NRG1促進(jìn)Wharton’sjelly間充質(zhì)干細(xì)胞表達(dá)VEGF

趙永成 于薇 任可馨 付微 梁軍

【摘要】目的 探討NRG1可否促進(jìn)Whartons jelly間充質(zhì)干細(xì)胞表達(dá)VEGF。方法 提取人臍帶Whartons jelly間充質(zhì)干細(xì)胞;細(xì)胞分未轉(zhuǎn)染組和轉(zhuǎn)染組;NRG1轉(zhuǎn)染三天后，ELISA方法檢測(cè)上清液中VEGF的含量，免疫熒光方法檢測(cè)細(xì)胞中VEGF的表達(dá)。結(jié)果 轉(zhuǎn)染組上清液中VEGF的含量和免疫熒光陽(yáng)性率與未轉(zhuǎn)染組的比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論 NRG1可促進(jìn)Whartons jelly間充質(zhì)干細(xì)胞表達(dá)VEGF。

【關(guān)鍵詞】Whartons jelly間充質(zhì)干細(xì)胞;神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白1;血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子

【中圖分類(lèi)號(hào)】R329 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】A 【文章編號(hào)】ISSN.2095.6681.2020.9..02

臍帶Whartons jelly間充質(zhì)干細(xì)胞（Whartons jelly mesenchymal stem cells，WJMSCs）被認(rèn)為是理想的干細(xì)胞源[1]。但移植的細(xì)胞存在存活率低的問(wèn)題。神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白1（neuregulin-1，NRG-1）屬于生長(zhǎng)和分化因子家族，可參與血管新生[2]。在體外，BMP4可否通過(guò)上調(diào)WJMSCs表達(dá)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（Vascular endothelial growth factor，VEGF），進(jìn)而促進(jìn)血管新生改善細(xì)胞生存環(huán)境，未查見(jiàn)相關(guān)報(bào)道。

1 材料與方法

1.1? 材料

人臍帶（牡丹江紅旗醫(yī)院）;FBS、DMEM培養(yǎng)基（Hyclone）;NRG-1質(zhì)粒（牡丹江醫(yī)學(xué)院干細(xì)胞研究所）;ELISA試劑盒（Takara）;VEGF抗體（Sigma）。

1.2? 方法

1.2.1 細(xì)胞提取

取剖腹產(chǎn)臍帶，剪成直徑約0.3 cm的組織塊，用10% FBS-DMEM培養(yǎng)液培養(yǎng)組織塊;每2 d換液一次;細(xì)胞融合至90%時(shí)傳代。

1.2.2 實(shí)驗(yàn)分組

實(shí)驗(yàn)分為轉(zhuǎn)染組和未轉(zhuǎn)染組。

1.2.3 細(xì)胞轉(zhuǎn)染

取第三代細(xì)胞，按Lipofectamine TM 2000說(shuō)明書(shū)把VEGF質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細(xì)胞。細(xì)胞轉(zhuǎn)染3天后，進(jìn)行VEGF檢測(cè)。

1.2.4 ELISA檢測(cè)

按ELISA試劑盒說(shuō)明書(shū)檢測(cè)上清液中VEGF的含量。用酶標(biāo)儀在450 nm波長(zhǎng)下檢測(cè)樣本OD值。

1.2.5 免疫熒光檢測(cè)

4%多聚甲醛固定15 min后1%牛血清白蛋白封閉25 min;VEGF抗體孵育100 min;二抗孵育50 min;DAPI復(fù)染15 min。陽(yáng)性率=紅色熒光數(shù)/藍(lán)色熒光數(shù)×100%。

1.3? 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

統(tǒng)計(jì)分析采用SPSS 13.0軟件，計(jì)量數(shù)據(jù)以x±s表示，組間比較采用單因素方差，差異顯著的判斷標(biāo)準(zhǔn)為P<0.05。

2 結(jié) 果

2.1? ELISA檢測(cè)結(jié)果

如表1所示，轉(zhuǎn)染組上清液VEGF的含量與對(duì)照組的比較，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.2? 免疫熒光檢測(cè)結(jié)果

陽(yáng)性細(xì)胞的胞質(zhì)和突起呈紅色熒光;經(jīng)非特異性染色的細(xì)胞核呈藍(lán)色熒光（圖1）。轉(zhuǎn)染組的陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)率與對(duì)照組的比較，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（表2）。

3 討 論

NRG1可促進(jìn)多種細(xì)胞表達(dá)VEGF。NRG1可使發(fā)育的心肌增強(qiáng)VEGF的表達(dá) [3];還能增加VEGF在人冠狀動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞中的表達(dá)[4]。在病理情況下，結(jié)腸癌患者的活檢標(biāo)本中，NRG1與VEGF表達(dá)呈正相關(guān)[5]。本研究發(fā)現(xiàn)，NRG1可促進(jìn)WJMSCs表達(dá)VEGF。這些研究結(jié)果表明，NRG1可調(diào)控VEGF的表達(dá)，進(jìn)而參與增生、抗凋亡和血管新生等多種生物學(xué)過(guò)程。

NRG1的配體是酪氨酸激酶（Erythroblastic leukemia viral oncogene homologs，ErbB）受體。NRG1∕ErbB信號(hào)不僅通過(guò)促VEGF表達(dá)途徑[5]，還可通過(guò)直接作用血管內(nèi)皮[2]和血管平滑肌[6]途徑促進(jìn)血管新生。

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作者簡(jiǎn)介：趙永成（1984年-），男，牡丹江醫(yī)學(xué)院在讀碩士，研究方向：干細(xì)胞分化機(jī)制及臨床應(yīng)用的實(shí)驗(yàn)研究

通訊作者：梁 軍（1972年-），男，博士，教授，牡丹江干細(xì)胞研究所所長(zhǎng)，

研究方向：干細(xì)胞分化機(jī)制及臨床應(yīng)用的實(shí)驗(yàn)研究