兒童七種呼吸道病毒檢測結(jié)果分析

林閩川 李秀娟 李德法

[摘要] 目的 了解廈門地區(qū)兒童急性呼吸道感染病毒病原學特點及流行情況。方法 方便選取2018年2月—2019年1月在該院兒科及新生兒科住院患兒共3 837例，均行7項呼吸道病毒聯(lián)合檢測，對檢測結(jié)果進行回顧性分析。結(jié)果 937例患兒檢出至少一種病毒，呼吸道感染總陽性率24.6%（943/3 837），其中呼吸道合胞病毒（RSV） 568例（14.8%）、腺病毒（ADA）128例（3.3%）、流感病毒A（IFA） 107例（2.8%）、副流感Ⅲ（PIVⅢ）101例（2.6%），副流感Ⅰ（PIV） 24例（0.6%）、副流感Ⅱ（PIVⅡ） 7例（0.2%）、流感病毒B（ IFB） 14 例（0.4%）;RSV和 ADA混合感染3例， AD副流感3混合感染1例;副流感2和3混合感染1例，流感A和B混合感染1例。新生兒及嬰幼兒占整體陽性感染人群比例為60.1%。病毒感染陽性檢出率最高的在嬰兒組，除新生兒組外，隨年齡增大，病毒感染陽性檢出率呈下降趨勢，差異有統(tǒng)計學意義（χ2=38.530，P=0.000<0.05）。3歲以內(nèi)的嬰幼兒均是 RSV 的檢出率最高，新生兒，嬰兒，幼兒檢出率分別是 21.6%，20.3%，11.9%。呼吸道合胞病毒（RSV）占總陽性病毒株的60.2%（568/943）。廈門地區(qū)呼吸道病毒感染有明顯的季節(jié)性，不同月份陽性率不同，四季當中，春、冬季陽性率較高，夏、秋季陽性較低。結(jié)論 RSV病毒是廈門地區(qū)小兒急性呼吸道感染的主要病原，年齡越小發(fā)病率越高，呼吸道病毒感染呈季節(jié)性流行，冬春陽性率較高。

[關(guān)鍵詞] 呼吸道病毒;兒童;直接免疫熒光法

[中圖分類號] R725? ? ? ? ? [文獻標識碼] A? ? ? ? ? [文章編號] 1674-0742（2020）02（b）-0177-04

Detection and Analysis of Seven Kinds of Respiratory Virus in Children

LIN Min-chuan， LI Xiu-juan， LI De-fa

Department of Medical Laboratory， Women and Children's Hospital Affiliated to Xiamen University（Xiamen Maternal and Child Health Hospital）， Xiamen， Fujian Province， 361003 China

[Abstract] Objective To understand the etiological characteristics and epidemic situation of acute respiratory tract infection virus in children in Xiamen. Methods From February 2018 to January 2019， 3 837 hospitalized children in pediatrics and neonatal department of the hospital were convenienty tested for seven respiratory viruses， and the results were analyzed retrospectively. Results At least one virus was detected in 937 children. The total positive rate of respiratory tract infection was 24.4% （943/3 837）. Among them， respiratory syncytial virus （RSV） was 568 cases （14.8%）， parainfluenza virus Ⅲ （PIVⅢ） 101 cases （2.6%）， adenovirus 128 cases （3.3%）， influenza virus A （IFA） 107 cases （2.8%）， parainfluenza virus 1 （PIV1） 24 cases（0.6%）， parainfluenza 2 （PIVⅡ） 7 cases （0.2%） and Influenza B （IFB） 14 cases（0.4%）， RSV and ADA mixed infection 3 cases， AD and parainfluenza 3 mixed infection 1 case， parainfluenza Ⅱ and Ⅲ mixed infection 1 case， influenza A and B mixed infection 1 case. Neonates and infants accounted for 60.1% of the total positive population. The highest positive rate of virus infection was found in the infant group. Except for the newborn group， with the increase of age， the positive rate of virus infection showed a downward trend. The difference was statistically significant （χ2=38.530， P=0.000 <0.05）. The detection rate of RSV was the highest in infants under 3 years old. The detection rates of RSV in newborns， infants and infants were 21.6%， 20.3% and 11.9% respectively. Respiratory syncytial virus （RSV） accounted for 60.2% of the total positive strains （568/943）. Respiratory viral infection has obvious seasonality in Xiamen. The positive rate varies in different months. In the four seasons， the positive rate is higher in spring and winter， and lower in summer and autumn. Conclusion RSV is the main pathogen of acute respiratory tract infection in children in Xiamen. The younger the age， the higher the incidence， the seasonal prevalence of respiratory tract virus infection， and the higher the positive rate in winter and spring.

