3 種布魯氏菌疫苗不同接種方式的安全性和免疫效果評估

安尼瓦爾，多里坤，張 斐，達列力，地力夏提，王 強，馬力克，馬建文，李萬榮，呂春華，葉爾肯，沙依蘭別克，林漢亮

（1.新疆維吾爾自治區(qū)動物疾病預(yù)防與控制中心，新疆烏魯木齊 830011；2.昌吉州動物疫病預(yù)防與控制中心，新疆昌吉 831100；3.昌吉市動物疫病預(yù)防與控制中心，新疆昌吉 831100；4.阿勒泰地區(qū)動物疫病預(yù)防控制中心，新疆阿勒泰 836500；5.福?？h畜牧獸醫(yī)站，新疆福海 836400）

布魯氏菌?。ㄒ韵潞喎Q布?。┦浅嗜澜绶植嫉娜双F共患病，報告發(fā)生過布病的國家和地區(qū)已有170 余個[1]。據(jù)世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計，全世界每年的人間新發(fā)布病病例達50 萬例[2]。人畜間布病的流行和傳播，給全世界構(gòu)成了嚴重的公共衛(wèi)生威脅，對畜牧業(yè)健康發(fā)展和畜產(chǎn)品流通造成了嚴重阻礙[3]。

20 世紀90 年代中期以來，我國人畜間布病疫情呈持續(xù)回升蔓延之勢[4]，人間年新發(fā)病例達5 萬余例[5]。2012 年，國家頒布了《國家中長期動物疫病防治規(guī)劃（2012—2020 年）》和《國家布魯氏菌病防治計劃（2016—2020 年）》，根據(jù)各省人畜間布病流行程度，進行了區(qū)域劃分，對劃分為一類的省份（重度流行區(qū)），實行以疫苗免疫為主的綜合防控措施。

新疆被劃分為布病一類地區(qū)。為確保全區(qū)布病免疫工作的順利開展，經(jīng)原自治區(qū)畜牧廳獸醫(yī)局批準，自治區(qū)動物衛(wèi)生監(jiān)督所按照《2016 年布病與包蟲病疫苗免疫效果及安全性試點調(diào)查實施方案》的要求，于2016 年4—12 月在昌吉回族自治州昌吉市和阿勒泰地區(qū)福?？h，選擇分別代表農(nóng)區(qū)和牧區(qū)兩種飼養(yǎng)管理模式的場（群）以及3 個疫苗廠家，聯(lián)合開展了家畜布病疫苗安全性和免疫效果比對試驗。

1 材料和方法

1.1 選用疫苗

A 廠家：REV-1 布魯氏菌弱毒凍干活疫苗；B 廠家：A19 布魯氏菌弱毒凍干活疫苗；C 廠家：M5 布魯氏菌弱毒凍干活疫苗、A19 布魯氏菌弱毒凍干活疫苗。

1.2 調(diào)查地點

農(nóng)區(qū)調(diào)查點：昌吉回族自治州昌吉市某規(guī)模場；牧區(qū)調(diào)查點：阿勒泰地區(qū)福?？h牛羊規(guī)模場各2 個。

1.3 試驗分組

根據(jù)調(diào)查點、疫苗廠家、接種方式、動物種類，將試驗動物分為10 組，其中：牛20 頭2 組，40 頭2 組，共4 組；羊30 只4 組，60 只2 組，共6組。羊免疫REV-1和M5疫苗，牛免疫A19（A廠）、M5、A19（C 廠）疫苗（表1）。

表1 試驗動物分組設(shè)計

1.4 健康狀況觀察和基礎(chǔ)抗體水平檢測

1.4.1 健康狀況觀察 接種疫苗前，對試驗動物健康狀況進行詢問調(diào)查和現(xiàn)場臨床觀察；接種疫苗后，對試驗動物連續(xù)觀察48 h。

1.4.2 基礎(chǔ)抗體水平檢測 接種疫苗前，對所有試驗動物采血，分離血清，采用布病虎紅平板凝集試驗（RBPT）進行抗體檢測。

1.5 免疫后抗體檢測和陽轉(zhuǎn)率計算

1.5.1 抗體檢測 分別于接種疫苗后30、90、180、240 d 采集血清樣品，按照《動物布魯氏菌病診斷技術(shù)》（GB/T 18646—2018）規(guī)定的方法進行抗體檢測。先采用虎紅平板凝集試驗（RBPT）進行初篩，檢測為陽性的，再用試管凝集試驗（SAT）進行確診，SAT 滴度達到1:50 以上的，判定為陽性[6]。

