OXT通過miR-196b-3p/ASPP2信號通路調(diào)節(jié)卵巢癌細胞生長

吳莉敏，陳 茜，趙 艷，吳莉娜，馮曉珊，沈夢丹，馬文娟，孫艷萍

(西安交通大學第二附屬醫(yī)院a.婦產(chǎn)科； b.手術室，西安710004)

卵巢癌是一種常見的婦科惡性腫瘤，其發(fā)病率僅次于子宮頸癌與子宮體癌，但其死亡率在婦科腫瘤中位居首位且有逐年升高趨勢[1]。卵巢癌對女性健康形成嚴重威脅，關鍵原因之一在于早期卵巢癌無法通過有效的標記物進行鑒定和甄別。因此，篩選有效的卵巢癌生物標記物與治療靶點尤為重要。

催產(chǎn)素(oxytocin,OXT)是一種腦垂體后葉分泌的激素，能夠調(diào)控子宮收縮[2]。OXT可以通過激活催產(chǎn)素受體(oxytocin receptor,OXTR)調(diào)節(jié)前列腺癌[3]、乳腺癌、神經(jīng)胚細胞瘤等多種腫瘤細胞的增殖[4]。最新研究發(fā)現(xiàn)，OXT可以抑制卵巢癌細胞的體外增殖和遷移，并促進其凋亡和自噬[5]，但OXT在卵巢癌細胞中的作用機制尚不清楚。

微小RNA(miRNA)在哺乳動物中是一類長度為20～25nt的非編碼RNA，在多種腫瘤進程中發(fā)揮關鍵調(diào)節(jié)作用[6]。miRNA介導卵巢癌細胞增殖、凋亡、侵襲、遷移及血管生成，在多種腫瘤發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用[7]。據(jù)報道[8-9]，miR-196b是一種關鍵的促癌miRNA，其在卵巢上皮癌中表達上調(diào)并可以促進細胞的侵襲性。miR-196b-3p作為miR-196b前體的3’端降解物，在復發(fā)性卵巢上皮癌中表達顯著升高[9]。此外，miR-196b-3p可促進小鼠體內(nèi)和體外前列腺癌細胞增殖[10]，而前列腺癌細胞的遷移又受到OXT的調(diào)節(jié)[11]。另有研究[12]表明，miR-196b-3p在子宮肌層中被OXT獨立抑制。然而，在卵巢癌細胞中，miR-196b-3p是否參與OXT介導的抑癌作用尚不明確，有必要進行深入探討。

本研究旨在探討OXT是否通過激活OXTR介導了卵巢癌細胞的增殖與凋亡，并進一步明確OXT發(fā)揮作用的分子機制。結(jié)果表明，OXT是通過激活OXTR下調(diào)了miR-196b-3p水平，并進一步上調(diào)其靶基因p53凋亡刺激蛋白2(apoptosis-stimulating of p53 protein 2，ASPP2)的表達來抑制卵巢癌細胞的增殖和凋亡[13]。因此，miR-196b-3p/ASPP2信號通路可能是OXT調(diào)節(jié)卵巢癌細胞增殖和凋亡的關鍵途徑。

