沉默SOX4抑制骨肉瘤細(xì)胞的生長和轉(zhuǎn)移

傅 薔,史紀(jì)元,趙 婷,查鷺婷,劉安生(西安市兒童醫(yī)院血液腫瘤科,西安 70003;陜西省人民醫(yī)院骨科;通訊作者,E-mail:ShiJYsy@63.com)

骨肉瘤(osteosarcoma,OS)是最常見的原發(fā)性惡性骨腫瘤,青少年具有較高的發(fā)病率[1,2]。新輔助化療的使用雖然明顯增加了骨肉瘤患者的5年生存率,但骨肉瘤患者的預(yù)后仍十分兇險[3],因此,需要探索抑制腫瘤轉(zhuǎn)移的新療法。性別決定區(qū)Y框蛋白4(SOX4)是一種47 kD蛋白,包含3個可區(qū)分的結(jié)構(gòu)域,即高遷移率基團(tuán)(HMG)DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域(DBD)、富含甘氨酸的結(jié)構(gòu)域和富含絲氨酸的結(jié)構(gòu)域[4-7]。DBD與TCF/LEF轉(zhuǎn)錄因子家族有關(guān),并具有促進(jìn)細(xì)胞凋亡的功能[8]。SOX4通過其HMG域與包含7 bp DNA基序AACAAAG的靶基因結(jié)合,從而在轉(zhuǎn)錄水平上激活靶基因[9]。大量研究證明,SOX4在胚胎發(fā)育、細(xì)胞生長和分化中起重要作用[4-7]。近年來,SOX4基因在腫瘤發(fā)生中的作用越來越受到重視,并發(fā)現(xiàn)該基因在包括食道癌、肝癌、乳腺癌和非小細(xì)胞肺癌在內(nèi)的多種人類惡性腫瘤中過表達(dá),并且與患者的預(yù)后明顯相關(guān)[10-12]。然而,目前尚未確定人骨肉瘤中SOX4表達(dá)水平與患者預(yù)后的關(guān)系。本研究推測骨肉瘤中可能存在SOX4的異常表達(dá),并且SOX4可能在骨肉瘤進(jìn)展中發(fā)揮作用。因此,本研究旨在揭示SOX4與人骨肉瘤患者臨床病理指標(biāo)之間的關(guān)系,探討SOX4在體內(nèi)外對人骨肉瘤細(xì)胞生長和轉(zhuǎn)移的調(diào)控機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 病例樣本收集

收集2016-01～2018-12西安市兒童醫(yī)院血液腫瘤科確診的30例骨肉瘤患者的手術(shù)活檢骨肉瘤樣本,患者先前均未進(jìn)行任何化放療及藥物治療。觀察骨肉瘤患者SOX4表達(dá)與臨床指標(biāo)的關(guān)系。

1.2 骨肉瘤組織中SOX4的免疫組化染色

將石蠟包埋的骨肉瘤組織切片在60 ℃熱處理1 h,二甲苯脫蠟,梯度乙醇(100%-50%)水化,然后用pH 6.0的0.01 mol/L檸檬酸鹽緩沖液進(jìn)行抗原修復(fù)。用含0.3% H2O2的甲醇抑制內(nèi)源性過氧化物酶活性30 min。將切片與SOX4一抗(英國Abcam公司)在4 ℃孵育過夜。然后在37 ℃下與生物素化的二抗(英國Abcam公司)孵育1 h。切片用二氨基聯(lián)苯胺(DAB,艾美捷科技有限公司)顯色。陽性細(xì)胞被染為棕色和深棕色,陰性細(xì)胞為淡黃色或未染色。隨機(jī)選擇5個載玻片區(qū)域計算陽性細(xì)胞百分比。將大于50%細(xì)胞陽性染色的樣本定義為陽性,否則為陰性。

1.3 細(xì)胞培養(yǎng)

人骨肉瘤細(xì)胞系Saos-2和人成骨細(xì)胞hFOB 1.19購自中國科學(xué)院典型培養(yǎng)物保藏委員會細(xì)胞庫。細(xì)胞均在添加10%胎牛血清(美國Invitrogen公司)、青霉素(100 U/ml)和鏈霉素(100 mg/ml,美國Invitrogen公司)的Dulbecco改良的Eagle培養(yǎng)基(DMEM,美國Invitrogen公司)中培養(yǎng)。培養(yǎng)條件:5% CO2,33.5 ℃。