[Key words] Respiratory virus; Children; Direct immunofluorescence assay

兒童最常見的呼吸道疾病是急性呼吸道感染（ARIS），其中80% 以上是由病毒感染引起的[1]。兒童病毒感染率高，傳播速度快，并呈一定的地域分布和季節(jié)流行趨勢，副流感病毒Ⅰ（PIVⅠ）、副流感病毒Ⅱ（PIVⅡ）、副流感病毒Ⅲ（PIV Ⅲ）、流感病毒A（IFA）、流感病毒B（IFB）、呼吸道合胞病毒（RSV）和腺病毒（ADV）等是目前認為引起小兒急性下呼吸道感染的主要病原體[2]。為了解廈門地區(qū)小兒下呼吸道感染病原情況，探討不同年齡段，不同性別兒童急性呼吸道感染的病毒病原學構(gòu)成及不同病毒感染的季節(jié)流行特征。該文對2018年2月—2019年1月在該院新生兒科及兒科住院的3 837例患兒鼻咽深部分泌物的7 種呼吸道病毒檢測結(jié)果進行回顧性分析，現(xiàn)報道如下。

1? 對象與方法

1.1? 研究對象

方便選取在廈門大學附屬婦女兒童醫(yī)院兒科及新生兒科住院并行7項呼吸道病毒檢測的患兒為研究對象，男 2 363例、女 1 474 例;年齡最小3 d，最大13.7歲，平均年齡1.94歲;其中新生兒（≤28 d）338例，嬰兒（28 d，≤1 歲） 1 673例，幼兒（1歲，≤3 歲） 992例;學齡前兒童 （3歲，≤7 歲） 715例，學齡兒童（ 7 歲，≤14歲）119例。該研究中患兒家屬知情同意，并經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準。

1.2? 試劑與儀器

7項呼吸道病毒診斷試劑盒（D3 Ultra TM DFA，Diagnostic Hybrids）， 顯微鏡（LEICADM500熒光顯微鏡）。

1.3? 標本采集與處理

患兒住院當天或次日晨無菌采集鼻咽深部分泌物，標本送至實驗室，用旋渦振蕩器將鼻咽分泌物打散混勻，再丟棄絨拭子，進行呼吸道病毒病原檢測。2 000 r/min離心 10 min棄去上清，留約150 μL，吸管上下吹打混勻，形成混濁細胞懸浮液，在玻璃片上點樣，每個點加25 μL細胞懸液，電吹風冷風10～15 min吹至干燥，浸沒在丙酮溶液固定10 min，取出玻片，風干。在標本片和對照玻片的每個細胞點加上50 μL相應的熒光抗體（約25 μL），在37℃濕盒孵育約30 min，PBS沖洗3遍，除去多余的洗液，每個細胞點加上1滴封閉液。最后覆上蓋玻片。

1.4? 結(jié)果判定

在熒光顯微鏡下觀察結(jié)果。在檢測樣本前先檢查陽性和陰性對照。鏡下顯示蘋果綠熒光的細胞，為陽性細胞，否則判為陰性。同時檢出兩種及以上病毒陽性者為混合感染。

1.5? 統(tǒng)計方法

采用 SPSS 22.0 統(tǒng)計學軟件處理數(shù)據(jù)。計數(shù)資料用例數(shù)及百分比（%）表示，組間比較采用χ2檢驗，P<0.05 為差異有統(tǒng)計學意義。

2? 結(jié)果

2.1? 兒童病毒感染總體情況

3 837 例患兒中有943例呼吸道病毒陽性，陽性檢出率為24.6%。2 363例男童中有608 例陽性，感染率25.7%，1474 例女童中有335 例陽性，感染率為22.7%。男孩感染陽性率高于女孩，差異有統(tǒng)計學意義（χ2=4.415，P=0.036 <0.05）。943例陽性患兒中2種及以上病毒混合感染6 例。感染率最高前3種病毒分別是呼吸道合胞病毒RSV， 腺病毒ADA和流感病毒A，陽性率分別為14.8%，3.3%，2.8%。見表1。

