瑞香狼毒化學(xué)成分抑制PC-12細(xì)胞神經(jīng)突起生長活性研究

肖淇文，田均勉

(西北農(nóng)林科技大學(xué) 化學(xué)與藥學(xué)院，陜西楊凌 712100)

瑞香狼毒(StellerachamaejasmeL.)為瑞香科植物，又名斷腸草，用藥部位為其根，廣泛分布于中國西北、西南、東北及河北等地，資源十分豐富[1]。其性味苦平，有逐水祛痰、破積殺蟲之功效, 其根已被用于中藥作為乳液和皮膚病藥物[2]。近年來國內(nèi)外對其化學(xué)成分的研究報道較多，該植物主要含有雙黃酮、木脂素、香豆素、二萜等成分，具有抗菌、抗結(jié)核、抗腫瘤及抗病毒尤其是抗HIV的活性[3-6]。

神經(jīng)生長因子(NGF)是第一個被發(fā)現(xiàn)且目前研究得最為透徹的神經(jīng)營養(yǎng)因子，在神經(jīng)元的生長發(fā)育、軸突的生長、遞質(zhì)的合成及細(xì)胞的凋亡等階段起著重要作用，是人和動物體內(nèi)必不可少的多功能因子[7]。PC-12細(xì)胞，也稱為大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞，可以與NGF結(jié)合發(fā)生神經(jīng)元樣分化,可作為一個細(xì)胞模型用于神經(jīng)生物學(xué)和神經(jīng)化學(xué)的研究[8]。NGF在PC-12細(xì)胞的膜上有TrkA和p75兩類受體，NGF與TrkA受體結(jié)合后，激活了細(xì)胞內(nèi)的多條信號通路，誘導(dǎo)PC-12細(xì)胞的神經(jīng)突起生長[9]。同時大量臨床前證據(jù)表明，阻斷NGF與 TrkA的作用可以減輕疼痛和痛覺過敏；動物模型試驗已證實，使用抗NGF抗體或非選擇性小分子TrkA抑制劑阻斷NGF-TrkA信號可抑制疼痛[10-11]。目前尚未有瑞香狼毒中神經(jīng)突起生長活性研究，為此本研究以湖北恩施瑞香狼毒為試驗材料，提取可能具有活性的化合物，以期找到活性優(yōu)良的藥物先導(dǎo)化合物。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

所用瑞香狼毒于2012年8月采于湖北恩施，并由西北農(nóng)林科技大學(xué)吳振海高級實驗師鑒定為瑞香狼毒StellerachamaejasmeL.。標(biāo)本(20120820SC)保存于西北農(nóng)林科技大學(xué)陜西省天然產(chǎn)物化學(xué)生物學(xué)重點實驗室。Bruker AVANCE-500核磁共振儀(TMS為內(nèi)標(biāo))；ESI-MS采用Thermo Fisher LTQ Fleet；HPLC(QuikSep P0050，慧德易)，GF254薄層層析硅膠板、柱層析硅膠(100～200目、300～400目)及薄層層析硅膠H為青島康鼎公司生產(chǎn)。反相硅膠PR-C18(YMC公司產(chǎn)品，日本)；凝膠為GE生產(chǎn)；石油醚、氯仿、乙酸乙酯、丙酮、甲醇等有機(jī)溶劑均為分析純，天津試劑廠生產(chǎn)。PC-12 細(xì)胞(未分化)購自中國科學(xué)院典型培養(yǎng)物保藏委員會細(xì)胞庫/中國科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院細(xì)胞資源中心。注射用鼠神經(jīng)生長因子(NGF)購自武漢海特生物制藥股份有限公司。

1.2 試驗方法

干燥瑞香狼毒根50 kg，粉碎后以95%工業(yè)乙醇回流提取，濃縮回收乙醇得總浸膏。對浸膏依次以石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取，分成石油醚、乙酸乙酯、正丁醇和水相等四個部分。

