應(yīng)用酶免疫技術(shù)高效進(jìn)行食品安全檢測

梁慧君 唐桂紅 姜麗君 林濱鈺

一、酶免疫技術(shù)在食品檢測中的應(yīng)用

酶聯(lián)免疫分析法和膠體金免疫層析試紙法都屬于免疫分析方法，在國外已被用于食品安全檢測，我國也已在臨床檢驗中應(yīng)用多年。酶聯(lián)免疫分析法是將酶催化反應(yīng)放大，抗原抗體特異性相結(jié)合，以酶標(biāo)記的抗原或抗體作為主要試劑進(jìn)行免疫測試。酶免疫測定技術(shù)具有費(fèi)用低廉、儀器簡單易攜、檢測速度快、靈敏度高、選擇性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，對現(xiàn)場檢驗特別適用。膠體金免疫層析試紙法也叫免疫金標(biāo)記技術(shù)（Immunogold labelling technique），當(dāng)這些標(biāo)記物在相應(yīng)的配體處大量聚集時，肉眼可見紅色或粉紅色斑點(diǎn)，可用于定性或半定量的快速免疫檢測。膠體金技術(shù)具有特異敏感、穩(wěn)定性強(qiáng)、方便快捷、不需要特殊設(shè)備和試劑、結(jié)果判斷直觀等優(yōu)點(diǎn)，特別適合于大面積普查和廣大基層檢驗人員以及大批量檢測等，具有廣闊的應(yīng)用前景和巨大的發(fā)展?jié)摿Α?/p>

二、酶免疫技術(shù)的發(fā)展

酶免疫技術(shù)雖然對試劑的選擇性高，對結(jié)構(gòu)類似的化合物有一定程度的交叉反應(yīng)，不能同時分析多種成分；但還是具有特異性強(qiáng)，靈敏度高，自動化程度高，操作簡便、快速，試劑保存時間較長，無放射性同位素污染等優(yōu)勢。商品試劑盒和自動或半自動檢測儀器的問世，使酶免疫測定在檢測中的應(yīng)用操作方便，節(jié)省時間。

優(yōu)質(zhì)的試劑盒不僅能提供包被固相載體、酶結(jié)合底物和洗滌液等，而且所有試劑的應(yīng)用液均已配制好并可直接使用，各種試劑中加入色素，使其呈現(xiàn)不同的顏色而加以區(qū)分，避免混淆。ELISA操作步驟多，所需試劑也多，這種有色試劑既能減少操作失誤，又方便使用。檢測結(jié)果是以顏色的深淺判讀檢測數(shù)值的高低，必然要使用相應(yīng)的酶標(biāo)儀，目前酶標(biāo)儀分為半自動和全自動兩大類，工作原理基本一致。除酶標(biāo)儀外，洗板機(jī)不僅可以代替手工作業(yè)，還有利于標(biāo)準(zhǔn)化操作，對中小型實(shí)驗室而言既實(shí)用又易于接受。在使用洗板機(jī)前，應(yīng)先檢定洗板機(jī)的性能，包括確認(rèn)各孔的洗滌效果是否徹底、是否具有良好的重復(fù)性，這也是洗板機(jī)不斷提高儀器質(zhì)量的關(guān)鍵指標(biāo)。

隨著性能越來越成熟，半自動和全自動的酶標(biāo)儀（也叫ELISA分析儀）在大中型臨床檢驗實(shí)驗室中已經(jīng)被廣泛使用。利用全自動ELISA分析儀是現(xiàn)在比較推崇的檢測手段之一，該法按照酶與底物可以產(chǎn)生顯色反應(yīng)、不同物質(zhì)的吸收譜線的特征各異的原理，嚴(yán)格遵守朗伯-比爾（Lambert-Beer）定律，定量和定性分析物質(zhì)。其適用范圍相當(dāng)廣泛：一種是用于細(xì)菌及毒素、真菌及毒素、病毒和寄生蟲的檢測，如沙門氏菌、單核細(xì)胞增生李斯特菌、鏈球菌、結(jié)核分枝桿菌、布氏桿菌、金黃色葡萄球菌腸毒素、黃曲霉毒素等，輪狀病毒、皰疹病毒、風(fēng)疹病毒、肝炎病毒等，寄生蟲如瘧原蟲、弓形蟲、阿米巴等；另一種是用于藥物殘留、抗生素、蛋白質(zhì)、激素以及其他生理活性物質(zhì)等的檢測。近年來有關(guān)使用酶免疫法測定乳品和血漿中有機(jī)化學(xué)殘留物已有相關(guān)報道，這表明本法在動物性食品衛(wèi)生監(jiān)測方面有新的應(yīng)用。

用于藥物殘留的免疫分析技術(shù)檢測分為兩大類：一是免疫測定法（Immuno Assays，IAs），分析方法相對獨(dú)立，如ELISA、RIA、固相免疫傳感器（Soindphase immunosensor）等；二是利用免疫分析的高選擇性作為理化測定技術(shù)中的凈化手段，將常規(guī)理化分析技術(shù)與免疫分析技術(shù)聯(lián)用，典型的方式為免疫親和色譜（Immuno Affinity Chromatogrphy，IAC）。比較常規(guī)的理化分析技術(shù)，以ELISA為例，免疫測定法取樣量小，前處理簡單，容量大，儀器化程度低，檢出限達(dá)到ng/g-pg/g級。

在抗生素的檢測領(lǐng)域，大部分抗生素已經(jīng)建立了免疫測定法，如鏈霉素、四環(huán)素、氯霉素、硫胺二甲基嘧啶、沙拉沙星、魔能霉素等，其他技術(shù)還可以和免疫分析方法聯(lián)用。在聯(lián)用方法中，如IAC/ HPLIAC/GC、HOIAC/HPLC，免疫分析技術(shù)的一部分可作為HPLC或GC等測定技術(shù)的樣品凈化或分離手段；如HPLC/IA、FIA/IA、TLC/IA、CZE/IA、SFC/IA等，免疫分析技術(shù)的另一部分也可作為其離線或在線檢測方法。這些方法結(jié)合了免疫分析的選擇性、靈敏度與HPLC、GC等技術(shù)的高速、高效分離和準(zhǔn)確檢測能力，降低了分析成本，簡化了分析過程，拓展了待測物范圍。

標(biāo)準(zhǔn)化、商品化的酶免疫試劑盒和全自動ELISA分析儀已經(jīng)相繼問世，給整個食品衛(wèi)生事業(yè)帶來好光景。不過，國外生產(chǎn)的各類抗生素試劑盒雖然穩(wěn)定性和特異性相對較高，但價格昂貴，若使用半自動或全自動ELISA分析儀，投入的資金更多。因此，非常有必要研制和開發(fā)出檢測質(zhì)量過硬的國產(chǎn)試劑盒，以降低企業(yè)成本，提高經(jīng)濟(jì)效益。