xiàn)明顯陽(yáng)性，說(shuō)明刺芪參膠囊未誘導(dǎo)4種菌株回變菌落數(shù)增加，Ames 試驗(yàn)結(jié)果為陰性。

2.4.2 小鼠骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn) 由表9可知，刺芪參膠囊各劑量組小鼠骨髓PCE微核率與純水對(duì)照組相比，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，環(huán)磷酰胺對(duì)照組小鼠骨髓PCE微核率與純水對(duì)照組相比，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；未見刺芪參膠囊誘發(fā)小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核率增高，說(shuō)明刺芪參膠囊在各劑量下未見致突變作用。

2.4.3 小鼠精子畸形試驗(yàn) 由表10可知，溶劑對(duì)照組昆明雄性小鼠精子畸形率為1.30%，刺芪參膠囊各劑量組精子畸形率為1.32%～1.42%，與純水對(duì)照組相比，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；環(huán)磷酰胺對(duì)照組精子畸形率為5.42%，與純水對(duì)照組相比，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，精子畸形類型主要表現(xiàn)以無(wú)定形為主。說(shuō)明刺芪參膠囊未誘發(fā)小鼠精子畸形率增高。

表5 加樣回收率結(jié)果Table 5 Result of recovery tests

表6 急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)結(jié)果

Table 6 Results of acute oral toxicity test

性別劑量/(g·kg-1·BW)動(dòng)物數(shù)累積死亡數(shù)MTD/(g·kg-1·BW)始重/g給予受試物第7天體重/g終重/g雌(小)24.0100>24.021.6±0.627.6±2.131.4±2.0雄(小)24.0100>24.021.6±0.834.6±2.240.0±2.4雌(大)24.0100>24.0210.0±10.9237.3±8.4245.0±7.5雄(大)24.0100>24.0211.7±7.6280.5±14.5313.2±15.6

表7 Ames試驗(yàn)結(jié)果Ⅰ?Table 7 Results of Ames test Ⅰ

? A為敵克松，50 μg /皿；B為疊氮鈉，1.5 μg /皿；C為2-氨基芴，10 μg /皿；D為1,8二羥蒽醌，50 μg /皿。

表8 Ames試驗(yàn)結(jié)果Ⅱ?Table 8 Results of Ames test Ⅱ

? A為敵克松，50 μg /皿；B為疊氮鈉，1.5 μg /皿；C為2-氨基芴，10 μg /皿；D為1,8二羥蒽醌，50 μg /皿。

2.5 大鼠長(zhǎng)期喂養(yǎng)(30 d)試驗(yàn)

2.5.1 一般觀察 試驗(yàn)表明，各劑量組雌、雄鼠在整個(gè)試驗(yàn)期間的活動(dòng)、進(jìn)食、飲水及糞便性狀正常，沒有發(fā)現(xiàn)其行為明顯改變、中毒及死亡。

2.5.2 對(duì)SD大鼠體重及體重增長(zhǎng)的影響 由表11可知，各劑量組雌、雄鼠各周體重和試驗(yàn)期間體重總增重與對(duì)照組相比，均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

2.5.3 對(duì)SD大鼠進(jìn)食及食物利用率的影響 由表12可知，各劑量組雌、雄鼠各周進(jìn)食量及總進(jìn)食量與對(duì)照組相比，均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；各劑量組雌、雄鼠各周食物利用率及試驗(yàn)期間雌、雄鼠總食物利用率與對(duì)照組比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

2.5.4 血液學(xué)指標(biāo)檢查 由表13可知，各劑量組雌、雄鼠試驗(yàn)?zāi)┢诟黜?xiàng)血液學(xué)指標(biāo)與對(duì)照組相比，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

2.5.5 血液生化指標(biāo)檢查 由表14可知，低劑量組雌鼠谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、甘油三酯(TG)降低，與對(duì)照組相比，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；中、高劑量組雌鼠該3項(xiàng)指標(biāo)與對(duì)照組相比，均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，故該3項(xiàng)指標(biāo)的改變無(wú)生物學(xué)意義。各劑量組雄鼠各項(xiàng)生化指標(biāo)和各劑量組雌鼠其他各項(xiàng)血液生化指標(biāo)與對(duì)照組相比，均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

表9 小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核試驗(yàn)結(jié)果?Table 9 Micronucleus test of polychromatic erythrocytes in bone marrow of mice

? **與溶劑對(duì)照組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。

表10 對(duì)小鼠精子畸形試驗(yàn)的影響?Table 10 The effect of Ciqishen capsules on the mouse sperm abnormality test