將乙酸乙酯萃取部位3.2 kg用硅膠(100～200目)拌樣進(jìn)行柱色譜分離，用石油醚-乙酸乙酯梯度洗脫(9∶1、8∶2、7∶3、6∶4、5∶5、 4∶6、0∶10；每個梯度50 L)，最后用甲醇(50 L)洗脫，經(jīng)薄層色譜(TLC)分析，合并相同組分得Eu-1～Eu-10，然后將其中的Eu-8(800 g)繼續(xù)用硅膠(100～200目)拌樣進(jìn)行柱色譜分離，用石油醚-乙酸乙酯(9∶1、8∶2、7∶3、6∶4、5∶5、 4∶6、 0∶10)梯度洗脫，經(jīng)TLC檢測，合并相同部分得到Eu-8-1～Eu-8-5。Eu-8-4(418 g)繼續(xù)經(jīng)硅膠柱層析分離，共分為7段，另命名為RL1～RL7。將RL4(315.8 g)經(jīng)中壓正相硅膠柱色譜分離得到RL4B1～RL4B18。RL4B2(1.457 g)經(jīng)正相硅膠和凝膠分離，得到化合物(4)(700 mg)。RL4B5(2.198 g)反相硅膠柱色譜，甲醇-水 (1∶10- 1∶0)分離后得到(6)(79 mg)和化合物(7) (6 mg)。RL4B6(1.260 g)經(jīng)過正相硅膠和凝膠柱(氯仿-甲醇1∶1)純化后得到化合物(8)(351 mg)。RL4B7(430 mg)和RL4B8(2.574 g)合并后再次經(jīng)過硅膠柱層析后得到化合物(5) (7 mg)和化合物(1)(10 mg)。RL4B9(131 mg)由甲醇溶解后，經(jīng)過半制備HPLC(色譜柱：YMC-Pack ODS-A，250×10 mm，5 μm，12 nm；溶劑：70%甲醇-水，流量：3 mL/min)純化得到化合物(2)(20 mg, tR=14 min)和化合物(3)(23 mg, tR=21 min)。將Eu-6(70 g)重新用硅膠(100～200目)拌樣進(jìn)行色譜分離，用石油醚-乙酸乙酯 (9∶1、 8∶2、7∶3、6∶4、5∶5、4∶6、 0∶10)梯度洗脫，經(jīng)TLC檢測，合并相同部分得到F1～6，將其中的F6(10.9 g)經(jīng)過正相硅膠和凝膠(氯仿-甲醇 1∶1)純化后得到F6C1～3，將F6C2(216 mg)再次使用凝膠柱(甲醇)分離后得到化合物(1)(27.1 mg)。

1.3 NGF介導(dǎo)促神經(jīng)突起生長活性測定

NGF用PBS(磷酸緩沖液pH 7.2～7.4)溶解，配成NGF原液(20 μg/mL)。待測化合物用DMSO溶解，配成化合物原液(50 mmol/L)。PC-12細(xì)胞在F-12完全培養(yǎng)基(10% HS和5% FBS)中生長72 h，之后將PC-12 細(xì)胞在24孔板培養(yǎng)24 h待細(xì)胞貼壁后，換用新鮮的F-12低血清培養(yǎng)基。NGF原液用PBS稀釋至終質(zhì)量濃度為 20 ng/mL，待測化合物原液用低血清培養(yǎng)基稀釋(化合物1～4終濃度為：25 μmol/L)，并分別加入24孔板中?；衔镒饔?2 h后，在倒置顯微鏡下觀察PC-12細(xì)胞的形態(tài)變化。將含一個或多個神經(jīng)突起，并且至少有一個神經(jīng)突起的長度達(dá)到胞體直徑1倍的細(xì)胞視為陽性細(xì)胞，選取多個隨機(jī)視野進(jìn)行細(xì)胞計數(shù)，每個隨機(jī)視野中至少有100個細(xì)胞，試驗重復(fù)3次。細(xì)胞分化率計算公式：細(xì)胞分化率=有效細(xì)胞數(shù)/總細(xì)胞數(shù)。

