基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)探討山海丹顆粒治療勃起功能障礙的潛在作用機(jī)制

錢 程，成 鵬，鄭維維，余蘇云，吳佳偉，鄭孟凱，陳文星，陸 茵,2，王愛(ài)云,2

(南京中醫(yī)藥大學(xué) 1.藥學(xué)院、江蘇省中藥藥效與安全性評(píng)價(jià)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，2.中藥品質(zhì)與效能國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室(培育)，江蘇 南京 210023； 3.杭州施強(qiáng)藥業(yè)有限公司，浙江 杭州 310000)

中藥復(fù)方山海丹顆粒主要功效為活血化瘀、宣痹通絡(luò)、益氣養(yǎng)血，其組成有丹參、決明子、葛根、山羊血、麥冬、靈芝、人參、佛手、黃芪、紅花、香附、蒲黃、海藻、何首烏、川芎、三七16味中藥。4味活血化瘀藥丹參、紅花、三七、山羊血相須配伍，入心散血中之滯，入肝理血之壅。4味補(bǔ)氣藥人參、黃芪、何首烏、靈芝同用，益氣養(yǎng)血，補(bǔ)氣以促血行。川芎活血行氣、香附行氣解郁、佛手疏肝理氣，這3味藥可加強(qiáng)行氣活血作用。蒲黃化瘀、海藻散結(jié)，麥冬清心、葛根生津、決明子清熱，可以輔助活血發(fā)揮益氣養(yǎng)血功效，并滋陰復(fù)脈。山海丹顆粒主要發(fā)揮活血功效，并輔以補(bǔ)氣，臨床用以治療胸痹、心梗等疾病。中醫(yī)認(rèn)為勃起功能障礙(erectile dysfunction，ED)是經(jīng)由臟腑、經(jīng)絡(luò)、氣血津液相互協(xié)調(diào)作用的結(jié)果。有學(xué)者認(rèn)為勃起功能障礙因于肝者居多，應(yīng)從肝治[1]。肝藏血，主疏泄，主宗筋，肝血在肝氣疏導(dǎo)下對(duì)陰莖的快速充盈是陰莖勃起的物質(zhì)基礎(chǔ)[2]。而山海丹顆?？梢哉{(diào)達(dá)肝氣，散肝血之壅，具有中醫(yī)理論上治療ED的潛在可能。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為，ED本質(zhì)是一系列神經(jīng)血管活動(dòng)，陰莖勃起需要副交感神經(jīng)興奮，動(dòng)脈擴(kuò)張，動(dòng)脈血流增加，海綿體充血膨脹[3]。動(dòng)脈粥樣硬化、高脂血癥等血管性疾病常會(huì)引起ED發(fā)生，對(duì)血管具有調(diào)節(jié)作用的山海丹顆粒存在治療ED的作用基礎(chǔ)。

網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)是新興藥理研究方法，綜合計(jì)算生物學(xué)、系統(tǒng)生物學(xué)和網(wǎng)絡(luò)分析等多學(xué)科技術(shù)，旨在探究藥物與疾病的關(guān)聯(lián)性，具有系統(tǒng)性及整體性的特點(diǎn)[4]。單靶點(diǎn)機(jī)制通路的研究方法難以解釋中藥多成分、多靶點(diǎn)的協(xié)同作用，中藥配伍運(yùn)用注重整體協(xié)調(diào)性，而這與網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)特點(diǎn)十分契合。目前，許多關(guān)于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的研究成功應(yīng)用于中藥的機(jī)制探究，揭開了中藥發(fā)揮藥效的途徑，闡釋了中藥的科學(xué)內(nèi)涵[5]。

據(jù)此，本研究基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)探討山海丹顆粒治療ED的潛在作用機(jī)制，為山海丹顆粒擴(kuò)大適應(yīng)癥提供依據(jù)和新思路。