1.5.2 陽轉(zhuǎn)率計算 陽轉(zhuǎn)率=確診為陽性的樣本數(shù)/被檢測樣本總數(shù)×100%。

2 結(jié)果

2.1 臨床健康狀況

通過詢問及現(xiàn)場觀察，確定試驗組牛羊在接種疫苗前及接種疫苗后48 h 內(nèi)，均未見不良反應(yīng)。

2.2 試驗動物基礎(chǔ)抗體水平

RBPT 檢測顯示，在所有試驗動物中，第10組的1 頭牛及第4 組的2 頭牛為陽性，說明這3頭牛接種疫苗前已感染布魯氏菌，故將其從后續(xù)試驗中剔除。

2.3 試驗動物陽轉(zhuǎn)率

2.3.1 農(nóng)區(qū)試驗動物組 分別接種A、B、C 3 個廠家的疫苗，試驗動物抗體陽轉(zhuǎn)率消長曲線見圖1。接種疫苗后30 d，試驗動物陽轉(zhuǎn)率均達到85%以上，其中B 廠家的A19 疫苗（牛）陽轉(zhuǎn)率最高為100%，其次為C 廠家的M5 疫苗（羊），點眼和皮下注射的陽轉(zhuǎn)率均為93.33%，陽轉(zhuǎn)率最低的是A 廠家的REV-1 疫苗（羊），為85.19%。接種疫苗后90 d，B 廠家的A19 疫苗（牛）陽轉(zhuǎn)率降低幅度最小，從100%降至76.90%；C 廠家的M5疫苗（羊），點眼比皮下注射接種的陽轉(zhuǎn)率下降幅度多9.50%；A 廠家的REV-1 疫苗（羊）陽轉(zhuǎn)率下降幅度最大，下降83.34%。接種疫苗后180 d，B 廠家的A19 疫苗（牛）陽轉(zhuǎn)率下降至13.51%，比90 d時下降了63.39%，下降幅度最大；C 廠家的M5疫苗（羊），點眼和皮下注射接種陽轉(zhuǎn)率均比90 d時略有升高；A 廠家的REV-1 疫苗（羊）陽轉(zhuǎn)率沒有變化。接種疫苗后240 d，試驗動物陽轉(zhuǎn)率均低于10%，其中A 廠家的REV-1 疫苗（羊）陽轉(zhuǎn)率為0，無法為動物提供任何抗體保護。

圖1 農(nóng)區(qū)動物抗體陽轉(zhuǎn)率消長曲線

2.3.2 牧區(qū)試驗動物組 分別接種A、B、C 3 個廠家的疫苗，試驗動物抗體陽轉(zhuǎn)率消長曲線見圖2。接種疫苗后30 d，試驗動物陽轉(zhuǎn)率均高于85%，其中：B 廠家A19 疫苗（牛）和C 廠家M5 疫苗（羊）陽轉(zhuǎn)率均達到100%；C 廠家M5 疫苗（羊）陽轉(zhuǎn)率（96.60%）略大于C 廠家M5 疫苗（牛）的陽轉(zhuǎn)率（95.00%）和A 廠家REV-1 疫苗（羊）的陽轉(zhuǎn)率（93.33%）；C 廠家A19 疫苗（牛）的陽轉(zhuǎn)率最低，為85.00%。接種疫苗后90 d，A 廠家REV-1 疫苗（羊）陽轉(zhuǎn)率下降幅度最大，下降83.33%；C 廠家A19 疫苗（牛）陽轉(zhuǎn)率下降幅度最小，下降25.00%。接種疫苗后180 d，各組試驗動物陽轉(zhuǎn)率明顯下降，均低于50%，其中C 廠家M5 疫苗（牛）陽轉(zhuǎn)率下降至0。接種疫苗后240 d，各組試驗動物陽轉(zhuǎn)率持續(xù)下降。

