石韋提取物抗氧化及抑制亞硝化作用研究

莊遠(yuǎn)杯，凌梅娣，詹佳虹，李榕娣，張 超，魏愛(ài)紅，張聲源*

1嘉應(yīng)學(xué)院醫(yī)學(xué)院；2嘉應(yīng)學(xué)院醫(yī)學(xué)院客家藥用生物資源研究所，梅州 514031

自由基的化學(xué)性質(zhì)活潑，可攻擊細(xì)胞內(nèi)DNA、蛋白質(zhì)、脂質(zhì)等多種生物分子，導(dǎo)致細(xì)胞膜、遺傳因子嚴(yán)重?fù)p傷，進(jìn)而誘發(fā)癌變、糖尿病、動(dòng)脈粥樣硬化等疾病[1-2]。天然抗氧化劑廣泛存在于果蔬和藥用植物中，能夠保護(hù)機(jī)體免受自由基誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激損傷，相對(duì)于合成的抗氧化劑，如丁基羥基茴香醚(BHA)、二丁基羥基甲苯(BHT)及叔丁基對(duì)苯二酚(TBHQ)，具有安全、低毒等特點(diǎn)。亞硝胺的前體物質(zhì)，如亞硝酸鹽和胺類(lèi)，廣泛存在于腌制食物中，兩者在胃液酸性條件下極易發(fā)生亞硝化反應(yīng)轉(zhuǎn)化為強(qiáng)致癌物—亞硝胺，進(jìn)而引起鼻咽癌、食道癌、胃癌等多種器官惡性腫瘤，甚至通過(guò)胎盤(pán)屏障使下一代致癌[3]。清除體內(nèi)亞硝酸鹽和阻斷亞硝胺的合成是預(yù)防亞硝胺所致癌癥的一項(xiàng)有效途徑?，F(xiàn)代藥理研究表明，許多天然成分如黃酮類(lèi)[4]、酚類(lèi)[5]等能起到清除體內(nèi)亞硝酸鹽和阻斷亞硝胺合成的作用，從而達(dá)到預(yù)防癌癥的效果。從天然產(chǎn)物中挖掘安全低毒的抗氧化劑和抑制亞硝化劑已成為食品科學(xué)領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。

石韋(Pyrrosialingua(Thunb.)Farwell)為水龍骨科(Polypodiaceae)石韋屬(Pyrrosia)的多年生草本植物，又名石皮、金星草，主產(chǎn)廣東、浙江、湖北等地，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，為《中國(guó)藥典》收載，具有利尿通淋，清肺止咳，涼血止血等功效，臨床用于治療熱淋，血淋，石淋，小便不通等[6]?，F(xiàn)代研究表明，石韋含有黃酮類(lèi)、多酚、總皂苷、多糖等藥用成分，其中黃酮類(lèi)、多酚類(lèi)成分含量較高，具有抗菌、抗腫瘤、調(diào)節(jié)免疫功能、降血壓、降血糖等藥理活性[7,8]。國(guó)內(nèi)外學(xué)者研究顯示，同屬植物有柄石韋具有良好的抗氧化活性[9-11]。但對(duì)石韋抗氧化活性和抑制亞硝化活性及其與總酚、總黃酮含量相關(guān)性的研究未見(jiàn)報(bào)道。

本實(shí)驗(yàn)以石韋為研究對(duì)象，系統(tǒng)溶劑萃取分離，測(cè)定各提取物的總酚、總黃酮含量，比較各溶劑提取物的抗氧化活性和抑制亞硝化活性，并分析成分含量與活性的相關(guān)性，為石韋抗氧化活性和抑制亞硝化活性成分的分離指導(dǎo)提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)，為開(kāi)發(fā)利用石韋作為防癌抗癌保健食品和天然抗氧化劑提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

藥材石韋(Pyrrosialingua(Thunb.)Farwell)于2016年4月采自廣東省梅州市陰那山自然保護(hù)區(qū)，經(jīng)鑒定為水龍骨科(Polypodiaceae)石韋屬(Pyrrosia)多年生草本植物。

沒(méi)食子酸標(biāo)準(zhǔn)品(上海金穗生物科技有限公司；批號(hào)20160410)；福林酚試劑(上海金穗生物科技有限公司；批號(hào)2016108)；蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品(成都昂賽斯生物科技有限公司；批號(hào)20160815)；1，1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH；美國(guó)Sigma公司；批號(hào)STBB0829V)；2，2-聯(lián)氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二銨鹽(ABTS；美國(guó)Sigma公司；批號(hào)K1517067)；維生素C(Vc；西隴科學(xué)有限公司；批號(hào)20161213)；硝酸鋁(天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司；批號(hào)20150202)；過(guò)硫酸鉀、鐵氰化鉀、三氯乙酸、無(wú)水三氯化鐵、無(wú)水檸檬酸、對(duì)氨基苯磺酸、二甲胺、1-萘胺、鹽酸萘乙二胺、亞硝酸鈉(上海阿拉丁生化科技股份有限公司)；試劑均為分析純。

UV-1800型紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)(日本島津公司)；WFT-203B三用紫外線分析儀(上海精科實(shí)業(yè)有限公司)；N-1100V型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海愛(ài)朗儀器有限公司)；FA2004型電子分析天平(上海舜宇恒平科學(xué)儀器有限公司)；TG16-WS臺(tái)式高速離心機(jī)(長(zhǎng)沙維爾康湘鷹離心機(jī)有限公司)；JP-100S型超聲波清洗器(深圳市潔盟清洗設(shè)備有限公司)；WJX-A1000型多功能搖擺粉碎機(jī)(上海緣沃工貿(mào)有限公司)；DHG-9246A型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱(上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司)。