? **與溶劑對(duì)照組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。

表11 刺芪參膠囊對(duì)大鼠體重的影響Table 11 The effect of Ciqishen capsules on the body weight of rats

2.5.6 臟器絕對(duì)重量和臟/體比值 由表15可知，各劑量組雌、雄鼠各項(xiàng)臟器重量與對(duì)照組相比均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；中、高劑量組雄鼠腎臟體重比值略高于對(duì)照組，與對(duì)照組相比，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，但該兩項(xiàng)指標(biāo)值在正常值范圍內(nèi)，故認(rèn)為該兩項(xiàng)指標(biāo)的改變無(wú)生物學(xué)意義；各劑量組雌鼠各臟器系數(shù)和各劑量組雄鼠其他臟器系數(shù)與對(duì)照組相比，均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

表12 刺芪參膠囊對(duì)大鼠各周進(jìn)食量和各周食物利用率的影響

Table 12 The effect of Ciqishen capsules on the food intake and food utilization of rats each week

性別時(shí)間/周0 mg/kg·BW1 334 mg/kg·BW2 667 mg/kg·BW5 334 mg/kg·BW進(jìn)食量/g食物利用率/%進(jìn)食量/g食物利用率/%進(jìn)食量/g食物利用率/%進(jìn)食量/g食物利用率/%雌1113.8±4.840.7±2.5116.7±5.641.5±4.0111.1±6.038.8±3.3114.0±4.439.2±2.72152.8±5.626.5±4.5152.8±4.524.7±2.4152.0±6.126.2±3.5161.3±4.224.9±4.13150.9±5.820.2±3.0151.2±3.321.8±4.0145.7±1.819.0±3.3148.6±9.118.2±5.04170.2±13.514.0±3.5173.4±11.312.8±5.0171.5±12.214.5±4.0171.3±10.814.8±2.8合計(jì)587.7±21.424.0±1.7594.1±37.923.9±2.1580.3±38.723.3±2.1595.2±24.523.1±2.0雄1122.8±10.144.3±3.2123.4±10.644.6±4.6126.9±8.345.3±3.4127.9±8.544.2±2.42171.5±7.829.3±3.8175.4±3.030.8±2.8175.4±3.429.2±1.9174.1±4.129.3±5.63192.2±6.237.0±4.4192.8±8.035.6±3.9191.0±9.334.6±6.4193.9±5.938.8±3.14233.5±15.929.3±16236.7±13.830.1±4.1239.6±24.027.7±3.4251.3±15.629.3±2.4合計(jì)720.0±31.733.9±1.4728.3±29.234.2±2.1732.9±33.733.0±2.5747.2±23.534.4±1.6

表13 刺芪參膠囊對(duì)大鼠血常規(guī)的影響

Table 13 The effect of Ciqishen capsules on the blood routine of rats

劑量/(mg·kg-1·BW)RBC/(×10l2·L-1)HGB/(g·L-1)PLT/(×109·L-1)WBC/(×109·L-1)HCT/%雌雄雌雄雌雄雌雄雌雄07.53±0.438.03±0.70164.0±10.8173.7±18.2949±158996±1924.36±1.008.11±1.0847.5±3.250.0±5.41 3347.30±0.687.89±0.24157.2±12.9172.7±7.4842±104911±1213.68±1.248.83±0.9545.9±3.250.6±1.72 6677.96±0.617.51±0.57171.5±11.3165.7±9.6842±1281002±1303.76±1.197.83±2.1449.8±3.547.8±3.05 3347.62±0.647.99±0.50165.4±15.9176.5±11.4776±159889±1373.22±1.226.91±2.1548.4±4.552.0±3.4劑量/(mg·kg-1·BW)NEU/%LYM/%MON/%EOS/%BAS/%雌雄雌雄雌雄雌雄雌雄014.86±5.5311.56±4.1480.34±6.4983.40±4.263.16±1.064.17±1.381.64±0.550.86±0.410.00±0.000.01±0.031 33418.45±9.6011.71±4.1178.56±10.0482.61±4.881.94±0.874.75±1.261.05±0.630.92±0.360.00±0.000.01±0.032 66717.28±5.1611.77±2.7779.20±5.5383.83±4.042.17±1.233.19±1.451.35±0.441.20±0.380.00±0.000.01±0.035 33418.06±9.4412.39±3.0777.98±13.0883.46±3.571.63±1.773.22±1.122.26±2.530.92±0.350.07±0.220.01±0.03

表14 刺芪參膠囊對(duì)大鼠生化指標(biāo)的影響?

