右美托咪定在大鼠蛛網(wǎng)膜下腔出血后對(duì)海馬神經(jīng)元炎性細(xì)胞因子的影響

梁兆俊，馮婭妮，石 強(qiáng)

(中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院，1.麻醉科，2.神經(jīng)外科, 遼寧 沈陽(yáng) 110001)

右美托咪定(dexmedetomidine，Dex)是一種高選擇性的α2腎上腺素能受體激動(dòng)劑，具有鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛、抑制交感、抗焦慮、抑制呼吸輕、減輕炎癥反應(yīng)等作用。目前關(guān)于Dex抗炎作用成為研究熱點(diǎn)之一。Jiang等[1]就關(guān)于Dex對(duì)腦缺血損傷的保護(hù)作用做了一個(gè)Meta分析發(fā)現(xiàn)其可以減輕炎性介質(zhì)的釋放。近期發(fā)現(xiàn)，Dex通過(guò)TLR4/NF-κB 途徑降低 NOD 樣受體NLRP3(NOD-like receptor protein 3， NLRP3) 以及炎癥因子的表達(dá)，對(duì)大鼠急性胰腺炎起到保護(hù)作用[2]。本研究擬探討Dex對(duì)蛛網(wǎng)膜下腔出血(subarachnoid hemorrhage，SAH)后的保護(hù)作用及對(duì)海馬神經(jīng)元的炎癥反應(yīng)的影響。

1 材料與方法

1.1 試劑、儀器及分組

1.1.1試劑 鹽酸右美托咪定(中國(guó)江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司，180130BP)，兔抗鼠NLRP3(美國(guó)NOVUS公司，MAB7578-SP)，兔抗鼠IL-1β(ab205924)、兔抗鼠IL-18(ab191860)(均購(gòu)自美國(guó)Abcam公司)。

1.1.2儀器 電泳儀電源(DYY-6C,中國(guó)北京市六一儀器廠)，發(fā)光儀成像系統(tǒng)(ChemiDoc MP ,美國(guó)Bio-Rad公司)。

1.1.3分組 ♂ SD大鼠45只，體質(zhì)量(280～320) g，由中國(guó)醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。隨機(jī)分3組：假手術(shù)+生理鹽水(Sham+saline)組、蛛網(wǎng)膜下腔出血+右美托咪定(SAH+Dex)組和蛛網(wǎng)膜下腔出血+生理鹽水(SAH+saline)組。行神經(jīng)功能、SAH評(píng)分、腦水含量及Western blot檢測(cè)。

1.2 SAH大鼠模型建立采用枕大池二次注血法[3]制作SAH大鼠模型。

1.3 評(píng)價(jià)指標(biāo)采用 Garcia神經(jīng)功能評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)評(píng)估大鼠神經(jīng)功能[4]； 黃巍[5]SAH評(píng)分方法對(duì)大鼠進(jìn)行SAH評(píng)分；腦組織含水量/%=(濕重-干重)/濕重×100%[6]；Western blot檢測(cè)大鼠海馬組織中NLRP3、IL-1β、IL-18蛋白的表達(dá)[5]。

2 結(jié)果

2.1 神經(jīng)功能和SAH評(píng)分比較神經(jīng)功能評(píng)分：SAH+Dex、Sham+saline與SAH+saline組比較行為學(xué)明顯改變，推測(cè)腹腔注射25 μg·kg-1的Dex后改善大鼠的神經(jīng)功能，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);SAH評(píng)分：SAH+Dex組與SAH+saline組比較沒(méi)有差異，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)Tab 1。

Tab 1 Comparison of Neurological score and SAH score in the 3

*P<0.05vsSham+saline group;#P<0.05vsSAH+Dex group

2.2 大鼠腦組織含水量比較Sham+saline、SAH+Dex和SAH+saline組腦組織含水量分別為(47.29±2.39)%、(48.28±3.96)%、(82.55±1.99)%?？梢钥闯鯠ex能明顯減少大鼠蛛網(wǎng)膜下腔出血后腦水含量，緩解腦水腫。

2.3 大鼠海馬神經(jīng)元中NLRP3、IL-1β和IL-18蛋白表達(dá)水平比較SAH+Dex組與SAH+saline組比較，炎性細(xì)胞因子明顯減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)Tab 2。

Tab 2 Comparison of NLRP3, IL-1β and IL-18 aftersubarachnoid hemorrhage in the 3

*P<0.05vsSham+saline group;#P<0.05vsSAH+Dex group

3 討論

Dex主要作用于藍(lán)斑核 α2受體，產(chǎn)生鎮(zhèn)靜作用，成為臨床中常用的藥物。基礎(chǔ)研究中Dex通過(guò)減輕炎癥反應(yīng)減輕腦損傷[7]。肝再生中，腹腔注射25 μg·kg-1的Dex可有效抑制TLR4/NF-κB信號(hào)通路中NLRP3炎性小體的活化,從而進(jìn)一步減少炎性細(xì)胞因子IL-1β和IL-18[8-9]，雖然這個(gè)劑量高于人的用量(1 μg·kg-1)，但對(duì)大鼠起到良好的鎮(zhèn)靜效果。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)腹腔注射Dex(25 μg·kg-1)可以有效減少炎性因子的表達(dá)，并能改善大鼠神經(jīng)功能以及緩解腦水腫。

SAH后的患者在早期腦損傷期間干預(yù)治療成為一個(gè)主要目標(biāo)，早期治療能有效降低患者的死亡率和對(duì)海馬神經(jīng)元的損害[10]。大多數(shù)學(xué)者關(guān)注的是自噬、細(xì)胞凋亡等，并無(wú)NLRP3的相關(guān)報(bào)道，而我們的實(shí)驗(yàn)正好彌補(bǔ)了空缺。但是我們只是驗(yàn)證了炎性體對(duì)海馬神經(jīng)元的損傷，并未進(jìn)一步研究細(xì)胞凋亡及對(duì)以后認(rèn)知功能的影響。

Dex可以改善SAH早期腦損傷對(duì)海馬神經(jīng)元的損害，降低腦水腫，并能降低海馬神經(jīng)元中炎性體的表達(dá)。本實(shí)驗(yàn)為Dex的抗炎作用提供了依據(jù)，為以后臨床研究提供良好的理論基礎(chǔ)，為臨床應(yīng)用提供了一定的經(jīng)驗(yàn)。