唐古特大黃不同提取物抗痛風(fēng)作用比較研究

王紅娟 呂小旭 王芳 鄒家棟 張旭東

摘要：目的：對(duì)比唐古特大黃的不同提取物抗痛風(fēng)作用。方法：選取體重相近的Wistar大鼠并分組，通過(guò)次黃嘌呤及氧嗪酸鉀建立痛風(fēng)性腎病模型，給予唐古特大黃水、甲醇和酸水解高（5g·kg^-1）低劑量（1.25g·kg^-1）的提取物，實(shí)驗(yàn)中另設(shè)空白組、陰性對(duì)照組和陽(yáng)性對(duì)照組。測(cè)定大鼠腎臟指數(shù)及大鼠血液中尿酸值來(lái)考察抗痛風(fēng)作用。結(jié)果：唐古特大黃不同提取物抗痛風(fēng)作用存在顯著性差異，以酸水解提取物效果最好，其次為甲醇提取物和水提取物。結(jié)論：唐古特大黃的酸水解提取物有較強(qiáng)的抗痛風(fēng)作用，其中酸水解提取物含有游離的蒽醌類成分最多，其作用機(jī)制需進(jìn)一步研究，此為唐古特大黃的開(kāi)發(fā)利用提供了依據(jù)。

關(guān)鍵詞：唐古特大黃;痛風(fēng);腎臟指數(shù);尿酸

中圖分類號(hào)：R589.7 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

近年痛風(fēng)患者越來(lái)越多，而痛風(fēng)與血液中尿酸含量過(guò)高有關(guān)。唐古特大黃具有解熱抗炎解毒，抗痛風(fēng)，活血涼血，瀉下攻積，清熱瀉火，止血，活血化瘀之功效。現(xiàn)代藥理作用表明，唐古特大黃具有抗炎、瀉下、抗腫瘤和抑制肺纖維化等方面作用，同時(shí)也有將唐古特大黃作為臨床治療痛風(fēng)性腎病常用藥物的研究。本文所研究的唐古特大黃為蓼科植物唐古特大黃（Rheklm tanguticum Maxim.ex Bam）的干燥根及根莖，主產(chǎn)于青海、甘肅、西藏等地，主要以野生品種為主。對(duì)現(xiàn)有唐古特大黃藥理作用的研究基礎(chǔ)上，對(duì)唐古特大黃水提取物、甲醇提取物和酸水解提取物治療痛風(fēng)作用進(jìn)行了比較研究。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

wistar大鼠，雌雄各半，體重180-220g，均由中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心，生產(chǎn)許可證號(hào)：（甘）20150001。喂養(yǎng)于本學(xué)院機(jī)能實(shí)驗(yàn)室動(dòng)物房，給予正常大鼠飼料飼喂，自由飲水，適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

1.1.2藥物及試劑

唐古特唐古特大黃為野生品種，采自六盤山地區(qū)，經(jīng)本院程亞青教授鑒定為蓼科植物唐古特大黃（Rheum tanguticum Maxim.ex Balf.的干燥根及根莖。氧嗪酸鉀（武漢遠(yuǎn)成共創(chuàng)科技有限公司，批號(hào)：00164）;次黃嘌呤（武漢遠(yuǎn)成共創(chuàng)科技有限公司，批號(hào)：00164）;苯溴馬?。ǖ聡?guó)赫曼大藥廠，批號(hào)：1681550）;尿酸測(cè)定試劑盒（上海復(fù)星長(zhǎng)征醫(yī)學(xué)科學(xué)有限公司，批號(hào)：D18010231）;甲醇（天津市大茂化學(xué)試劑廠，分析純，批號(hào)：20170824）;乙醚（天津市大茂化學(xué)試劑廠，分析純，批號(hào)：20180325）;水為蒸餾水。

1.1.3實(shí)驗(yàn)儀器

cs系列全自動(dòng)生化分析儀（長(zhǎng)春迪瑞醫(yī)療科技股份有限公司）;Bs224s電子天平（北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司）;12號(hào)大鼠直形灌胃針（浙江省寧?？h電子醫(yī)藥儀器廠，批號(hào)：GJ8301-A）;5mL一次性使用人體靜脈血樣采集容器（瀏陽(yáng)市三力醫(yī)用科技發(fā)展有限公司，批號(hào)：GA5011）;H-1650R臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)（長(zhǎng)沙湘儀離心機(jī)儀器有限公司）;TDL-40B臺(tái)式離心機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器廠制造）。

1.2方法

1.2.1藥物組處理方法

唐古特大黃蒸餾水煎煮兩次，合并煎煮液，濃縮成1g·mL^-1的溶液，為水提取組;唐古特大黃甲醇加熱回流提取兩次，合并提取液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)為流浸膏，加蒸餾水成1g·mL^-1的混懸液，為甲醇提取組;唐古特大黃8%鹽酸酸水解后，再用乙醚加熱回流提取，合并濾液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)干乙醚后，加蒸餾水成1g·mL^-1的混懸液，為酸水解提取組。