Table 14 The effect of Ciqishen capsules on the biochemical indicators of rats

劑量/(mg·kg-1·BW)TP/ (g·L-1)ALB/(g·L-1)ALT/(U·L-1)AST/(IU·L-1)BUN/(mmol·L-1)雌雄雌雄雌雄雌雄雌雄054.7±2.153.4±2.131.5±1.030.2±1.731.3±6.732.2±8.283.2±9.787.2±11.57.48±1.284.75±0.611 33456.5±1.852.6±1.132.2±1.029.9±0.723.8±3.2??36.9±9.371.2±6.1??87.5±9.56.67±0.954.86±0.982 66756.3±1.953.5±1.732.3±1.030.3±0.926.6±5.834.9±7.786.0±9.584.7±10.87.32±1.045.42±0.585 33458.1±3.752.2±2.233.1±1.929.9±1.027.9±6.332.0±8.380.7±11.280.5±12.47.96±1.304.98±0.83劑量/(mg·kg-1·BW)CREA/(μmol·L-1)TG/(mmol·L-1)CHOL/(mmol·L-1)GLU/(mmol·L-1)雌雄雌雄雌雄雌雄035.4±5.725.7±3.40.47±0.100.71±0.242.30±0.202.09±0.257.12±0.766.22±0.731 33431.0±3.925.6±3.90.37±0.07??0.61±0.242.42±0.482.00±0.327.58±0.847.01±0.962 66732.2±3.627.6±5.70.42±0.100.51±0.311.91±0.492.08±0.387.45±0.976.78±1.655 33433.2±6.429.8±2.60.53±0.110.54±0.212.23±0.441.82±0.248.04±0.657.78±1.83

? **與溶劑對(duì)照組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。

表15 刺芪參膠囊對(duì)大鼠臟器重量與臟/體比的影響?Table 15 The effect of Ciqishen capsules on the organ weight and the organ / body ratio of rats

? *與溶劑對(duì)照組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。

2.5.7 病理組織學(xué)檢查 試驗(yàn)結(jié)束后處死動(dòng)物，解剖，肉眼觀察未見異常。組織病理學(xué)檢查結(jié)果顯示，對(duì)照組有1例雌性大鼠肝臟有輕度小灶狀壞死，高劑量組有1例雄鼠腎小管變性、壞死，系動(dòng)物自發(fā)病變，與刺芪參膠囊無(wú)關(guān)，對(duì)照組及高劑量組動(dòng)物其余臟器未見明顯病理組織學(xué)改變。

3 結(jié)論

建立了HPLC測(cè)定刺芪參膠囊中人參皂苷(以人參皂苷Rg1、Re、Rb1三者之和計(jì))含量的方法，經(jīng)測(cè)定刺芪參膠囊中人參皂苷含量為0.273 g/100 g；建立了UV測(cè)定刺芪參膠囊中多糖(以葡萄糖計(jì))含量的方法，經(jīng)測(cè)定刺芪參膠囊中多糖(以葡萄糖計(jì))含量為3.190 g/100 g。為了科學(xué)地評(píng)價(jià)刺芪參膠囊作為保健食品的安全性，對(duì)其進(jìn)行了大、小鼠的急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)、遺傳毒性試驗(yàn)及大鼠30 d 喂養(yǎng)試驗(yàn)，結(jié)果表明，刺芪參膠囊對(duì)大、小鼠急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)結(jié)果MTD值均>24.0 g/kg·BW，屬無(wú)毒性；三項(xiàng)遺傳毒性試驗(yàn)結(jié)果均為陰性，表明刺芪參膠囊未見致畸變作用；刺芪參膠囊連續(xù)30 d給藥沒有對(duì)大鼠的血液生化指標(biāo)產(chǎn)生影響，沒有對(duì)大鼠的食物利用率、體重、進(jìn)食量以及試驗(yàn)期間總食物利用率、增重、攝食量、主要免疫器官的臟/體比產(chǎn)生明顯影響；動(dòng)物血液學(xué)指標(biāo)檢查、血生化指標(biāo)檢查未見異常變化；未發(fā)現(xiàn)與刺芪參膠囊有關(guān)的病理組織學(xué)改變。綜上，在試驗(yàn)條件下口服刺芪參膠囊無(wú)明顯毒副作用。刺芪參膠囊的安全性評(píng)價(jià)按《保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范》(2003年)的規(guī)定進(jìn)行，但該《規(guī)范》目前已失效，而新的《保健食品毒理學(xué)評(píng)價(jià)程序》仍處于征求意見階段，待其實(shí)施后，課題組將根據(jù)相關(guān)要求對(duì)試驗(yàn)內(nèi)容進(jìn)行補(bǔ)充。