黃芪總皂苷對(duì)運(yùn)動(dòng)性疲勞雄性大鼠生殖激素水平的調(diào)控

荊純祥，耿雪，焦?jié)櫵嚕w自明，潘華山，馮毅翀

（1.廣州中醫(yī)藥大學(xué)，廣東 廣州 51000；2.廣東省中醫(yī)藥工程技術(shù)研究院，廣東 廣州 510095；3.成都醫(yī)學(xué)院，四川 成都 610500）

0 引言

既往研究表明高強(qiáng)度超負(fù)荷的連續(xù)運(yùn)動(dòng)導(dǎo)致運(yùn)動(dòng)性疲勞，而疲勞如果不能及時(shí)消除，則會(huì)引起機(jī)體一系列的神經(jīng)內(nèi)分泌紊亂[1-2]。中藥黃芪能益氣固表，適用于內(nèi)傷勞倦、氣血虧虛，目前正廣泛應(yīng)用于運(yùn)動(dòng)性疲勞的防治中。本研究選用黃芪主要有效成分黃芪總皂苷對(duì)模型大鼠進(jìn)行灌胃治療，從血清生殖激素水平及其中樞調(diào)控的角度深入探討黃芪總皂苷對(duì)運(yùn)動(dòng)性疲勞雄性大鼠的影響。

1 材料與方法

1.1 藥品與試劑。黃芪總皂苷提取方法參考[3]，由廣東省中醫(yī)藥工程技術(shù)研究院提供。T、LH、FSH、GnRH、Glu 和GABA 試劑盒，均由南京建成生物工程研究所提供。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。36 只10 周齡雄性SPF 級(jí)SD 大鼠，體重（200 士20）g，由廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量合格證號(hào)：SCXK（粵）2008-0002。飼養(yǎng)于廣州中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心SPF 級(jí)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號(hào)：SYXK（粵）2008-0085。常規(guī)分籠喂養(yǎng)，自由飲水進(jìn)食，室內(nèi)溫度21℃-24℃，相對(duì)濕度40% -55%，空氣流通，光照時(shí)間l2h。

1.3 儀器。ZH-PT 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)跑臺(tái)，淮北正華生物儀器設(shè)備有限公司；3K30G 型SIGMA 超速冷凍離心機(jī)，SIGMA 公司；TDL-5-A 型低速離心機(jī)，上海金鵬分析儀器有限公司；Multiskan 352 型MS 酶標(biāo)儀，芬蘭LABSYSTEM 公司；JJ-1型組織勻漿機(jī)，深圳天南海北公司。

1.4 模型復(fù)制。動(dòng)物適應(yīng)性飼養(yǎng)2 天后，采用“坡度為0，速度為15m/min，跑臺(tái)20min 后，間隙40min，再跑臺(tái)20min，每天1 次，連續(xù)14 天”的中等運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度跑臺(tái)運(yùn)動(dòng)復(fù)制運(yùn)動(dòng)性疲勞模型大鼠。

1.5 分組與處理。36 只雄性SD 大鼠隨機(jī)分為正常組、模型組和給藥組（黃芪總皂苷）三組。給藥組以50 mg/kg 黃芪總皂苷灌胃，正常組和模型組以等量生理鹽水灌胃，每天1次。模型組和給藥組大鼠在灌胃1h 后進(jìn)行中等強(qiáng)度水平跑臺(tái)訓(xùn)練，每天1 次，連續(xù)14 天，正常組常規(guī)飼養(yǎng)。在末次跑臺(tái)運(yùn)動(dòng)后，戊巴比妥納（45 mg/kg）腹腔麻醉后，處死大鼠，斷頭取血2 mL，2000 rpm 離心5 min，分離血清置于-40°C冰箱貯存，用于血清T、LH、FSH 和GnRH 含量檢測(cè)。沿枕骨大孔與大鼠耳緣上連線處剪開(kāi)顱腔，取完整全腦，用4℃生理鹽水清洗，濾紙吸干，置于冰盤(pán)內(nèi)，參照大鼠腦立體定位圖譜，在冰面上迅速分離下丘腦，加0.1 mol/L 高氯酸，冰浴下制備腦組織勻漿，4℃，14000 g 離心20 min，取上清液，0.2μm 濾膜濾過(guò)，分裝，-80℃冷藏[4]，用于下丘腦GnRH、Glu 和GABA 含量檢測(cè)。