2 結(jié)果與分析

2.1 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物(1)為白色無定形粉末，易溶于甲醇溶劑，有紫外吸收。ESI-MS給出分子離子峰為m/z689.2 [M+Na]+，C37H46O11。1H NMR(CD3OD, 500 MHz): δH0.81(m, H, H-8′), 0.93(d, 3H,J=6.3 Hz, H-10′), 0.99(d, 1H,J=4.7 Hz, H-9′), 1.07(m, 1H, H-7′), 1.13(m, 1H, H-5′), 1.15(m, 1H, H-4′), 1.23(d, 1H,J=13.6 Hz, H-6′), 1.47(m, 1H, H-6′), 1.48(m, 1H, H-7′), 1.49(m, 1H, 1.49, H-3′), 1.50(m, 1H, H-5′), 1.61(m, 3H, H-19), 1.69(m, 1H, H-4′), 1.74(s, 4H, H-17,3′), 1.85(m, 1H, H-2′), 2.04(m, 1H, H-2′), 2.16(m, 2H, H-12), 2.21(m, 1H, H-11), 2.31(m, 1H, H-8′), 2.64(dd, 1H,J=9.9, 3.6 Hz, H-1), 2.83(d, 1H,J=3.8 Hz, H-10), 3.24(m, 1H, H-8), 3.40(s, 1H, H-7), 3.68(d, 1H,J=12.6 Hz, H-20), 3.86(d, 1H,J= 12.9 Hz,H-20), 4.37(m, 2H, H-14,18), 4.53(s, 1H, H-5), 4.85(s, 1H, H-16), 4.91(d, 1H,J=12.3 Hz, H-18), 4.99(s, 1H, H-16), 7.51(m, 2H, H-Bz-3′,5′), 7.63(m, 1H, H-Bz-4′), 7.98(d, 2H,J=8.2 Hz, H-Bz-2′,6′) ppm。13C NMR(125 MHz): δC19.3(C-17), 20.1(C-19), 20.2(C-10′), 23.6(C-3′), 25.4(C-4′), 26.2(C-5′), 28.0(C-6′), 28.2(C-7′), 32.6(C-2′), 34.2(C-12), 34.7(C-8′), 36.2(C-8), 39.2(C-9′), 44.3(C-11), 55.9(C-1), 56.2(C-10), 59.3(C-7), 61.6(C-6), 62.5(C-20), 69.5(C-5), 71.4(C-18), 81.9(C-9), 82.3(C-14), 85.2(C-13), 88.6(C-4), 111.8(C-2), 113.2(C-16), 121.5(C-1′), 129.9(Bz-3′,5′), 130.6(Bz-2′,6′), 131.4(Bz-1′), 134.6(Bz-4′), 147.6(C-15), 168.1(Bz-CO), 176.6(C-3) ppm。通過和文獻(xiàn)[12]報道的數(shù)據(jù)比對，確定該化合物為Stelleralide C(圖1-1)。

化合物(2)為淡紅色粉末，易溶于甲醇溶劑，有紫外吸收。ESI-MS給出分子離子峰為m/z1107 [2M+Na]+，C30H22O10。1H NMR(CD3OD, 500 MHz): δH4.61(d, 1H,J= 12.0 Hz, H-11), 5.72(s, 2H, H-16, 18), 6.10(d, 1H,J=1.9 Hz, H-6), 6.20(d, 1H,J=1.9 Hz, H-8), 6.33(d, 1H,J=12.0 Hz, H-12), 6.54(d, 2H,J=8.5 Hz, H-22, 24), 6.60(d, 2H,J=8.5 Hz, H-28, 30), 7.02(d, 2H,J=8.5 Hz, H-21, 25), 7.16(d, 2H,J=8.5 Hz, H-27, 31), 7.96(s, 1H, H-2)。13C NMR(125 MHz): δC49.7(C-11), 54.9(C-12), 94.7(C-8), 96.1(C-16, 18), 100.0(C-6), 105.8(C-10), 106.6(C-14), 115.9(C-28, 30), 116.0(C-22, 24), 122.4(C-3), 130.1(C-21, 25), 131.1(C-27, 31), 135.4(C-26), 136.2(C-20), 156.6(C-23, 29), 156.7(C-2), 159.3(C-9), 163.5(C-5), 165.5(C-17), 165.7(C-15, 19), 166.4(C-7), 181.7(C-4), 204.9(C-13)。其核磁數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[13]報道的狼毒色原酮(Chamaechromone)的核磁數(shù)據(jù)基本一致，故確定該化合物為狼毒色原酮(圖1-2)。