1 材料與方法

1.1 山海丹顆粒成分庫(kù)的構(gòu)建及活性成分篩選山海丹顆粒包含丹參、決明子、葛根、山羊血、麥冬、靈芝、人參、佛手、黃芪、紅花、香附、蒲黃、海藻、何首烏、川芎、三七16味中藥，通過(guò)查詢上海有機(jī)所中藥天然產(chǎn)物數(shù)據(jù)庫(kù)、 中藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)和分析平臺(tái)(traditional chinese medicine systems pharmacology，TCMSP)、中藥信息庫(kù)(traditional chinese medicine information database，TCMID)，查找復(fù)方中已被鑒定的中藥化學(xué)成分，將這些成分搜集并整合，構(gòu)建中藥復(fù)方成分?jǐn)?shù)據(jù)庫(kù)?？诜兴幰l(fā)揮藥效，必須克服機(jī)體藥代動(dòng)力學(xué)屏障，經(jīng)過(guò)吸收、分布、代謝、排泄等過(guò)程。一些成分由于半衰期短、脂溶性差、細(xì)胞滲透性差等原因，最終無(wú)法成為發(fā)揮藥效的活性成分。中藥復(fù)方組成復(fù)雜、成分眾多，很多藥效發(fā)揮依賴于微量成分協(xié)同作用，而傳統(tǒng)檢測(cè)手段很難將發(fā)揮作用的成分完全檢測(cè)出來(lái)。利用TCMSP數(shù)據(jù)庫(kù)ADME預(yù)測(cè)功能篩選復(fù)方成分中的活性成分口服生物利用度(oral bioavailability,OB)、類藥性(drug-like,DL)是中藥成分在ADME中的關(guān)鍵參數(shù)，可以作為篩選中藥發(fā)揮藥效活性成分的條件。在TCMSP數(shù)據(jù)庫(kù)中，設(shè)定篩選參數(shù)：OB≥30%，DL≥0.18。

1.2 山海丹顆粒潛在靶標(biāo)預(yù)測(cè)及成分靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)圖的構(gòu)建通過(guò)整合分子靶標(biāo)預(yù)測(cè)模型數(shù)據(jù)庫(kù)：Similarity Ensemble Approach (SEA)，STITCH和Benchmark Database通過(guò)模擬及比對(duì)計(jì)算，預(yù)測(cè)山海丹顆?；钚猿煞謱?duì)應(yīng)的所有分子靶標(biāo)集。在總集中，運(yùn)用化學(xué)基因組學(xué)整合手段，基于支持向量機(jī)和隨機(jī)森林算法計(jì)算出總靶點(diǎn)集中所有靶點(diǎn)與成分相互作用的強(qiáng)度。最終選取總集中支持向量機(jī)和隨機(jī)森林?jǐn)?shù)值分別大于0.8和0.7的靶點(diǎn)作為潛在藥效靶標(biāo)子集。通過(guò)Uniprot數(shù)據(jù)庫(kù)，對(duì)潛在藥效靶標(biāo)進(jìn)行分析和注釋，查找靶蛋白的基因名、Uniprot ID，保留人源靶點(diǎn)，并刪除重復(fù)項(xiàng)。使用Cytpscape3.2.1軟件繪制山海丹顆粒所含主要中藥-靶點(diǎn)圖。

1.3 勃起功能障礙疾病靶點(diǎn)庫(kù)的構(gòu)建通過(guò)Therapeutic Target Database(TTD)數(shù)據(jù)庫(kù)、PharmGkb數(shù)據(jù)庫(kù)輸入疾病名稱“Erectile dysfunction”，得到疾病ED相關(guān)靶點(diǎn)名稱。利用Disease Gene Search Engine with Evidence Sentences(DiGSeE)數(shù)據(jù)庫(kù)，輸入疾病名稱“Erectile dysfunction”，選擇“Gene expression”，文本挖掘ED相關(guān)靶點(diǎn)名稱。將得到的靶點(diǎn)整合，基因名轉(zhuǎn)化并保留人源靶點(diǎn)，刪除重復(fù)項(xiàng)。

1.4 PPI網(wǎng)絡(luò)拓?fù)浞治龊秃诵陌悬c(diǎn)篩選利用Cytpscape 3.2.1軟件將山海丹顆粒潛在靶點(diǎn)和ED相關(guān)靶點(diǎn)進(jìn)行PPI網(wǎng)絡(luò)拓?fù)浞治觯謩e得到兩個(gè)拓?fù)渚W(wǎng)絡(luò)。利用Cytpscape 3.2.1軟件的插件CytoNCA將兩個(gè)拓?fù)渚W(wǎng)絡(luò)進(jìn)行Merge，生成兩個(gè)拓?fù)渚W(wǎng)絡(luò)的交集網(wǎng)絡(luò)，得出中藥山海丹顆?？勺饔糜贓D的靶點(diǎn)，以及Degree值等數(shù)據(jù)。通過(guò)交集網(wǎng)絡(luò)的拓?fù)鋽?shù)據(jù)分析出Degree值為33，定義大于2倍Degree值為Big Hubs，依據(jù)較高Degree值篩選得到核心網(wǎng)絡(luò)靶點(diǎn)。將關(guān)鍵靶點(diǎn)導(dǎo)入DisGeNET數(shù)據(jù)庫(kù)，獲取基因?qū)?yīng)蛋白及蛋白分類。