1 材料與方法

1.1 一般資料

人卵巢癌細胞系SKOV3和A2780細胞來源于美國模式培養(yǎng)物保藏所(ATCC)，均于2017年7月購買于美國Sigma公司。

1.2 材料

10%的胎牛血清(fetal bovine serum，F(xiàn)BS，10099-141)購自美國Gibco BRL公司；3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴鹽細胞代謝活性檢測(3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium，MTT)法細胞增殖活性檢測試劑盒(4890-025-K)購自美國Trevigen公司；Caspase 3活性檢測試劑盒(C1115)購自上海碧云天生物技術有限公司；OXTR活性酶聯(lián)免疫吸附試驗(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)檢測試劑盒(CSB-E13371h)購自上海希美生物科技有限公司；miR-196b-3p擬似物mimic(miR-mimic)與其陰性對照miR-mimic-NC及miR-196b-3p抑制劑inhibitor(miR-inhibitor)與其陰性對照miR-inhibitor-NC均購自上海吉瑪公司；TRIzol(15596026)及M-MLV逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(C28025-011)購自美國Invitrogen公司；miScript逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(218061)購自德國Qiagen公司；SYBR?Green Master Mix(HY-K0501)購自美國MedChemExpress公司；BCA蛋白分析試劑盒(P0012)與ECL發(fā)光液(P0018)購自上海碧云天生物技術有限公司；硝酸纖維膜由美國Bio-Rad公司提供；一抗為兔抗-Ki67(ab16667)、兔抗-增殖細胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen，PCNA)(ab29)、兔抗-p53凋亡刺激蛋白抑制劑(inhibitor of apoptosis-stimulating of p53 protein，iASPP)(ab34898)、兔抗-p53凋亡刺激蛋白1(apoptosis-stimulating of p53 protein 1，ASPP1)(ab51831)、兔抗-ASPP2(ab181377)、兔抗-甘油醛-3-磷酸脫氫酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH)(ab170904)，二抗為山羊抗兔IgG 辣根過氧化物酶(horseradish peroxidase，HRP)IgG(ab97064)購自美國Abcam公司。DNA酶Ⅰ(Dnase Ⅰ，10104159001)與完全蛋白酶抑制劑(11583794001)購自美國羅氏集團。

1.3 方法

1.3.1 細胞培養(yǎng)與OXT處理

SKOV3和A2780細胞均使用含有10%FBS的RPMI-1640培養(yǎng)基培養(yǎng)于細胞培養(yǎng)箱(37 ℃，5%CO2)。所有細胞每2～3 d換液1次，待細胞融合率達到80%時按照1:3比例傳代。A2780細胞用于miR-196b-3p水平變化的檢測。

收集細胞，采用96孔板，調(diào)整SKOV3或A2780細胞密度為5×103孔-1進行接種。細胞處理及分組：OXT組，細胞以100 nM OXT處理12 h[14]；Atosiban+OXT組，細胞以100 nM OXT聯(lián)合100 nM OXTR拮抗劑Atosiban處理12 h[15]；control組，細胞未經(jīng)OXT或Atosiban處理。使用OXTR活性ELISA檢測試劑盒檢測SKOV3細胞中OXTR的激活狀況。control組：無處理的SKOV3細胞組；OXT組：100 nM OXT處理SKOV3細胞12 h；OXT+miR-mimic-NC組：miR-mimic-NC 轉(zhuǎn)染細胞24 h后繼續(xù)使用100 nM OXT處理SKOV3細胞12 h；OXT+miR-mimic組：miR-mimic轉(zhuǎn)染細胞24 h后繼續(xù)使用100 nM OXT處理SKOV3細胞12 h。

通過Targetscan及Targets and Expression生物信息學軟件預測，發(fā)現(xiàn)凋亡相關蛋白ASPP2可能是miR-196b-3p的靶基因。為了證實這一預測，對SKOV3細胞轉(zhuǎn)染miR-196b-3p mimic或miR-196b-3p inhibitor，24 h后檢測各組miR-196b-3p的表達變化。

1.3.2 細胞轉(zhuǎn)染

按照上海生工生物有限公司提供的說明書并參考LIU等[16]的研究，分別將miR-196b-3p-mimic(miR-mimic組)和miR-196b-3p-mimic(miR-mimic-NC組)轉(zhuǎn)染至SKOV3細胞中24 h。OXT與miR-mimic共處理細胞：miR-mimic轉(zhuǎn)染SKOV3細胞24 h繼續(xù)使用OXT處理12 h(OXT+miR-mimic組)，陰性對照組為miR-mimic-NC轉(zhuǎn)染入SKOV3細胞24 h后再使用OXT處理12 h(OXT+miR-mimic-NC組)。

1.3.3 SKOV3細胞增殖活性檢測

采用MTT法。將待檢測各組細胞的密度調(diào)整為5×103，并接種于96孔板，MTT(終質(zhì)量濃度5 mg·mL-1)37 ℃孵育SKOV3 4 h，棄上清液后加入二甲基亞砜(dimethyl sulfoxide，DMSO)。使用酶標儀檢測A490 nm處的吸光度值(OD)，計算細胞成活率。細胞存活率=(處理組OD值-空白對照組OD值)/(對照組OD值-空白對照組OD值)×100%。處理組即為對細胞各種處理的組。