1.4 SOX4-shRNA細(xì)胞轉(zhuǎn)染

由上海吉凱基因化學(xué)技術(shù)有限公司合成SOX4短發(fā)夾RNA(SOX4-shRNA),并將其克隆到pGFP-V-RS逆轉(zhuǎn)錄病毒載體中。pGFP-V-RS-SOX4-shRNA序列為:AGCCCTCGAACTCAAAGCACGCCTCAGGC,陰性對照shRNA(pGFP-V-RS-NC-shRNA)序列為:GCAAGTAACTAGCCACCAGGATCTATACT。將細(xì)胞接種在24孔板,每個孔中的細(xì)胞生長至80%融合后,按照制造商的說明,用Lipofectamine 2000(美國Invitrogen公司)將shRNA轉(zhuǎn)染細(xì)胞48 h。

Annexin Ⅴ/PI分析顯示,與NC-shRNA組相比,SOX4敲低組細(xì)胞凋亡率明顯增加(1.54%±0.18%vs23.37%±3.19%,P<0.001,見圖4)。為了進(jìn)一步研究SOX4基因沉默對骨肉瘤細(xì)胞凋亡的誘導(dǎo)機(jī)制,本研究檢測了敲低SOX4對細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白的影響。研究結(jié)果顯示,與NC-shRNA組相比,SOX4敲低組骨肉瘤細(xì)胞中促凋亡蛋白Bax和P53的蛋白表達(dá)水平顯著升高(均P<0.001),分別升高了3.54±3.04倍和3.11±0.19倍,而抗凋亡蛋白Bcl-2的蛋白表達(dá)水平顯著降低(降低了78.86%±5.67%,P<0.001,見圖5)。

1.5 RT-PCR檢測細(xì)胞中SOX4 mRNA水平

使用Trizol試劑(美國Invitrogen公司)提取細(xì)胞總RNA。使用SYBR Premix Ex Taq試劑盒(日本TaKaRa公司)和ABI 7500型定量PCR儀(美國Applied Biosystems公司)進(jìn)行RT-PCR。引物序列如下。SOX4正向:5′-CTAGCCATGTGACATGGATGATTTT-3′,SOX4反向:5′-CGCATATGTACACATGGCGTGTGTGA-3′;GAPDH正向:5′-GGGATCTACGTACACACCTGTGCCG-3′,GAPDH反向:5′-GTTGTGCCTAGGGACCATATACCCA-3′。PCR條件為95 ℃ 60 s,95 ℃ 15 s,60 ℃ 30 s,72 ℃ 30 s,共循環(huán)40 次。使用GAPDH作為內(nèi)參基因,并根據(jù)2-ΔΔCt法計算SOX4 mRNA的相對表達(dá)量。

1.6 Western blot檢測細(xì)胞中SOX4、Bax、P53、Bcl-2、MMP2、MMP9和Fibronectin的蛋白水平

傷口愈合實(shí)驗顯示,在培養(yǎng)48 h時,與NC-shRNA組相比,SOX4敲低組細(xì)胞的傷口面積明顯升高(升高了76.87%±6.72%,P=0.009,見圖6A)。基質(zhì)膠侵襲實(shí)驗顯示,與對照細(xì)胞相比,SOX4敲低組的細(xì)胞侵襲數(shù)明顯降低(降低了58.53%±5.44%,P<0.001,見圖6B)。

1.7 Cell Counting Kit-8檢測細(xì)胞增殖

使用PE Annexin Ⅴ細(xì)胞凋亡檢測試劑盒(美國BD Bioscience公司)進(jìn)行細(xì)胞凋亡測定。將細(xì)胞在PBS中洗滌3次,重懸于300 μl結(jié)合緩沖液中。分別將Annexin Ⅴ和碘化丙啶(PI)添加到溶液中,渦旋振蕩,黑暗中孵育20 min。加入結(jié)合緩沖液并通過流式細(xì)胞術(shù)分析細(xì)胞。

1.8 流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡

通過Cell Counting Kit-8(CCK-8,東仁化學(xué)科技(上海)有限公司)細(xì)胞增殖測定法測定骨肉瘤細(xì)胞的增殖能力。按照10 000個/孔的密度將細(xì)胞接種在96孔板,在無血清培養(yǎng)基中37 ℃下孵育24 h。將20 μl CCK-8溶液添加到每個孔中,然后將細(xì)胞在37 ℃下孵育,使用酶標(biāo)儀檢測450 nm處的光密度值(OD)。