1.5 核心靶點(diǎn)的功能注釋分析DAVID數(shù)據(jù)庫(kù)支持基因和靶蛋白列表分析的網(wǎng)絡(luò)數(shù)據(jù)庫(kù)。使用DAVID數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)PPI核心靶點(diǎn)進(jìn)行GO注釋和KEGG富集分析，尋找出山海丹顆粒中有效成分可能參與調(diào)控的基因網(wǎng)絡(luò)中的潛在靶點(diǎn)、信號(hào)通路及相關(guān)生物學(xué)過(guò)程、細(xì)胞組分和分子功能。用OmicShare工具對(duì)KEGG富集通路繪制氣泡圖。使用Cytocape 3.2.1軟件中的ClueGO插件進(jìn)行富集分析，構(gòu)建靶蛋白參與的信號(hào)通路可視化結(jié)果。

1.6 蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建與分析GeneMANIA數(shù)據(jù)庫(kù)包含大量蛋白相互作用關(guān)系，將山海丹顆粒治療ED的核心靶點(diǎn)導(dǎo)入該數(shù)據(jù)庫(kù)，選擇Homo sapiens，進(jìn)行蛋白相互作用分析。

2 結(jié)果

2.1 山海丹顆粒成分庫(kù)的構(gòu)建及活性成分篩選通過(guò)上海有機(jī)所中藥天然產(chǎn)物數(shù)據(jù)庫(kù)、TCMSP數(shù)據(jù)庫(kù)和TCMID數(shù)據(jù)庫(kù)查找中藥成分，復(fù)方中已被鑒定的中藥化學(xué)成分為丹參、三七、紅花、人參、黃芪、何首烏、靈芝、決明子、葛根、佛手、香附、蒲黃、海藻、川芎、麥冬。最終構(gòu)建的中藥復(fù)方成分庫(kù)包含1 571個(gè)成分，其中丹參202個(gè)成分，三七119個(gè)成分，紅花189個(gè)成分，人參190個(gè)成分，黃芪87個(gè)成分，何首烏19個(gè)成分，靈芝242個(gè)成分，決明子68個(gè)成分，葛根18個(gè)成分，佛手81個(gè)成分，香附104個(gè)成分，蒲黃33個(gè)成分，海藻20個(gè)成分，川芎189個(gè)成分，麥冬10個(gè)成分。基于TCMSP數(shù)據(jù)庫(kù)OB、DL篩選指標(biāo)共選出了268個(gè)潛在活性成分，刪除重復(fù)項(xiàng)為226個(gè)活性成分。其中丹參64個(gè)成分，三七8個(gè)成分，紅花22個(gè)成分，人參22個(gè)成分，黃芪20個(gè)成分，何首烏11個(gè)成分，靈芝61個(gè)成分，決明子14個(gè)成分，葛根4個(gè)成分，佛手5個(gè)成分，香附18個(gè)成分，蒲黃8個(gè)成分，海藻4個(gè)成分，川芎7個(gè)成分，麥冬0個(gè)成分。