1.3.4 SKOV3細胞的Caspase3活性檢測

首先將待檢測各組細胞的密度調(diào)整為5×103，離心棄掉上清液，使用PBS洗滌2次，加入100 μL裂解緩沖液，冰上放置15 min，渦旋振蕩15 s，離心5 min。取10 μL蛋白上清液，加入到90 μL Caspase3活性檢測液，加入10 μL Ac-LEHD-pNA，避光反應1～2 h后檢測結(jié)果。

1.3.5 實時熒光定量PCR(qRT-PCR)

分別收集control、OXT或Atosiban+OXT處理下的SKOV3與A2780的細胞，TRIzol法抽提細胞總RNA，M-MLV逆轉(zhuǎn)錄試劑盒合成cDNA，miRNA逆轉(zhuǎn)錄使用miScript逆轉(zhuǎn)錄試劑盒合成。cDNA特定RNA產(chǎn)物的產(chǎn)量檢測使用SYBR Green Master Mix、RUN6(miRNA)為內(nèi)參對miR-196b-3p的表達量進行標準化處理。反應體系(20 μL)：10 μL SYBR，2.0 ng模板cDNA，正反向引物濃度均為20 μM，體積為0.8 μL，最終使用滅菌蒸餾水加至20 μL。PCR過程：40個循環(huán)，94 ℃，1 min；54 ℃，1 min；聚合72 ℃，1 min；延伸72 ℃，7 min。miR-196b-3p的相對表達使用公式2-ΔΔCt計算。

1.3.6 Western blot檢測

細胞加入蛋白裂解液以裂解細胞，雙辛酸(bicinchoninic acid，BCA)法檢測蛋白濃度。配制十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis，SDS-PAGE)，凝膠后行蛋白電泳，將凝膠中蛋白轉(zhuǎn)移至聚偏二氟乙烯膜(polyvinylidene fluoride，PVDF)，5%脫脂奶粉封閉3 h，分別使用相應的一抗Ki67(1:1000)、PCNA1(1:900)、iASPP(1:1000)、ASPP1(1:1200)、ASPP2(1:1000)、GAPDH(1:8000)進行孵育，孵育過夜后PBS洗滌3次，每次10 min，隨后使用HRP anti-rabbit IgG(1:10 000)室溫孵育1 h。使用化學發(fā)光液(electrochemical luminescence，ECL)進行顯色?；叶戎凳褂肐mageJ V1.49軟件進行分析。

1.3.7 螢光素酶報告基因分析

生物信息學預測發(fā)現(xiàn)miR-196-3p序列與ASPP2的3’-UTR區(qū)具有結(jié)合關系。將野生型的ASPP2 3’-UTR(WT- UTR)或突變型的ASPP2 3’-UTR(mut-UTR，已經(jīng)過點突變)分別插入到pGL3載體(Promega,Madison,WI,USA)的XbaI/FseI 位點。熒光素酶活性分析如下：使用雙基因轉(zhuǎn)染試劑(Thermo Fisher Scientific,UK)對細胞共轉(zhuǎn)染miR-mimic、WT-ASPP2 3’-UTR 或mut-ASPP2 3’-UTR，轉(zhuǎn)染時間為48 h。根據(jù)制造商的指示，用Dual-Glo熒光素酶檢測系統(tǒng)(Promega,Madison,WI,USA)進行熒光素酶活性分析。使用熒光素酶報告基因?qū)嶒烌炞CmiR-196b-3p與ASPP2的關系。構(gòu)建野生型(WT)及突變型(mut)的ASPP2 3’-UTR并克隆到熒光素酶報告基因下游。

1.4 統(tǒng)計學方法

本研究的實驗均獨立重復3次，數(shù)據(jù)采用SPSS.22軟件進行分析。結(jié)果表示為均數(shù)±標準差(Mean±SD)，多組間使用單因素方差分析比較，組內(nèi)兩兩比較采用t檢驗。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 OXT通過激活OXTR抑制卵巢癌細胞SKOV3的增殖活性

OXT、Atosiban+OXT和對照組3組的OXTR活性比較差異有統(tǒng)計學意義(F=28.842，P<0.05)，與對照組相比，OXT組中OXTR活性升高(P<0.05)，Atosiban+OXT組中OXTR活性顯著低于OXT組(P<0.05)，見圖1A。結(jié)果表明，OXT激活OXTR，當使用OXTR的拮抗劑Atosiban處理細胞后，OXTR被激活的效率顯著降低。