王莽史建國三年（公元11年）河水在魏郡元城（今河北大名東）以上決口，洪水泛濫了近六十年，到東漢明帝永平十二年（公元69年），經(jīng)過王景治河后，出現(xiàn)了一條新河道，即《水經(jīng)注》以及唐代《元和郡縣志》里的黃河。這條黃河已較西漢大河偏東，經(jīng)今黃河和馬頰河之間至利津入海。這條大河穩(wěn)定了六百多年，其間當(dāng)然也有多次決口，但無大的改流。直到唐朝末年開始在河口段有部分河段改道。[10]（鄒逸麟，1980，黃河下游河道變遷及其影響概述）宋朝初年，棣州（今山東惠民、濱縣一帶）境內(nèi)“河勢高民屋殆逾丈”。

1.9 傷口愈合實(shí)驗評估細(xì)胞的遷移能力

實(shí)心球投擲項目一直在初中體育課田徑部分占有很重要的地位，尤其是作為體育中考的重要項目，雖然是選擇性項目，但仍然越來越多地被學(xué)生、家長所關(guān)注，成為近些年中考體育的重點(diǎn)關(guān)注項目。就原地雙手向前投擲實(shí)心球而言，是發(fā)展上肢肌肉的速度力量和爆發(fā)力、全身用力素質(zhì)、腰腹背肌力量以及身體靈活性、協(xié)調(diào)性的運(yùn)動項目。對于上肢肌肉的速度力量、快速爆發(fā)用力要求較高；對于腰腹背肌的收展用力要求較高；對于全身的靈活協(xié)調(diào)用力要求較高；對于自身的動作控制力要求較高。

1.10 BioCoat Matrigel測定細(xì)胞侵襲能力

轉(zhuǎn)染攜帶SOX4-shRNA的pGFP-V-RS病毒載體后,Saos-2細(xì)胞系中SOX4的mRNA和蛋白表達(dá)分別降低了75.09%±6.42%和78.94%±7.11%(均P<0.001,見圖2)。CCK-8檢測顯示,與NC-shRNA組相比,SOX4敲低組在細(xì)胞培養(yǎng)48 h和72 h時細(xì)胞增殖能力顯著降低(分別降低了40.78%±3.70%和31.71%±2.09%,P=0.004和P=0.002,見圖3)。

將細(xì)胞接種在6孔板中并培養(yǎng)直至90%融合。使用20 μl移液器尖頭將單層細(xì)胞劃出傷口。在細(xì)胞培養(yǎng)48 h時用新鮮培養(yǎng)基將板洗滌1次以除去未黏附的細(xì)胞,然后拍照計算傷口愈合程度。

隨著數(shù)字網(wǎng)絡(luò)化技術(shù)的發(fā)展，圖書館的管理模式、服務(wù)功能也發(fā)生了巨大變化，從單一的靜默閱讀服務(wù)，發(fā)展成為團(tuán)隊研討，為雙創(chuàng)發(fā)展提供共享學(xué)習(xí)空間。為此，圖書館辦館方針任務(wù)也要隨之調(diào)整，要打造特色空間、智慧空間，整合文獻(xiàn)資源，建設(shè)特色資源，提高館藏利用率，處理好傳統(tǒng)文獻(xiàn)存儲空間與特色共享學(xué)習(xí)空間的相互依存、相互促進(jìn)的關(guān)系。這也是我們特色建館的關(guān)鍵。

1.11 小鼠異種移植腫瘤模型的建立

將1×106個用SOX4-shRNA或NC-shRNA轉(zhuǎn)染的Saos-2細(xì)胞懸浮在200 μl PBS中,分別皮下注射到SPF級6周齡雌性BALB/c裸鼠的背部(n=10),裸鼠由陜西省人民醫(yī)院動物實(shí)驗中心[SYXK(陜)2016-006]提供。定期測量腫瘤體積,腫瘤體積=0.5×長度×寬度2。第4周處死小鼠并分離腫瘤組織,然后固定在甲醛中進(jìn)行組織病理學(xué)分析。