化合物(3)為黃色粉末，易溶于甲醇溶劑，有紫外吸收。ESI-MS給出分子離子峰為m/z1107 [2M+Na]+，C30H22O10。1H NMR(CD3OD, 500 MHz):δH3.14(m, 1H, H-3), 3.27(dd, 1H,J=8.8, 3.5 Hz, H-3′), 5.14(d, 1H,J=8.8 Hz, H-2″), 5.55(d, 1H,J=4.7 Hz, H-2), 5.76(d, 1H,J=2.2 Hz, H-6), 5.78(d, 1H,J=2.2 Hz, H-6″), 5.87(d, 1H,J=2.2 Hz, H-8), 5.98(d, 1H,J=2.2 Hz, H-8″), 6.65(d, 2H,J=8.5 Hz, H-3′, 5′), 6.79(d, 2H,J=8.5 Hz, H-3″′, 5″′), 6.93(d, 2H,J=8.5 Hz, H-2′, 6′), 7.15(d, 2H,J=8.5 Hz, H-2″′, 6″′)。13C NMR(CD3OD, 125 MHz):δC50.0(C-3), 50.9(C-3″), 81.6(C-2), 83.4(C-2″), 96.2(C-8), 96.5(C-8″), 97.2(C-6), 97.4(C-6″), 103.9(C-10), 105.2(C-10″), 116.3(C-3′, 5′), 116.5(C-3″′, 5″′), 128.6(C-2′, 6′), 128.9(C-1′), 129.2(C-1″′), 130.4(C-2″′, 6″′), 158.7(C-4′), 159.1(C-4″′), 163.5(C-9), 165.3(C-5, 9″), 165.6(C-5″), 168.4(C-7), 168.6(C-7″), 196.4(C-4), 198.7(C-4″)。通過和文獻(xiàn)[14]報道的數(shù)據(jù)比對，確定該化合物為新狼毒素B(Neochamaejasmin B)(圖1-3)。

化合物(4)為黃色粉末，易溶于甲醇溶劑，有紫外吸收。ESI-MS 給出分子離子峰為m/z565 [M+Na]+，C30H22O10。1H NMR(CD3OD, 500 MHz):δH3.76(m, 2H, H-3, 3″), 4.79(m, 2H, H-2, 2″), 5.75(s, 2H, H-6, 6″), 5.89(s, 2H, H-8, 8″), 6.80(d, 4H,J=8.5 Hz, H-3′, 5′, 3″′, 5″′), 7.02(d, 4H,J=8.5 Hz, H-2′, 6′, 2″′, 6″′)。13C NMR(CD3OD, 125 MHz): δC51.4(C-3, 3″), 82.6(C-2, 2″), 96.3(C-8, 8″), 97.5(C-6, 6″), 102.9(C-10, 10″), 116.7(C-3′, 5′, 3″′, 5″′), 129.1(C-1, 1″′), 130.9(C-2′, 6′, 2″′, 6″′), 159.9(C-4′, 4″′), 164.5(C-9, 9″), 165.6(C-5, 5″), 168.5(C-7, 7″), 197.0(C-4, 4″)。通過和文獻(xiàn)[15]報道的數(shù)據(jù)對比，最終確定該化合物為異新狼毒素A(Isoneochamaejasmin A)(圖1-4)。

化合物(5)為白色固體，易溶于氯仿溶劑，難溶于石油醚等低極性有機(jī)溶劑，有紫外吸收。ESI-MS中出現(xiàn)m/z275 [M+H]+，C15H14O5。1H-NMR(CDCl3, 500 MHz) :δH2.57(1H, dd,J=16.2, 8.2 Hz, H-4), 2.92(1H, dd,J=16.2, 5.5 Hz, H-4), 4.03(1H, m, , H-3), 4.64(1H, d,J=7.9 Hz, H-2), 5.95(1H, d,J=2.2 Hz, H-6), 6.01(1H, d,J=2.2 Hz, H-8), 6.81(1H, d,J=8.5 Hz, H-3′, 5′), 7.23(1H, d,J=8.5 Hz, H-2′, 6′)。13C-NMR(CDCl3, 125 MHz):δC28.6(C-4), 68.7(C-3), 82.6(C-2), 95.7(C-6), 96.5(C-8), 101.1(C-10), 116.1(C-3′, 5′), 129.6(C-2′, 6′), 131.3(C-1′), 156.8(C-9), 157.3(C-5), 157.5(C-7), 158(C-4′)。其光譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[16]中枇杷素的光譜數(shù)據(jù)對照基本一致，故鑒定為枇杷素(Afzelechin)(圖1-5)經(jīng)過查閱文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)為首次從該植物中分到。

化合物(6)為黃色針晶，能夠溶于甲醇，有紫外吸收。ESI-MS給出分子離子峰為m/z287 [M+H]+，C15H10O6。1H NMR(CD3OD, 500 MHz): δH6.19(m, 1H, H-6), 6.40(m, 1H, H-8), 6.91(d, 2H,J=6.0 Hz, H-3′, 5′), 8.08(d, 2H,J=6.0 Hz, H-2′, 6′)。13C NMR(CD3OD, 125 MHz): δC94.7(C-8), 99.5(C-6), 104.7(C-10), 116.5(C-3′, 5′), 123.9(C-1′), 130.8(C-2′, 6′), 137.3(C-3), 148.3(C-2), 158.4(C-5), 160.6(C-4′), 162.6(C-9), 165.7(C-7), 177.6(C-4)以上數(shù)據(jù)和文獻(xiàn)[17]一致，鑒定該化合物為山萘酚(kaempferol) (圖1-6)。