OXT、Atosiban+OXT和對照組3組的細胞增殖活性比較差異有統(tǒng)計學意義(F=12.988，P<0.05)，與對照組相比，OXT組細胞增殖活性降低(P<0.05)，Atosiban+OXT組中細胞增殖活性顯著高于OXT組(P<0.05)，見圖1B。此外，OXT、Atosiban+OXT和對照組3組的Ki67與PCNA的蛋白水平比較差異有統(tǒng)計學意義(Ki67：F=141.902，P<0.05；PCNA：F=140.959，P<0.05)，OXT組Ki67與PCNA的蛋白水平均低于對照組(均P<0.05)，Atosiban+OXT組Ki67與PCNA的蛋白水平均較OXT組升高(均P<0.05)，見圖1C—E。結(jié)果表明，OXT通過激活OXTR來抑制SKOV3細胞的增殖活性。

A：OXTR相對活性變化；B：細胞存活率變化；C：Ki67與PCNA的Western blot條帶；D：Ki67蛋白相對表達變化；E：PCNA蛋白相對表達變化。n=3，*P<0.05與對照組比較，#P<0.05與OXT組比較。

圖1 OXT激活OXTR抑制SKOV3細胞增殖活性

2.2 OXT通過激活OXTR提高卵巢癌細胞SKOV3中的Caspase3活性

OXT、Atosiban+OXT和對照組3組的Caspase3活性比較差異有統(tǒng)計學意義(F=26.676，P<0.05)，與對照組相比，OXT組中Caspase3的活性升高(P<0.05)，Atosiban+OXT組中Caspase3活性顯著低于OXT組(P<0.05)，見圖2A。結(jié)果表明，OXT激活Caspase3，當使用OXTR的拮抗劑Atosiban時，Caspase3的活性降低。此外，OXT、Atosiban+OXT和對照組的ASPP1，ASPP2及iASPP蛋白水平比較差異有統(tǒng)計學意義(ASPP1：F=46.597，P<0.05；ASPP2：F=24.657，P<0.05；iASPP：F=18.021，P<0.05)，OXT組ASPP1和ASPP2的蛋白水平均高于對照組、ASPP抑制因子iASPP低于對照組(均P<0.05)；與OXT組相比，Atosiban+OXT組中ASPP2的蛋白水平下調(diào)(P<0.05)，但ASPP1及iASPP的水平無顯著變化(P>0.05)，見圖2B—E。結(jié)果表明，OXT激活OXTR可促進SKOV3細胞的凋亡。

A：Caspase3活性變化；B：ASPP1、ASPP2及iASPP的Western blot條帶；C：ASPP1的相對表達變化；D：ASPP2的相對表達變化；E：iASPP的相對表達變化。n=3，*P<0.05與對照組比較，#P<0.05與OXT組比較。

圖2 OXT激活OXTR促進SKOV3細胞凋亡

2.3 OXT下調(diào)卵巢癌細胞中miR-196b-3p的水平

A2780和SKOV3兩種細胞系miR-196b-3p水平在OXT、Atosiban+OXT和對照組3組之間差異有統(tǒng)計學意義(A2780：F=76.406，P<0.05；SKOV3：F=45.874，P<0.05)，與對照組相比，OXT組中miR-196b-3p水平均顯著下調(diào)(均P<0.05)，當使用OXTR的拮抗劑Atosiban時，miR-196b-3p的水平部分恢復，見圖3A—B。結(jié)果表明，OXT可抑制卵巢癌細胞中miR-196b-3p的水平。