2.2 山海丹顆粒潛在靶標(biāo)預(yù)測(cè)及成分靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)圖的構(gòu)建通過(guò)SEA、STITCH、Benchmark Database和Uniprot數(shù)據(jù)庫(kù)預(yù)測(cè)，得到中藥活性成分的潛在作用靶點(diǎn)。刪除重復(fù)項(xiàng)，共有186個(gè)潛在作用靶點(diǎn)，其中丹參活性成分潛在作用靶點(diǎn)76個(gè)，三七活性成分潛在作用靶點(diǎn)117個(gè)，紅花活性成分潛在作用靶點(diǎn)121個(gè)，人參活性成分潛在作用靶點(diǎn)94個(gè)，黃芪活性成分潛在作用靶點(diǎn)140個(gè)，何首烏活性成分潛在作用靶點(diǎn)52個(gè)，靈芝活性成分潛在作用靶點(diǎn)53個(gè)，決明子活性成分潛在作用靶點(diǎn)59個(gè)，葛根活性成分潛在作用靶點(diǎn)60個(gè)，佛手活性成分潛在作用靶點(diǎn)12個(gè)，香附活性成分潛在作用靶點(diǎn)128個(gè)，蒲黃活性成分潛在作用靶點(diǎn)130個(gè)，海藻活性成分潛在作用靶點(diǎn)85個(gè)，川芎活性成分潛在作用靶點(diǎn)32個(gè)。利用Cytpscape 3.2.1軟件繪制山海丹顆粒中藥-靶點(diǎn)作用圖(Fig 1)。

Fig 1 Major Chinese medicine -target networkof Shanhaidan granules

2.3 勃起功能障礙疾病靶點(diǎn)庫(kù)的構(gòu)建通過(guò)TTD、PharmGkb和DiGSeE數(shù)據(jù)庫(kù)得到ED相關(guān)基因，得到82個(gè)疾病作用靶點(diǎn)。利用Cytpscape 3.2.1軟件繪ED-靶點(diǎn)作用圖(Fig 2)。

Fig 2 ED-target network

2.4 PPI網(wǎng)絡(luò)拓?fù)浞治龊秃诵陌悬c(diǎn)篩選通過(guò)PPI網(wǎng)絡(luò)拓?fù)浞治?，得到山海丹顆粒潛在靶點(diǎn)拓?fù)渚W(wǎng)絡(luò)，包含6 679個(gè)節(jié)點(diǎn)，148 186條邊；ED相關(guān)靶點(diǎn)拓?fù)渚W(wǎng)絡(luò)，包含2 550個(gè)節(jié)點(diǎn)，58 997條邊。使用CytoNCA分析后的交集網(wǎng)絡(luò)包含2 032個(gè)節(jié)點(diǎn)，52 284條邊(Fig 3)。取Degree值大于33的基因作為核心靶點(diǎn)，得到絲裂原活化蛋白激酶1(mitogen-activated protein kinase 1，MAPK1)、一氧化氮合酶2(nitric oxiden synthase 2，NOS2)、磷脂酰肌醇-3-激酶調(diào)節(jié)亞基2(phosphoinositide-3-kinase regulatory subunit 2，PIK3R2)等基因，查到基因?qū)?yīng)蛋白并進(jìn)行蛋白分類(Tab 1)。這些蛋白與ED疾病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，說(shuō)明山海丹顆?？赡芡ㄟ^(guò)這些蛋白發(fā)揮對(duì)ED的潛在治療作用。

Fig 3 Core target intersection PPI network

2.5 核心靶點(diǎn)的功能注釋分析山海丹顆粒GO分析顯示，山海丹顆粒預(yù)測(cè)的核心靶點(diǎn)在生物學(xué)過(guò)程中排名靠前的有缺血反應(yīng)、調(diào)控血管生成、調(diào)控凋亡過(guò)程、細(xì)胞增殖以及衰老等，表明山海丹顆?？赡芡ㄟ^(guò)調(diào)控這些生物學(xué)進(jìn)程從而影響疾病。細(xì)胞組分方面包括細(xì)胞-細(xì)胞粘附連接、細(xì)胞核核小體、肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架、膜筏、血液微粒等。分子功能主要涉及核苷酸結(jié)合、蛋白復(fù)合物結(jié)合、激酶活性、蛋白異二聚化活性、鈣粘蛋白結(jié)合參與細(xì)胞-細(xì)胞粘附等方面(Fig 4 )。

使用 DAVID 進(jìn)行山海丹顆粒靶點(diǎn)KEGG通路分析，選取P 值相對(duì)較小且靶點(diǎn)富集的20條通路，主要有環(huán)磷酸鳥苷/蛋白激酶G(cyclic guanosine monophosphate-protein kinases G， cGMP/PKG)信號(hào)通路、絲裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated pro-tein kinase， MAPK)信號(hào)通路、凋亡途徑、磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B(phosphoinositide-3-kinase/protein kinase B， PI3K/Akt)信號(hào)通路(Fig 5 )。