1.12 統(tǒng)計學(xué)分析

使用SPSS22.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析。結(jié)果表示為平均值±標(biāo)準(zhǔn)差。兩組間比較使用雙尾t檢驗,多組間比較使用單因素方差分析(One-ANOVA)及事后LSD檢驗。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

從以上幾個實(shí)例可以看出，巖礦石標(biāo)本電性參數(shù)測量結(jié)果的可靠程度與測量采用方法、方式關(guān)系不大，主要取決于標(biāo)本的采集、加工及測量過程，據(jù)此，本人總結(jié)了以下幾點(diǎn)認(rèn)識：

2 結(jié)果

2.1 SOX4在骨肉瘤組織和細(xì)胞系中的表達(dá)

RT-PCR和Western blot結(jié)果顯示,人骨肉瘤細(xì)胞系Saos-2中SOX4的mRNA和蛋白表達(dá)水平顯著高于和人成骨細(xì)胞hFOB 1.19(分別升高了3.23±0.42倍和3.76±0.38倍,均P<0.001)。此外,骨肉瘤組織中SOX4存在較高比例的陽性表達(dá)(SOX4陽性細(xì)胞比例大于50%,見圖1)。SOX4的陽性表達(dá)與患者TNM分期和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移有關(guān),即高TNM分期或發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移患者的骨肉瘤組織中SOX4的陽性率更高。SOX4的陽性表達(dá)與年齡、性別和腫瘤大小無明顯相關(guān)性(見表1)。

與hFOB1.19細(xì)胞比較,*P<0.05

表1 骨肉瘤患者SOX4表達(dá)與臨床指標(biāo)的關(guān)系 (例)Table 1 Relationships between SOX4 expression and clinical parameters in patients with osteosarcoma (cases)

2.2 下調(diào)SOX4對骨肉瘤細(xì)胞增殖的影響

使用BioCoat Matrigel進(jìn)行細(xì)胞侵襲測定(美國BD Bioscience公司)。將1×105個細(xì)胞懸浮在無血清的DMEM上室中,下室為含有10% FBS的完整培養(yǎng)基。細(xì)胞在37 ℃孵育24 h,將細(xì)胞用0.5%結(jié)晶紫染色并在倒置顯微鏡下(×100)拍照。隨機(jī)選擇5個視野計算平均侵襲細(xì)胞數(shù)。

與NC-shRNA比較,*P<0.05

與NC-shRNA比較,*P<0.05

2.3 下調(diào)SOX4對骨肉瘤細(xì)胞凋亡的影響

結(jié)晶設(shè)備與蒸汽單元設(shè)備類似，在其單元后接閃蒸罐。固液分離后，所產(chǎn)生的結(jié)晶鹽含有大量的雜質(zhì)，其回收利用的成本高于普通工業(yè)鹽的生產(chǎn)成本。加大結(jié)晶單元的提純技術(shù)，若能實(shí)現(xiàn)多種結(jié)晶鹽的高純度分離，將成為燃煤電廠的第二經(jīng)濟(jì)增長點(diǎn)。

圖4 流式細(xì)胞術(shù)檢測下調(diào)SOX4對骨肉瘤細(xì)胞凋亡的影響Figure 4 Effect of down-regulating SOX4 on osteosarcoma cell apoptosis detected by flow cytometry

圖5 Western blot檢測下調(diào)SOX4對細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)的影響Figure 5 Effect of down-regulation of SOX4 on apoptosis-related protein expression by Western blot

2.4 下調(diào)SOX4對骨肉瘤細(xì)胞遷移和侵襲的影響

使用冰RIPA裂解液[中科瑞泰(北京)生物科技有限公司]對細(xì)胞進(jìn)行裂解。將細(xì)胞裂解液在4 ℃下于10 000 r/min離心15 min,收集上清液用于蛋白質(zhì)濃度測定。在10%SDS-PAGE凝膠上分離總蛋白,并轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜(美國Millipore公司)。將膜用5%脫脂牛奶封閉1 h,然后與一抗在4 ℃下孵育過夜。使用的一抗包括SOX4(1∶500稀釋,美國Santa Cruz公司)、Bax(1∶1 000稀釋,美國Cell Signaling Technology公司)、P53(1∶500稀釋,美國Santa Cruz公司)、Bcl-2(1∶1 500稀釋,英國Abcam公司)、MMP2(1∶1 000稀釋,美國Cell Signaling Technology公司)、MMP9(1∶1 000稀釋,美國Cell Signaling Technology公司)、Fibronectin 1(1∶3 000稀釋,英國Abcam公司)和GAPDH(1∶1 000稀釋,英國Abcam公司)。然后將膜在TBST溶液中洗滌3次,每次15 min,然后與辣根過氧化物酶標(biāo)記的二抗室溫孵育2 h(北京博奧森生物技術(shù)有限公司)。使用超敏ECL化學(xué)發(fā)光試劑盒(碧云天生物技術(shù)研究所)進(jìn)行顯影。GAPDH作為內(nèi)參。