A：A2780細胞中miR-196b-3p的相對水平變化；B：SKOV3細胞中miR-196b-3p的相對水平變化。n=3，

*P<0.05與對照組比較，#P<0.05與OXT組比較。

圖3 OXT激活OXTR抑制卵巢癌細胞中miR-196b-3p水平

2.4 miR-196b-3p mimic處理部分逆轉(zhuǎn)OXT的效果

檢測各組miR-196b-3p的表達變化，發(fā)現(xiàn)miR-196b-3p水平在control、OXT、OXT+miR-mimic、OXT+miR-mimic-NC組4組間差異有統(tǒng)計學意義(F=35.932，P<0.05)，與OXT組相比，OXT+miR-mimic可以顯著提高miR-196b-3p水平(P<0.05)，見圖4A。MTT結(jié)果發(fā)現(xiàn)，細胞增殖活性在4組間差異有統(tǒng)計學意義(F=9.232，P<0.05)，與OXT組相比，OXT+miR-mimic組的增殖活性上調(diào)(P<0.05)，OXT+miR-mimic-NC組的增殖活性與OXT組比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，見圖4B。此外，Caspase3活性檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)，Caspase3活性在4組間差異有統(tǒng)計學意義(F=36.350，P<0.05)，與OXT組相比，OXT+miR-mimic組的Caspase3活性下調(diào)(P<0.05)；OXT+miR-mimic-NC組的Caspase3活性與OXT組比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，見圖4C。結(jié)果表明，OXT通過抑制miR-196b-3p水平調(diào)節(jié)卵巢癌細胞增殖與凋亡。

A：miR-196b-3p相對表達變化；B：細胞存活率變化；C：Caspase3相對活性變化。n=3，*P<0.05與control組比較，#P<0.05與OXT組比較。

圖4 miR-196b-3p mimic處理部分逆轉(zhuǎn)OXT的效果

2.5 ASPP2是miR-196b-3p的靶基因

miR-196b-3p水平在control、miR-mimic、miR-mimic-NC、miR-inhibitor和miR-inhibitor-NC組5組間差異有統(tǒng)計學意義(F=72.473，P<0.05)，與control組相比，miR-mimic可以顯著提高miR-196b-3p的水平(P<0.05)，而miR-inhibitor可以顯著抑制miR-196b-3p的水平(P<0.05)，見圖5A。檢測ASPP2的蛋白表達水平，結(jié)果發(fā)現(xiàn)ASPP2蛋白水平在5組間差異有統(tǒng)計學意義(F=83.013，P<0.05)，與control組相比，miR-mimic組的ASPP2表達下調(diào)(P<0.05)；miR-mimic-NC組的ASPP2表達與control組比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，見圖5B。對SKOV3細胞轉(zhuǎn)染miR-196b-3p inhibitor，24 h后檢測ASPP2的蛋白表達水平，結(jié)果發(fā)現(xiàn)與control組相比，miR-inhibitor組的ASPP2表達上調(diào)(P<0.05)；miR-inhibitor-NC組的ASPP2表達與control組比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，見圖5B。熒光素酶報告基因?qū)嶒灲Y(jié)果發(fā)現(xiàn)與control組相比，miR-196b-3p下調(diào)wild-ASPP2的3’-UTR水平，差異有統(tǒng)計學意義(t=16.699，P<0.05)，見圖5C。然而與control組相比，miR-196b-3p對mut-ASPP2的3’-UTR水平無改變，差異無統(tǒng)計學意義(t=-0.065，P>0.05)，見圖5C。表明，在卵巢癌細胞中ASPP2是miR-196b-3p的下游靶基因。

以上結(jié)果表明，OXT介導的OXTR激活通過調(diào)節(jié)miR-196b-3p/ASPP2信號通路抑制卵巢癌細胞增殖并促進其凋亡。

A:miR-196b-3p相對表達變化；B:ASPP2蛋白的相對表達變化；C:熒光素酶報告基因?qū)嶒烌炞CASPP2是miR-196b-3p的下游靶基因。WT：wild type；mut：mutant type；n=3,*P<0.05、&P<0.05、#P<0.05與control組比較。

圖5(續(xù))