化合物(7)為白色結(jié)晶，能夠溶于甲醇、氯仿-甲醇混合溶劑，有紫外吸收。ESI-MS中出現(xiàn)了m/z743 [2M+Na]+，C20H24O6。1H NMR(CD3OD, 500 MHz): δH1.77(m, 1H, H-8′), 2.00(m, 1H, H-8), 2.77(d, 2H,J=7.6 Hz, H-7), 3.40(dd, 1H,J=11.3, 4.1Hz, H-9′), 3.66(m, 1H, H-9), 3.67(m, 1H, H-9), 3.70(dd, 1H,J=11.3, 4.1 Hz, H-9′) 3.76(s, 3H, 3-OMe), 3.78(s, 3H, 3′-OMe), 3.80(s, 1H, H-7′), 6.20(s, 1H, H-5), 6.61(dd, 1H,J=8.2, 1.3 Hz, H-6′), 6.64(s, 1H, H-2), 6.68(d, 1H,J=1.6 Hz, H-2′), 6.74(d, 1H,J=7.9 Hz, H-5)。13C NMR(CD3OD,125 MHz): δC33.7(C-7), 40.2(C-8), 48.1(C-7′), 48.2(C-8′), 56.5(3-OMe), 56.6(3′-OMe), 62.5(C-9′), 66.1(C-9), 112.6(C-2), 114.0(C-2′), 116.2(C-5′), 117.5(C-5), 123.3(C-6′), 129.2(C-1), 134.3(C-6), 138.7(C-1′), 145.3(C-4), 146.0(C-4′), 147.3(C-3), 149.1(C-3′)。通過對比文獻(xiàn)[18]數(shù)據(jù)，發(fā)現(xiàn)該化合物的核磁數(shù)據(jù)和異落葉松脂醇完全相同，因此該化合物結(jié)構(gòu)被確定為異落葉松脂醇(Isolariciresinol)(圖1-7)經(jīng)過查閱文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)為首次從該植物中分到。

圖1 化合物1～9的化學(xué)結(jié)構(gòu)Fig.1 Chemical structure of compounds 1-9

化合物(8)為白色晶體，能夠溶于甲醇、氯仿-甲醇混合溶劑，有紫外吸收。ESI-MS中出現(xiàn)了m/z743 [2M+Na]+，C20H24O6。1H NMR(CD3OD, 500 MHz): δH2.38(m, 1H, H-8), 2.50(dd, 1H,J=13.5, 11.5 Hz, H-7′), 2.73(m, 1H, H-8′), 2.93(dd, 1H,J=13.5, 4.7 Hz, H-7′), 3.64(dd, 1H,J=11.0, 6.3 Hz, H-9), 3.72(dd, 1H,J=8.4, 6.1 Hz, H-9′), 3.83(dd, 1H,J=11.0, 6.3 Hz, H-9), 3.83(s, 3H, 3-OMe), 3.84(s, 3H, 3′-OMe), 3.98(dd, 1H,J=8.4, 6.8 Hz, H-9′), 4.75(d, 1H,J=6.9 Hz, H-7), 6.64(dd, 1H, H-6′), 6.72(d, 1H, H-5′), 6.77(s, 2H, H-5, 6), 6.80(d, 1H,J=1.3 Hz, H-2′), 6.91(s, 1H, H-2)。13C NMR(CD3OD, 125 MHz): δC33.8(C-7′), 44.0(C-8′), 54.2(C-8), 56.6(3,3′-OMe), 60.7(C-9), 73.7(C-9′), 84.3(C-7), 111.0(C-2), 113.7(C-2′), 116.2(C-5), 116.4(C-5′), 120.0(C-6), 122.4(C-6′), 133.7(C-1′), 136.0(C-1), 146.0(C-4), 147.2(C-3), 149.2(C-3′,4′) ppm, 與文獻(xiàn)[19]對照，確定該化合物為(-)-落葉松樹脂醇((-)-lariciresinol)(圖1-8)經(jīng)過查閱文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)該化合物為首次從該植物中分到。