Tab 1 Major potential targets of core network

Fig 4 Biological function analysis of Shanhaidangranules in treating ED targets

使用Cytocape3.2.1軟件中的ClueGO插件進(jìn)行富集分析，構(gòu)建靶蛋白參與的信號(hào)通路可視化結(jié)果，發(fā)現(xiàn)山海丹顆粒發(fā)揮藥效主要與cGMP/PKG信號(hào)通路、PI3K/Akt信號(hào)通路和MAPK信號(hào)通路等相關(guān)(Fig 6)。

此分析結(jié)果也可與KEGG分析結(jié)果相互佐證，說(shuō)明山海丹顆粒治療ED的潛在作用機(jī)制與cGMP/PKG信號(hào)通路、MAPK信號(hào)通路、PI3K/Akt信號(hào)通路和凋亡途徑有關(guān)，為山海丹顆粒治療ED的實(shí)驗(yàn)研究提供相關(guān)通路檢測(cè)的依據(jù)。

Fig 5 KEGG pathway in treatment of EDtarget by Shanhaidan granules

Fig 6 Signal pathway enrichment anlysis of Shanhaidangranules in treatment of ED core targets

2.6 蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建與分析通過(guò)GeneMANIA構(gòu)建蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)并預(yù)測(cè)主要功能,發(fā)現(xiàn)有意義的功能主要包括：① 調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡信號(hào)通路；②正向調(diào)節(jié)MAPK級(jí)聯(lián)信號(hào)；③調(diào)節(jié)cGMP生物合成過(guò)程；④絲氨酸/蘇氨酸激酶活性；⑤ NO代謝過(guò)程。提示山海丹顆?？赡芡ㄟ^(guò)關(guān)鍵蛋白參與的相關(guān)信號(hào)通路發(fā)揮對(duì)ED的潛在治療作用(Fig 7)。

Fig 7 Key protein interaction network of Shanhaidangranules in treating ED and functional notes

3 討論

本研究基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)大數(shù)據(jù)信息分析的方法，深入探討了山海丹顆粒治療勃起功能障礙的潛在作用機(jī)制。通過(guò)數(shù)據(jù)庫(kù)找出山海丹顆粒的主要活性成分及治療ED的潛在作用靶點(diǎn)，如MAPK、NOS、腫瘤壞死因子(tumor necrosis factor，TNF)、叉頭形蛋白O(forkhead box protein O，F(xiàn)OXO)等。通過(guò)多個(gè)數(shù)據(jù)庫(kù)查找山海丹顆粒治療ED的通路并相互佐證，總結(jié)出4條潛在治療的機(jī)制通路，即為：cGMP/PKG信號(hào)通路、MAPK信號(hào)通路、PI3K/Akt信號(hào)通路、凋亡途徑。

山海丹顆粒治療ED的核心靶點(diǎn)185個(gè)，主要有TNF、FOXO、NOS、MAPK等。TNF-α對(duì)血管具有直接作用，在ED患者中高水平表達(dá)，可激活MAPK、PI3K/Akt等信號(hào)通路，這也可能是TNF-α對(duì)ED的調(diào)節(jié)機(jī)制[6]。FOXO在衰老過(guò)程中發(fā)揮對(duì)神經(jīng)的保護(hù)作用，衰老是ED發(fā)生的重要因素，會(huì)引起nNOS表達(dá)下降以及內(nèi)皮細(xì)胞過(guò)度凋亡，引發(fā)ED[7]。NO由eNOS、iNOS、nNOS三種不同類型一氧化氮合酶產(chǎn)生， NO誘導(dǎo)cGMP活化與積累，影響平滑肌松弛和陰莖勃起。血管和海綿體竇腔內(nèi)皮細(xì)胞中的eNOS是NO的重要來(lái)源，內(nèi)皮細(xì)胞過(guò)度凋亡會(huì)減少NO的合成和釋放，從而影響陰莖勃起。

cGMP/PKG途徑可以調(diào)節(jié)NO的血管舒張作用，副交感神經(jīng)興奮會(huì)刺激神經(jīng)元釋放NO，NO則激活鳥苷酸環(huán)化酶促進(jìn)cGMP合成，陰莖組織中的cGMP介導(dǎo)陰莖勃起，cGMP被磷酸二酯酶過(guò)度降解則會(huì)導(dǎo)致勃起障礙[8]。cGMP通路也是目前關(guān)于ED研究較多的機(jī)制通路。