圖2 牧區(qū)動物抗體陽轉(zhuǎn)率消長曲線

2.3.3 不同動物、不同接種方式比較 匯總農(nóng)區(qū)、牧區(qū)10 組試驗動物接種疫苗后30、90、180、240 d陽轉(zhuǎn)率情況見表2。對羊陽轉(zhuǎn)率來說，C 廠家M5疫苗皮下注射＞C 廠家M5 疫苗點眼＞A 廠家的REV-1 疫苗點眼，說明C 廠家M5 疫苗皮下注射方式效果最好。對牛陽轉(zhuǎn)率來說，接種疫苗30 d時，B 廠家A19 疫苗皮下注射＞C 廠家M5 疫苗皮下注射＞C 廠家A19 疫苗皮下注射；90 d 時，B廠家A19 疫苗皮下注射＞C 廠家A19 疫苗皮下注射＞C 廠家M5 疫苗皮下注射；180 和240 d 時，C 廠家A19 疫苗皮下注射＞B 廠家A19 疫苗皮下注射＞C 廠家M5 疫苗皮下注射。因此，30 d 時，B 廠家的A19 疫苗對牛免疫效果最好，90～240 d 時，則C 廠家的A19 疫苗對牛免疫效果最好。

3 討論

新疆作為布病一類地區(qū)（重度流行區(qū)），在實行以疫苗免疫為主的綜合防控措施時，選取適合新疆實際的布病疫苗至關(guān)重要。此次試驗按照《2016年布病與包蟲病疫苗免疫效果及安全性試點調(diào)查實施方案》聯(lián)合3 家布病疫苗生產(chǎn)廠家，分別在農(nóng)區(qū)和牧區(qū)開展了家畜布病疫苗安全性和免疫效果比對試驗，掌握了3 種疫苗在不同飼養(yǎng)方式、不同畜種、不同接種方式下的安全性和有效性的第一手材料，為科學(xué)選取適合新疆地區(qū)的布病疫苗提供了參考，從而為全區(qū)布病免疫工作的全面順利開展奠定了基礎(chǔ)。

在此次對比試驗中，免疫3 個廠家的布病疫苗后，未見免疫牛羊出現(xiàn)不良反應(yīng)，說明3 個廠家的布病疫苗是安全的。

接種布魯氏菌弱毒凍干活疫苗后，絕大多數(shù)被接種家畜在抗原刺激下，逐漸產(chǎn)生抗體[7]。農(nóng)區(qū)和牧區(qū)兩種飼養(yǎng)方式下的牛羊，在接種布病疫苗后，隨著時間的推移，陽轉(zhuǎn)率變化趨勢基本一致，30 d最高，隨后逐漸降低，至240 d 時大多接近0，說明飼養(yǎng)方式對布病疫苗陽轉(zhuǎn)率幾乎沒有影響。

此次試驗發(fā)現(xiàn)，皮下注射接種方式下的兩種疫苗轉(zhuǎn)陽率在30、90、180、240 d 時，大多高于點眼方式，說明皮下注射接種能更好地刺激動物機體的免疫應(yīng)答，從而產(chǎn)生更多的抗體，抗體持續(xù)時間更長?？傮w來看，接種疫苗后30 d 是評價布病免疫效果的最佳時期。

本研究也存在一些不足，如在評估3 種布病疫苗的安全性時，僅關(guān)注了疫苗接種后的臨床反應(yīng)，但對牛羊身體機能、生產(chǎn)性能的影響未進行評估。同時，僅關(guān)注了被接種牛羊的安全性，未對接種疫苗的基層防疫員健康狀況進行跟蹤評估。另外，對于牧區(qū)來說，放牧?xí)r無法避免不同畜群的混群和接觸，因而無法完全排除野毒感染使試驗動物陽轉(zhuǎn)率變高的可能性。

表2 3 個廠家布病疫苗試驗動物陽轉(zhuǎn)率匯總 %

4 結(jié)論

研究發(fā)現(xiàn)：3 個廠家生產(chǎn)的布病疫苗安全性較高，不同免疫方式都可使農(nóng)區(qū)或牧區(qū)牛羊產(chǎn)生較好的免疫效果，但皮下注射方式效果更佳；牛羊免疫后30 d 即可產(chǎn)生較高的免疫抗體，此時是最佳的免疫效果評價期。