與NC-shRNA比較,*P<0.05

本研究檢測了敲低SOX4對骨肉瘤細(xì)胞中腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白表達(dá)的影響,研究顯示,與NC-shRNA組相比,SOX4敲低組細(xì)胞中MMP2、MMP9和Fibronectin 1蛋白表達(dá)顯著降低(均P<0.001,見圖7),依次降低了67.13%±6.09%,83.04%±7.76%,71.79%±6.21%。

圖7 Western blot檢測下調(diào)SOX4對腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白表達(dá)的影響Figure 7 Effect of down-regulation of SOX4 on tumor metastasis-related protein expression by Western blot

2.5 下調(diào)SOX4對異種移植腫瘤模型小鼠腫瘤生成的影響

異種移植腫瘤模型實(shí)驗顯示,與接種對照細(xì)胞的小鼠相比,接種了SOX4敲低的細(xì)胞的小鼠腫瘤體積在生長21 d和28 d時顯著降低(P=0.012和P<0.001,見圖8),分別降低了49.33%±5.12%和50.21%±4.78%。

圖8 下調(diào)SOX4對異種移植腫瘤模型小鼠腫瘤體積的影響Figure 8 Effect of down-regulation of SOX4 on tumor volume in xenograft tumor model mice

3 討論

SOX4是一種具有多種生物學(xué)功能的轉(zhuǎn)錄因子,SOX4基因編碼474個氨基酸組成的蛋白質(zhì),也是一種單外顯子基因,大量研究證明SOX4在胚胎發(fā)育、細(xì)胞生長和分化中起重要作用[4-7]。近年來,SOX4基因在腫瘤發(fā)生中的作用越來越受到學(xué)者的重視。目前,有學(xué)者已經(jīng)在非小細(xì)胞肺癌、乳腺癌、膀胱癌、卵巢癌、結(jié)直腸癌、前列腺癌、血液系統(tǒng)惡性腫瘤等多種人類惡性腫瘤中發(fā)現(xiàn)了SOX4的異常表達(dá),并且SOX4的異常表達(dá)與腫瘤特性和患者預(yù)后明顯相關(guān),SOX4的高表達(dá)是患者不良預(yù)后的生物標(biāo)志物[13-16]。據(jù)報道,在胃癌組織中, SOX4表達(dá)與腫瘤細(xì)胞浸潤、血管浸潤、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移有關(guān)。生存分析表明,高表達(dá)SOX4的患者的無病生存期短于低表達(dá)的患者[17]。目前,尚未確定人骨肉瘤中SOX4表達(dá)水平的預(yù)后意義。本研究結(jié)果顯示,人骨肉瘤組織和細(xì)胞系中SOX4的表達(dá)水平顯著升高,并且SOX4的高表達(dá)與TNM分期和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移有關(guān),TNM分期越高或發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的患者的SOX4普遍高表達(dá)。上述結(jié)果說明,在成骨細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化過程中SOX4被上調(diào)并在骨肉瘤中發(fā)揮致癌作用,SOX4的異常上調(diào)可能促進(jìn)了骨肉瘤惡性表型。因此,SOX4可作為骨肉瘤判斷預(yù)后的潛在分子生物標(biāo)志物。