cGMP除了受NO影響，也受到MAPK通路的調(diào)節(jié)，從而導(dǎo)致ED的發(fā)生。MAPK信號(hào)通路在細(xì)胞分化、增殖及凋亡過(guò)程中發(fā)揮重要作用，這與ED的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。RhoA/Rock通路的激活會(huì)導(dǎo)致陰莖松弛，并且是MAPK通路上游的調(diào)節(jié)因子[9]。MAPK信號(hào)通路中主要包括細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases，ERK)和p38MAPK。ED患者ERK活化水平顯著高于非ED患者，ERK能夠調(diào)控eNOS，抑制ERK信號(hào)通路可以降低精氨酸酶活性，改善海綿體的舒張功能[10]。p38可增強(qiáng)精氨酸酶活性，引起內(nèi)皮細(xì)胞功能異常。p38與血管炎癥、內(nèi)皮細(xì)胞凋亡、內(nèi)皮細(xì)胞功能障礙有關(guān)，p38MAPK通路的激活是提高精氨酸酶活性在內(nèi)皮細(xì)胞中表達(dá)的關(guān)鍵[11]。

內(nèi)皮細(xì)胞過(guò)度凋亡會(huì)引起NOS活性降低導(dǎo)致NO合成受阻，從而抑制陰莖勃起。衰老、糖尿病、高脂血癥等疾病都會(huì)導(dǎo)致內(nèi)皮細(xì)胞凋亡，eNOS水平降低，抑制了Bcl-2與Bax的比值[7]。5型磷酸二酯酶抑制劑(phosphodiesterase type 5 inhibitors，PDE5-I)作為治療ED一線藥物，其機(jī)制就是抑制PDE5，減少cGMP的降解，導(dǎo)致平滑肌松弛，抑制超氧化物生成，減少細(xì)胞凋亡從而提高NO含量。陰莖海綿體平滑肌細(xì)胞過(guò)度凋亡會(huì)使平滑肌數(shù)量降低，導(dǎo)致靜脈性ED發(fā)生。有研究對(duì)非動(dòng)脈性重度ED患者的組織學(xué)進(jìn)行檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)陰莖海綿體平滑肌占陰莖海綿體結(jié)構(gòu)的比例較正常，對(duì)照組顯著降低，這是靜脈性ED發(fā)生的重要原因[12]。

PI3K/Akt信號(hào)傳導(dǎo)途徑對(duì)細(xì)胞影響廣泛，包括細(xì)胞分化、增殖、凋亡等。活化的Akt可以通過(guò)磷酸化直接激活eNOS，促進(jìn)NO的合成。eNOS依賴于Akt磷酸化介導(dǎo)陰莖勃起，A2B腺苷受體通過(guò)PI3K/Akt信號(hào)激活的eNOS促進(jìn)陰莖勃起[13]。陰莖海綿體平滑肌細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞的血小板衍生生長(zhǎng)因子在缺氧環(huán)境下分泌增多，通過(guò)PI3K/Akt信號(hào)傳導(dǎo)增加連接蛋白的表達(dá)，并導(dǎo)致了ED，靶向該途徑可成為治療ED的有效策略[14]。

山海丹顆粒臨床常應(yīng)用于治療冠心病、心絞痛，且療效較好。使用山海丹顆粒治療ED的實(shí)驗(yàn)及臨床報(bào)道較少，尚未廣泛應(yīng)用。有學(xué)者臨床使用山海丹顆粒聯(lián)合復(fù)方玄駒膠囊治療高脂血癥伴隨勃起功能障礙，結(jié)果發(fā)現(xiàn)可降低血脂水平并提高勃起功能，效果顯著[15]。該報(bào)道也一定程度上證實(shí)了山海丹顆粒治療ED的可行性。ED發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，單一靶點(diǎn)的抑制劑藥物臨床有效率有限，而山海丹顆?？砂邢蚨鄺l通路及多個(gè)靶點(diǎn)，發(fā)揮中藥復(fù)方治療優(yōu)勢(shì)。利用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)探究山海丹顆粒治療ED的潛在作用機(jī)制，能夠?yàn)樯胶５ゎw粒擴(kuò)大適應(yīng)癥和臨床治療ED提供思路和依據(jù)，其具體作用機(jī)制仍然需要進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證以及臨床檢驗(yàn)。