1.6 指標(biāo)檢測(cè)。采用放免法（RIA）檢測(cè)血清T、LH、FSH和GnRH 含量，嚴(yán)格按照試劑盒操作指示操作。采用酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）檢測(cè)下丘腦GnRH、Glu 和GABA 含量，嚴(yán)格按照試劑盒操作指示操作，最后在酶標(biāo)儀450 nm 處測(cè)得OD 值。

2 結(jié)果

2.1 黃芪總皂苷對(duì)運(yùn)動(dòng)性疲勞雄性大鼠血清T、LH 和FSH含量的影響。由表1 可知，與正常組比較，模型組大鼠血清T 含量顯著降低（P＜0.01）、FSH 含量顯著升高（P＜0.01）；與模型組比較，給藥組大鼠血清T 和LH 含量顯著升高（均有P＜0.01）、FSH 含量顯著降低（P＜0.01），見(jiàn)表1。

表1 對(duì)運(yùn)動(dòng)性疲勞雄性大鼠血清T、LH 和FSH 含量的影響

表1 對(duì)運(yùn)動(dòng)性疲勞雄性大鼠血清T、LH 和FSH 含量的影響

注：與正常組相比，＊P＜0.05，＊＊P＜0.01；與模型組相比，#P＜0.05，##P＜0.01。

分組 T (nmol/L) LH (IU/L) FSH(IU/L)正常組 2.42±1.20 3.53±0.45 4.09±0.53模型組 1.18±0.57＊＊ 3.68±0.40 5.14±0.48＊＊給藥組 2.03±0.71## 4.13±0.38## 3.92±0.48##

2.2 黃芪總皂苷對(duì)運(yùn)動(dòng)性疲勞雄性大鼠GnRH 含量的影響。由表2 可知，與正常組比較，模型組大鼠血清GnRH 含量顯著升高（P＜0.01）、下丘腦GnRH 含量顯著降低（P＜0.01）；與模型組比較，給藥組大鼠血清GnRH 含量顯著降低（P＜0.01）、下丘腦GnRH 含量顯著升高（P＜0.01）。

表2 對(duì)運(yùn)動(dòng)性疲勞雄性大鼠GnRH 含量的影響

表2 對(duì)運(yùn)動(dòng)性疲勞雄性大鼠GnRH 含量的影響

注：與正常組相比，＊P＜0.05，＊＊P＜0.01；與模型組相比，#P＜0.05，##P＜0.01。

分組 血清GnRH（pmol/L） 下丘腦GnRH（ng/ml）正常組 4.11±0.92 12.78±0.95模型組 5.93±0.89＊＊ 9.16±0.70＊＊給藥組 4.42±0.85## 11.83±0.59##

2.3 黃芪總皂苷對(duì)運(yùn)動(dòng)性疲勞雄性大鼠下丘腦Glu 和GABA含量的影響。由表3 可知，與正常組比較，模型組大鼠Glu含量顯著降低（P＜0.01）、GABA 含量顯著升高（P＜0.01）；與模型組比較，給藥組大鼠Glu 含量顯著升高（P＜0.01）、GABA 含量顯著顯著降低（P＜0.01）。

表3 對(duì)運(yùn)動(dòng)性疲勞雄性大鼠下丘腦Glu 和GABA 含量的影響

表3 對(duì)運(yùn)動(dòng)性疲勞雄性大鼠下丘腦Glu 和GABA 含量的影響

注：與正常組相比，＊P＜0.05，＊＊P＜0.01；與模型組相比，#P＜0.05，##P＜0.01。

分組 Glu（ng/ml） GABA（ng/ml）正常組 22.26±0.85 13.67±0.85模型組 15.47±0.71＊＊ 20.46±1.54＊＊給藥組 23.43±1.83## 15.32±1.24##