2.2? 病毒檢出率與年齡的關(guān)系

從呼吸道病毒感染住院患兒年齡及性別構(gòu)成看，其中新生兒和嬰幼兒占78.3%，男童占61.5%。新生兒及嬰幼兒占整體陽性感染人群比例為60.1%。病毒感染陽性檢出率最高的在嬰兒組，除新生兒組外，隨年齡增大，病毒感染陽性檢出率呈下降趨勢，差異有統(tǒng)計學意義（χ2=38.530，P=0.000 <0.05）。3歲以內(nèi)的嬰幼兒均是 RSV 的檢出率最高，新生兒，嬰兒，幼兒檢出率分別是 21.6%，20.3%，11.9%。學齡前組AD的檢出率最高，檢出率為7.0%。學齡期患兒檢出率最高的是IFA， 檢出率為6.7%。PIVⅠ、PIVⅡ、流B在不同年齡組間陽性檢出率均較低。見表 2。

2.3? 感染病毒種類的季節(jié)和月份分布

呼吸道病毒感染有明顯的季節(jié)性，不同月份陽性率明顯不同，在冬季12月，1月及2月感染陽性率高，陽性檢出率分別為33.2%，38.6%，31.4%。其中陽性率最高月份在1月。1月以后病毒陽性檢出率呈現(xiàn)明顯下降趨勢，夏季6、7、8月陽性率較低，從9月份開始陽性率又開始上升，RSV在12個月份中檢出率均是最高， PIV Ⅲ在5月6月檢出率較高，流A感染陽性主要集中在冬季（12月，1月，2月，3月）。見表3。

3? 討論

病毒是引起呼吸道感染的重要病原體。呼吸道病毒的傳播特點導致了在嬰幼兒及學齡兒童中的感染率高，易造成大規(guī)模流行，因此兒童是各衛(wèi)生機構(gòu)的重點檢測對象[3]。明確呼吸道病毒的主要病原學組成，掌握其與性別、年齡、流行季節(jié)等的關(guān)系，有助于盡早對兒童呼吸道感染采取積極有效地預防及治療措施，從而間接降低臨床抗生素的濫用。

該研究對3 837 例ARIS患兒的7項呼吸道病毒檢測結(jié)果進行回顧性分析發(fā)現(xiàn)，943例呼吸道病毒檢測結(jié)果呈陽性，陽性檢出率為24.6%。結(jié)果高于武漢16.20%[4]，西安12.18%[5]。但低于廣西 37.46%[6]，長沙 28.5%[7]，深圳34.17%[8]，不同地區(qū)病毒總檢出率差異大，可能與地理環(huán)境、氣候特征差異等因素相關(guān)，病毒的總檢出率與月平均氣溫、風速可能相關(guān)[9];也可能與不同地區(qū)病毒檢測方法（如分子生物學技術(shù)、免疫熒光技術(shù)等）不同，檢驗試劑盒不同等相關(guān)因素導致病毒檢出率有差異。也可能是由于這7種常見呼吸道病毒中除了腺病毒外其余6種呼吸道病毒均為RNA病毒，RNA病毒的單鏈結(jié)構(gòu)特征使其極易發(fā)生變異，形成新型病毒株;且不同的宿主情況、氣候、溫度等都有可能對病毒的生長和繁殖造成影響。

該研究發(fā)現(xiàn)引起小兒急性呼吸道感染的最主要的病毒是RSV（14.8%），其次為ADV （3.3%）和流感病毒A（2.8%）。大多數(shù)呼吸道病毒感染為單病毒感染，混合病毒感染非常少見。在該研究中發(fā)現(xiàn)6例混合感染患兒，占陽性發(fā)生率0.6%，兩種病毒感染僅發(fā)生在小部分兒童身上，這與之前在澳大利亞進行的研究相似[10]。

從季節(jié)分布來看，呼吸道病毒流行常有一定的季節(jié)性。該次研究表明從12月至次年的4月呼吸道病毒的檢出率最高，病毒感染主要在冬季，其次是春季，這與杜帥先[4]等報道不太一致，這可能與地域氣候差別有一定的關(guān)系。有發(fā)現(xiàn)，低氣溫是導致RSV感染的主要因素，春、冬季節(jié)是流行高峰[11]，而且RSV感染后免疫力不強，可反復感染，這可能是造成在7種常見呼吸道病毒感染中RSV感染率最高的原因。