本研究通過轉(zhuǎn)染攜帶SOX4-shRNA的pGFP-V-RS病毒載體敲低了Saos-2細(xì)胞系中SOX4的mRNA和蛋白表達(dá)。進(jìn)一步研究顯示,敲低SOX4后顯著抑制了骨肉瘤細(xì)胞的增殖,并促進(jìn)了細(xì)胞凋亡。一些研究表明,SOX4主要通過抑制細(xì)胞凋亡來促進(jìn)腫瘤發(fā)生[18]。SOX4通過阻斷Mdm2介導(dǎo)的P53降解并促進(jìn)p300/CBP/P53復(fù)合物形成誘導(dǎo)凋亡,抑制腫瘤發(fā)生[19]。在肺癌細(xì)胞H1299中,SOX4通過增加PUMA表達(dá)并以非P53依賴性的方式誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡[20]。SOX4的抑制凋亡作用主要是通過Caspase-3依賴性途徑引起的[21]。Bcl-2家族成員在細(xì)胞凋亡過程中發(fā)揮非常重要的作用,該家族可分為兩大類,一類具有抗凋亡作用,包括Bcl-2、Bcl-XL等;另一類具有促凋亡作用,包括Bax、Bak等。Bax/Bcl-2的比例是決定細(xì)胞凋亡的關(guān)鍵因素。Bax基因編碼的Bax蛋白可與Bcl-2形成異二聚體,并抑制Bcl-2的功能。p53是一種腫瘤抑制基因,其在大多數(shù)惡性腫瘤中均存在基因突變。p53基因編碼的蛋白質(zhì)控制細(xì)胞周期的啟動,當(dāng)基因發(fā)生突變后,由于蛋白空間構(gòu)象的改變導(dǎo)致其失去了對細(xì)胞生長、凋亡和DNA修復(fù)的調(diào)控作用。此外,p53可以上調(diào)Bax的表達(dá)并下調(diào)Bcl-2的表達(dá)。本研究結(jié)果顯示,敲低SOX4顯著上調(diào)了促凋亡蛋白Bax和P53的蛋白表達(dá)水平,并下調(diào)了抗凋亡蛋白Bcl-2的蛋白表達(dá)水平。提示在骨肉瘤細(xì)胞中,SOX4對細(xì)胞凋亡的調(diào)控作用是通過Bax、P53和Bcl-2介導(dǎo)的。

圖6為傳感器系統(tǒng)紅外光源HSL5-115-S的驅(qū)動電路。單片機(jī)通過DAC轉(zhuǎn)換提供頻率為0.5 Hz,占空比為50%的脈沖方波,經(jīng)過LM358放大,用來控制低壓MOS場效應(yīng)管2N7002的通斷。

遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移一直是治療骨肉瘤的主要難題,其機(jī)制涉及腫瘤細(xì)胞的遷移、侵襲、上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化等過程[22,23]。多項研究發(fā)現(xiàn)高SOX4水平與腫瘤復(fù)發(fā)、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、侵襲性和血管生成之間存在相關(guān)性[24,25]。本研究結(jié)果顯示,敲低SOX4顯著抑制了骨肉瘤細(xì)胞的遷移和侵襲能力。MMP2、MMP9和Fibronectin 1均是與惡性腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)的基因。MMP-2 和MMP-9 是基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)家族的成員,也是目前為止發(fā)現(xiàn)的與腫瘤轉(zhuǎn)移最為密切的細(xì)胞外基質(zhì)降解酶[26]。MMP-9具有調(diào)節(jié)微循環(huán)和血管生成的作用,其可通過促進(jìn)血管內(nèi)皮生長因子VEGF的表達(dá)來促進(jìn)血管生成,從而導(dǎo)致惡性腫瘤的高轉(zhuǎn)移性。Fibronectin 1是一種廣泛存在于多種組織和細(xì)胞中的高分子糖蛋白,具有調(diào)控細(xì)胞遷移、黏附及組織修復(fù)的功能,Fibronectin 1可通過與多種整合素結(jié)合來增加腫瘤細(xì)胞的侵襲性[27]。本研究結(jié)果顯示,敲低SOX4顯著下調(diào)了骨肉瘤細(xì)胞中的MMP2、MMP9和Fibronectin 1蛋白表達(dá)。上述結(jié)果提示敲低SOX4對骨肉瘤腫瘤轉(zhuǎn)移的抑制作用可能通過MMP2、MMP9和Fibronectin 1來介導(dǎo)。

本研究通過體外異種移植腫瘤模型實(shí)驗證實(shí)了敲低SOX4對腫瘤生長的抑制作用?？傊?本研究表明SOX4在骨肉瘤患者中異常高表達(dá),并且與不良預(yù)后有關(guān)。抑制SOX4的表達(dá)可抑制腫瘤細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)移能力,并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。靶向抑制SOX4有望成為骨肉瘤治療的新療法。