3 討論

現(xiàn)代研究表明，持續(xù)超負(fù)荷運(yùn)動(dòng)導(dǎo)致疲勞，而疲勞若不能及時(shí)恢復(fù)將導(dǎo)致生殖激素水平紊亂，其可能機(jī)制是持續(xù)超負(fù)荷運(yùn)動(dòng)中能量物質(zhì)的大量消耗影響HPG 軸（下丘腦-垂體-性腺軸）功能：① 在疲勞、過(guò)度訓(xùn)練狀態(tài)時(shí)，血清生殖激素水平發(fā)生改變，T 水平會(huì)下降，而LH 和FSH 變化不明顯或無(wú)反饋性上升，運(yùn)動(dòng)時(shí)骨骼肌對(duì)T 消耗增加以及HPG軸功能在多環(huán)節(jié)被抑制導(dǎo)致T 水平的明顯下降，而LH 和FSH 無(wú)反饋?zhàn)饔脛t是HPG 抑制GnRH 釋放；②GnRH 是下丘腦分泌的調(diào)控生殖系統(tǒng)功能的信號(hào)分子，運(yùn)動(dòng)性疲勞狀態(tài)下下丘腦抑制GnRH 的釋放，但新近研究表明消化道也能產(chǎn)生GnRH，所以外周GnRH 水平不能完全反映下丘腦GnRH的釋放水平；③興奮性氨基酸Glu 對(duì)神經(jīng)元具有興奮性調(diào)節(jié)作用，運(yùn)動(dòng)過(guò)程中Glu 在谷氨酸脫羧酶催化下生成GABA，GABA 具有抑制觸突傳導(dǎo)作用，GABA 含量升高是運(yùn)動(dòng)性疲勞出現(xiàn)中樞保護(hù)性抑制的重要因素。本研究通過(guò)每天進(jìn)行1次中等強(qiáng)度的水平跑臺(tái)運(yùn)動(dòng)復(fù)制出運(yùn)動(dòng)性疲勞大鼠模型，檢測(cè)發(fā)現(xiàn)模型大鼠血清T 含量、下丘腦GnRH 和Glu 含量顯著降低，血清FSH、GnRH 和下丘腦GABA 含量顯著升高，提示運(yùn)動(dòng)性疲勞狀態(tài)下存在HPG 軸功能抑制，外周生殖激素水平紊亂的情況。

在中醫(yī)典籍中雖然無(wú)“運(yùn)動(dòng)性疲勞”的明確論述，但與形體過(guò)用產(chǎn)生的疲勞及其相關(guān)病因病理的記載頗多，中醫(yī)認(rèn)為運(yùn)動(dòng)性疲勞屬于內(nèi)傷病范疇，是由于過(guò)度超負(fù)荷運(yùn)動(dòng)而產(chǎn)生的內(nèi)生“邪氣”，與機(jī)體抗疲勞的自穩(wěn)機(jī)制相互作用，結(jié)果正氣受損導(dǎo)致臟腑經(jīng)絡(luò)功能異常，氣血紊亂，陰陽(yáng)失調(diào)，導(dǎo)致機(jī)體對(duì)環(huán)境和運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練的適應(yīng)性降低，運(yùn)動(dòng)能力明顯下降。中藥黃芪具有補(bǔ)氣升陽(yáng)、利水消腫、生津養(yǎng)血、托毒生肌等功效，現(xiàn)代研究表明黃芪及其有效成分具有抗衰老、抗菌、抗病毒、抗癌，調(diào)節(jié)機(jī)體免疫，調(diào)節(jié)血糖、改善血液流變學(xué)、保護(hù)泌尿系統(tǒng)、也血管系統(tǒng)等藥理作用。本研究選擇黃芪有效成分黃芪總皂苷對(duì)運(yùn)動(dòng)性疲勞雄性大鼠進(jìn)行灌胃，灌胃量為50 mL/kg，給藥大鼠血清T 和LH 含量、下丘腦GnRH和Glu 含量顯著升高，血清FSH、GnRH 和下丘腦GABA含量顯著降低。研究提示，黃芪總皂苷通過(guò)糾正中樞Glu 和GABA 代謝失衡的情況，改善HPG 軸抑制狀態(tài)，從而調(diào)節(jié)運(yùn)動(dòng)性疲勞狀態(tài)下外周生殖激素水平紊亂的情況，對(duì)機(jī)體生殖系統(tǒng)起到保護(hù)作用。