1.2.2高尿酸血癥動(dòng)物模型的建立

90只Wistar大鼠，雌雄各半，適應(yīng)性喂養(yǎng)一周，分為9組，空白組、陰性對(duì)照組生理鹽水，陽(yáng)性對(duì)照組苯溴馬?。?.01g·kg^-1），藥物組6組，為唐古特大黃水提取、甲醇提取和酸水解提取高（5g·kg^-1）低劑量（1.25g·kg^-1）組。每組10只，除空白組外每組大鼠灌胃次黃嘌呤（1g·kg^-1），同時(shí)皮下注射氧嗪酸鉀（250mg·kg^-1）建立大鼠急性高尿酸血癥模型。造模1h后，稱重并按不同劑量灌胃，陰性對(duì)照組給予相同體積的生理鹽水，陽(yáng)性對(duì)照組給予相應(yīng)劑量的苯溴馬隆，給藥2h后，斷頭采血，測(cè)定血尿酸含量。

1.2.3大鼠尿酸型腎病模型的建立

90只Wistar大鼠，雌雄各半，適應(yīng)性喂養(yǎng)一周，分為9組，空白組、陰性對(duì)照組生理鹽水，陽(yáng)性對(duì)照組苯溴馬?。?.01g·kg^-1），藥物組6組。大鼠灌胃氧嗪酸鉀（400mg·kg^-1）2mL構(gòu)建大鼠尿酸型腎病模型，空白對(duì)照組灌胃等體積生理鹽水。藥物組同1.2.2項(xiàng)下方法給藥，早中晚各給藥1次，連續(xù)給藥5周。最后一次給藥結(jié)束3h后腹腔注射10%水合氯醛（0.03mL·kg^-1）麻醉大鼠，摘除腎臟，仔細(xì)剔除無(wú)關(guān)組織，質(zhì)量稱重，計(jì)算腎臟指數(shù)，統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果。臟器指數(shù)=臟器（g）/體重（g）·100%。

1.2.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

使用SPSS19.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，數(shù)據(jù)結(jié)果以均值±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，多組數(shù)間比較采用方差分析，兩組數(shù)間采用F檢驗(yàn)，以P<0.05說(shuō)明差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。P<0.01說(shuō)明差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1唐古特大黃不同提取物對(duì)大鼠尿酸值的影響

通過(guò)對(duì)尿酸值的分析，唐古特大黃的不同提取物均可明顯降低尿酸值，與陰性對(duì)照組相比有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05，P<0.01）。其中酸水解提取物組降低尿酸值最明顯，其次為甲醇提取組和水提取組，且各組之間有差異（P<0.05）。高、低劑量之間只有甲醇提取組有差異（P<0.05）。結(jié)果見(jiàn)表1所列。

2.2唐古特大黃不同提取物對(duì)大鼠腎臟指數(shù)的影響

通過(guò)SPSS分析，唐古特大黃的不同提取物對(duì)尿酸型腎病大鼠均有影響，其結(jié)果與陰性對(duì)照組相比有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05，P<0.01）。其中酸水解提取物組對(duì)腎臟的保護(hù)作用最明顯，其次為甲醇提取組和水提取組（除甲醇提取物低劑量組），且各組之間有差異（P<0.05）。這與唐古特大黃對(duì)不同提取物對(duì)大鼠尿酸值影響的結(jié)果相符。但各高、低劑量之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義差異（P<0.05）。結(jié)果見(jiàn)表2所列。

3討論

綜合以上分析結(jié)果，唐古特大黃不僅具有降低大鼠血尿酸，同時(shí)還能保護(hù)大鼠腎臟的作用，這與文獻(xiàn)報(bào)道相符。對(duì)不同提取物治療效果比較研究發(fā)現(xiàn)，其中酸水解提取物治療效果最好。唐古特大黃的化學(xué)成分的分析中，水提取物中主要是水溶性成分，如糖類等;甲醇提取物，主要含有結(jié)合型蒽醌，如蒽醌苷類;酸水解提取物主要含有游離型蒽醌類，如唐古特大黃素、唐古特大黃酸、唐古特大黃酚、唐古特大黃素甲醚、蘆薈唐古特大黃素等。王雪等研究發(fā)現(xiàn)唐古特大黃酸對(duì)馬兜鈴酸A引起的斑馬魚(yú)幼魚(yú)腎損傷有一定的保護(hù)作用。還有研究表明，唐古特大黃總蒽醌對(duì)結(jié)腸和腎臟水通道蛋白表達(dá)具有重要影響，可用于治療消化和泌尿系統(tǒng)相關(guān)疾病。本研究發(fā)現(xiàn)唐古特大黃中游離蒽醌類成分治療痛風(fēng)作用顯著，其作用機(jī)理還需進(jìn)一步研究。