3 討論

本研究首先探明OXT通過激活OXTR對卵巢癌細胞增殖與凋亡進行調(diào)節(jié)。OXTR屬于G蛋白偶聯(lián)受體家族，在以往研究中，OXT通過激活OXTR可以發(fā)揮多種癌癥進展的調(diào)節(jié)作用[4]，OXT被多方證實可作為婦科癌癥的候選藥物[4，17]。本研究確認，OXT激活SKOV3細胞OXTR的同時，細胞增殖活性被抑制，而且細胞增殖標記物Ki-67、PCNA蛋白的表達均減少，當使用OXTR拮抗劑Atosiban時，Ki-67、PCNA蛋白水平部分恢復。因此，OXT通過激活OXTR抑制卵巢癌細胞增殖。進一步發(fā)現(xiàn)OXT導致Caspase3活性增加。檢測凋亡刺激蛋白家族成員(ASPP1、ASPP2和iASPP)的表達，發(fā)現(xiàn)ASSP1及ASSP2的表達水平升高，iASSP的表達水平降低。ASPP1與ASPP2能與p53家族成員直接作用選擇性地促進它們對促凋亡基因的轉(zhuǎn)錄活性[13]，從而抑制細胞增殖并促進凋亡[18]。而iASPP是p53凋亡刺激蛋白抑制劑，研究發(fā)現(xiàn)iASPP在卵巢癌組織中表達上調(diào)[19]，且iASPP可抑制癌細胞凋亡[18]。在OXTR激活與卵巢癌細胞凋亡關系的研究中發(fā)現(xiàn)，使用OXTR拮抗劑Atosiban時，OXT對細胞Caspase3活性以及標記分子ASPP2的表達的調(diào)節(jié)效果明顯減弱，而Atosiban對iASPP和ASPP1的表達影響不明顯，暗示OXTR激活對卵巢癌凋亡的作用可能通過ASPP2介導，而非ASPP1或iASPP。以上表明，OXT對卵巢癌細胞的增殖活性具有抑制作用，對細胞凋亡具有誘導作用。OXT激活OXTR可能通過上調(diào)ASSP2對卵巢癌細胞凋亡發(fā)揮促進作用。

MiR-196b是一種關鍵性促癌miRNA。在卵巢上皮癌中miR-196b水平上調(diào)可促進細胞的侵襲性[8- 9]。已有研究[9]發(fā)現(xiàn)在復發(fā)性卵巢上皮癌中miR-196b前體的3’端降解物miR-196b-3p的表達顯著升高。本研究發(fā)現(xiàn)miR-196b-3p在OXT刺激下的卵巢癌細胞中表達顯著降低，這與miR-196b-3p在子宮肌層中被OXT抑制[12]的結(jié)果有一致性。本研究在卵巢癌細胞中使用miR-196b-3p擬似物上調(diào)miR-196b-3p水平后，發(fā)現(xiàn)OXT介導的抑制增殖和促進凋亡的效果均顯著減弱，即部分被逆轉(zhuǎn)。而JEONG等[10]發(fā)現(xiàn)miR-196b-3p可促進前列腺癌進程，這與本研究發(fā)現(xiàn)的miR-196b-3p在卵巢癌中的促癌效果相類似。表明，miR-196b-3p是OXT調(diào)節(jié)卵巢癌細胞增殖與凋亡的關鍵下游分子。

本研究進一步發(fā)現(xiàn)miR-196b-3p通過調(diào)控靶基因ASPP2參與OXT對卵巢癌細胞增殖與凋亡的調(diào)節(jié)。越來越多的證據(jù)表明，促癌miRNA通過靶向抑制抑癌基因參與調(diào)節(jié)癌細胞增殖、凋亡與血管生成[20]。多種miRNA在卵巢癌細胞或組織中有異位表達，并且發(fā)揮著調(diào)節(jié)功能[21-22]。例如，miR-614在卵巢癌組織與細胞中高表達，體外增加miR-614的胞內(nèi)水平可以促進卵巢癌細胞增殖并抑制凋亡，其內(nèi)在分子機制是miR-614抑制細胞分裂調(diào)節(jié)因子PPP2R2A的表達，并確定PPP2R2A是miR-614的靶基因[23]。本研究首先觀察到OXT負調(diào)節(jié)miR-196b-3p水平同時正調(diào)節(jié)ASPP2的表達，但是又進一步發(fā)現(xiàn)ASPP2受miR-196b-3p的負調(diào)節(jié)。使用生物信息學工具預測發(fā)現(xiàn)miR-196b-3p可能的靶基因之一是ASPP2。并最終通過熒光素酶報告基因?qū)嶒炇状悟灻髀殉舶┘毎蠥SPP2是miR-196b-3p的直接靶基因。因此，以上結(jié)果表明OXT介導的OXTR激活通過調(diào)節(jié)miR-196b-3p/ASPP2信號通路調(diào)節(jié)卵巢癌細胞的增殖與凋亡。

綜上，本研究證實OXT介導的OXTR激活抑制了卵巢癌細胞的生長功能，并發(fā)現(xiàn)OXT通過抑制miR-196b-3p水平促進p53凋亡刺激蛋白ASPP2的表達，進而調(diào)節(jié)著卵巢癌細胞的增殖及凋亡活性。