從性別分布來看，男、女患兒檢出陽性率差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），廈門地區(qū)呼吸道病毒感染男孩感染陽性率高于女孩。從年齡分布來看，該研究顯示病毒感染在3歲以內(nèi)陽性率最高，將年齡段進一步細分為5組，新生兒組，嬰兒組，幼兒組，學齡前及學齡期各組病毒陽性檢出率分別為25.2%、28.8%、22.8%、18.6%、14.3%。新生兒組與嬰兒組兩組陽性率差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），但明顯高于其他3組，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.01）。表明1歲以內(nèi)的新生兒及嬰兒更易受病毒感染。也說明兒童呼吸道病毒感染與年齡有關(guān)，年齡越小，病毒感染的陽性率越高。研究還顯示，從新生兒期到幼兒期，3個年齡組的各類病毒感染中均是RSV的檢出率最高，分別是 21.6、20.3%、11.9%，而學齡前及學齡期檢出率分別為4.8%、3.4%，表明3歲以內(nèi)呼吸道感染的主要病原菌為RSV。國內(nèi)也有相似文獻報道[11]，RSV在3歲前檢出率最高，嬰兒和幼兒期感染率為8.17%、2.57%，3歲以上檢出率降低，學齡前及學齡期兒童檢出率分別為0.64%、0.00%。這可能一方面由于肺炎及支氣管炎等呼吸道疾病與RSV相關(guān)，而另一方面又與嬰幼兒體液免疫系統(tǒng)尚未完善，免疫功能低下易感等因素相關(guān)。

綜上所述，廈門地區(qū)小兒急性呼吸道感染的主要病原菌為RSV，男孩感染陽性率高于女孩，3歲以下兒童是呼吸道病毒易感人群，且在≤1歲患兒中感染率最高，流感病毒A在3歲以上兒童感染率較高，且與RSV一樣，主要高發(fā)于春、冬季節(jié);其次為ADV及PIVⅢ，這2種病毒在全年均易感高發(fā)。隨著年齡的增長，病毒的感染率逐漸下降。直接免疫熒光法檢測7種呼吸道病毒能為臨床提供病原學依據(jù)，指導臨床結(jié)合幼兒年齡、季節(jié)、性別等流行病學資料來盡早、及時明確病原，減少疾病傳播、防止抗菌藥物濫用提供可靠依據(jù)。

[參考文獻]

[1]? 王倩，杜永剛.兒童呼吸道病毒感染發(fā)病特點及影響因素[J].基層醫(yī)學論壇，2015，19（15）：2083-2084.

[2]? 楊泉，席金甌.直接免疫熒光法檢測兒童呼吸道病毒抗原的結(jié)果分析[J].國際檢驗醫(yī)學雜志，2016，16（37）：2331-2333.

[3]? Khamrin P，Thongprachum A，Shimizu H，et al.Detection of human bocavirus 1 and 2 from children with acute gastroenteritis in Japan[J]. Med Virol，2012，84（6）：901-905.

[4]? 杜帥先，陳海婧，馬玲，等.兒童呼吸道病毒感染現(xiàn)狀分析[J]. 臨床血液學雜志：輸血與檢驗，2016（1）：96-98.

[5]? 李秋紅，周莉，常子維，等. 6298例患兒呼吸道病毒抗體IgM 檢測結(jié)果分析[J].檢驗醫(yī)學與臨床，2017，8（14）：2282-2284.

[6]? 陳華俊.小兒急性呼吸道感染9項病原體的感染情況及其分布特點[J].廣西醫(yī)學，2018，40（11）：35-38，49.

[7]? 謝紅軍，李征.小兒急性呼吸道感染3309例病毒抗原檢測及分析[J].湖南師范大學學報：醫(yī)學版，2017，14（1）：58-60.

[8]? 劉羅慧，邱明慧，劉婉趨.兒童呼吸道感染常見病毒檢測結(jié)果分析[J].預防醫(yī)學，2018，8（30）：849-851.

[9]? 季偉，陳正榮，郭洪波，等.蘇州兒童醫(yī)院住院兒童呼吸道合胞病毒流行特點及與氣候因素相關(guān)性研究[J].中國當代兒科雜志，2015，17（5）：482-486.

[10]? Druce J， Tran T， Kelly H， et al. Laboratory diagnosis and surveillance of human respiratory viruses by PCR in Victoria， Australia， 2002-2003[J].J Med Virol，2005（75）：122-129.

[11]? 李屾，劉明晶，王育龍.2672例呼吸道感染患兒血清 8 種非典型病原體 Ig M 抗體檢測結(jié)果分析[J].山東醫(yī)藥，2018， 58（42）：49-51.

（收稿日期：2019-11-11）

[作者簡介] 林閩川（1980-），男，福建漳州人，本科，主管技師，研究方向：免疫技術(shù)。