化合物(9)為無色結(jié)晶，能夠溶于甲醇、氯仿-甲醇混合溶劑，有紫外吸收。ESI-MS中出現(xiàn)了m/z441 [M+Na]+，C22H26O8。1H NMR(CD3OD, 500 MHz): δH3.04(m, 2H, H-8, 8′), 3.76(s, 12H, 3,3′, 5, 5′-OMe), 3.85(dd, 2H,J=9.0, 2.5 Hz, H-9, 9′), 4.22(dd, 2H,J=9.0, 6.8 Hz, H-9, 9′), 4.67(d, 2H,J= 3.8 Hz, H-7, 7′), 6.53(s, 4H, H-2, 2′, 6, 6′)。13C NMR(CD3OD, 125 MHz): δC53.8(C-8, 8′), 55.8(-OMe×4), 71.3(C-9, 9′), 85.5(C-7, 7′), 102.4(C-2, 2′, 6, 6′), 131.5(C-1, 1′), 133.9(C-4, 4′), 146.8(C-3, 3′, 5, 5′)，通過與文獻(xiàn)[20]核磁數(shù)據(jù)進(jìn)行對照，該化合物的結(jié)構(gòu)被確定為消旋丁香脂素((-)-syringaresinol)(圖1-9)。

2.2 NGF誘導(dǎo)神經(jīng)突起生長活性測定結(jié)果

測定化合物1～4的NGF誘導(dǎo)神經(jīng)突起生長活性測定結(jié)果(圖2，圖3)，與空白對照0.1%DMSO(2.5%)和 20 ng/mL的NGF 對照 (16.29%)相比，化合物1～4(25 mmol/L)與 NGF(20 ng/mL)共同作用于PC-12細(xì)胞72 h后，其細(xì)胞分化率降低，分別為10.87%(化合物2)、 7.67%(化合物3)、10.47%(化合物4)。經(jīng)PC-12的MTT細(xì)胞毒活性試驗發(fā)現(xiàn)，化合物 1～9均沒有細(xì)胞毒活性，且化合物2～4促進(jìn)了細(xì)胞活力。所以化合物2～4(25 μmol/L)表現(xiàn)為明顯的抑制NGF依賴的神經(jīng)突起生長活性(P<0.05)。而化合物1(25 μmol/L)對 PC-12 細(xì)胞表現(xiàn)出強(qiáng)烈的NGF介導(dǎo)的細(xì)胞毒活性。

DMSO(0.1%)為陰性對照，NGF(20 ng/mL)為陽性對照

3 結(jié) 論

本研究從瑞香狼毒乙酸乙酯提取物中分離得到9個化合物，分別鑒定為Stelleralide C(1)，狼毒色原酮(2)，新狼毒素B(3)，異新狼毒素A(4)，枇杷素(5)，山萘酚(6)，異落葉松樹脂醇(7)，(-)-落葉松樹脂醇(8)，消旋丁香脂素(9)?；衔?、7和8為首次從該植物中分離得到。NGF誘導(dǎo)神經(jīng)突起生長活性測定表明化合物2～4 具有抑制NGF介導(dǎo)的神經(jīng)突起生長活性，化合物1對PC-12 細(xì)胞表現(xiàn)出顯著的NGF介導(dǎo)的細(xì)胞毒 活性。

陰性對照為0.1 %的DMSO，陽性對照為20 ng/mL的 NGF。與NGF對照相比，*表示差異顯著，P<0.05(單因素方差分析ANOVA)

DMSO(0.1 %DMSO) served as a negative control, NGF (20 ng/mL) served as a positive control. *P<0.05 represent significant differences compared with NGF control (ANOVA)

圖3 化合物2～4(25 μmol/L)與 NGF共同作用于PC-12
細(xì)胞后對其神經(jīng)突起生長的影響
Fig.3 Effects of compound 2～4(25 μmol/L) on neurite
out growth in NGF-induced PC-12 cells

4 討 論

本研究從瑞香狼毒中分離出二萜原酸酯、黃酮類和木脂素類化合物，并進(jìn)行神經(jīng)突起生長活性測試。根據(jù)PC-12的MTT細(xì)胞毒活性試驗發(fā)現(xiàn)，化合物2、3、4均促進(jìn)了PC12細(xì)胞的活力，而根據(jù)神經(jīng)保護(hù)試驗發(fā)現(xiàn)，化合物2、3、4作用下的的PC12細(xì)胞神經(jīng)突觸均比NGF對照要長，經(jīng)查閱文獻(xiàn)，未發(fā)現(xiàn)有關(guān)現(xiàn)象的報道。