1.2 方法

1.2.1 石韋醇提取物及不同溶劑提取物的制備

石韋2.0 kg，經(jīng)50 ℃烘干，粉碎，用2倍量的95%乙醇超聲提取3次，合并提取液，減壓濃縮得浸膏(230 g)。取浸膏200 g分散于適量蒸餾水中，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，回收溶劑得石油醚提取物(PL-P，25 g)，乙酸乙酯提取物(PL-E，66 g)，正丁醇提取物(PL-B，53 g)，水提取物(PL-W，50 g)，置于玻璃真空干燥器中保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 總酚含量測(cè)定

Folin-酚法測(cè)定總酚含量[12]。精密稱取真空干燥至恒重的沒(méi)食子酸標(biāo)準(zhǔn)品20.0 mg，用蒸餾水溶解并定容于100 mL棕色量瓶中，得質(zhì)量濃度為0.2 g/L沒(méi)食子酸標(biāo)準(zhǔn)溶液。分別精密移取沒(méi)食子酸標(biāo)準(zhǔn)溶液0.0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5 mL于10 mL棕色具塞比色管中，依次加入6.0 mL蒸餾水，0.5 mL福林試劑，充分搖勻，室溫避光靜置2 min，再加入2.0 mL 7.5%碳酸鈉溶液，蒸餾水至刻度，混勻后常溫避光反應(yīng)90 min，于波長(zhǎng)760 nm處測(cè)定吸光度。各提取物的總酚含量參考沒(méi)食子酸(gallic acid，GA)標(biāo)準(zhǔn)曲線用沒(méi)食子酸當(dāng)量(每克干樣品中酚類(lèi)化合物相當(dāng)于沒(méi)食子酸的毫克數(shù)，mg/g)表示。每個(gè)提取物平行測(cè)定3次。

1.2.3 總黃酮含量測(cè)定

硝酸鋁法測(cè)定總黃酮含量[13]。精密稱取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品20.0 mg，用60%乙醇溶解并定容至100 mL棕色量瓶中，得質(zhì)量濃度為0.2 g/L蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液。分別精密移取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 mL于25 mL棕色具塞比色管中，依次加入蒸餾水至7.0 mL，5 %亞硝酸鈉溶液1.0 mL，搖勻，靜置4 min，加入10% Al(NO3)3溶液1.0 mL，搖勻，靜置4 min，加入4 %氫氧化鈉試液10.0 mL，再加蒸餾水至刻度，搖勻，放置10 min，于波長(zhǎng)500 nm處測(cè)定吸光度。各提取物的總黃酮含量參考蘆丁(rutin,RT)標(biāo)準(zhǔn)曲線用蘆丁當(dāng)量(每克干樣品中黃酮類(lèi)化合物相當(dāng)于蘆丁的毫克數(shù)，mg/g)表示。每個(gè)提取物平行測(cè)定3次。

1.2.4 抗氧化活性研究

1.2.4.1 DPPH法

DPPH自由基清除能力的測(cè)定參考文獻(xiàn)[14]，稍作改進(jìn)。分別精密移取1.0 mL不同質(zhì)量濃度的樣品和Vc溶液于10 mL試管中，分別加入0.1 mmoL/L DPPH甲醇溶液1.0 mL，室溫避光靜置20 min，以甲醇作為空白對(duì)照，于波長(zhǎng)517 nm處測(cè)定吸光度(Ai)；同時(shí)測(cè)定1.0 mL DPPH甲醇溶液與1.0 mL甲醇溶液混合后在波長(zhǎng)517 nm處的吸光度(A0)；測(cè)定1.0 mL甲醇溶液與1.0 mL樣品溶液在波長(zhǎng)517 nm處的吸光度(Aj)；每個(gè)樣品平行測(cè)定3次。根據(jù)公式(1)計(jì)算出石韋不同溶劑提取物對(duì)DPPH自由基的清除率。

DPPH自由基清除率=

[1-(Ai-Aj)/A0]× 100%

(1)

1.2.4.2 ABTS法

ABTS自由基清除能力測(cè)定參考文獻(xiàn)[15]，稍作改進(jìn)。將7.0 mmoL/L的ABTS溶液與2.45 mmoL/L過(guò)硫酸鉀溶液等體積混合，室溫避光靜置12～16 h，制備ABTS自由基母液。用10 mmoL/L(pH7.4)磷酸緩沖溶液將ABTS自由基母液稀釋?zhuān)蛊湓诓ㄩL(zhǎng)734 nm處吸光度達(dá)到0.70±0.02。分別將0.1 mL不同質(zhì)量濃度樣品溶液和Vc溶液加入4.0 mL ABTS自由基溶液中，振蕩30 s后室溫靜置10 min，于波長(zhǎng)734 nm處測(cè)量吸光度(Ai)；同時(shí)測(cè)定4.0 mL ABTS自由基溶液與0.1 mL甲醇溶液混合后在波長(zhǎng)734 nm處的吸光度(A0)；測(cè)定4.0 mL(10 mmoL/L；pH 7.4)磷酸緩沖溶液與1.0 mL樣品溶液在波長(zhǎng)734 nm處的吸光度(Aj)；每個(gè)樣品平行測(cè)定3次。根據(jù)公式(2)計(jì)算出石韋不同溶劑提取物對(duì)ABTS自由基的清除率。

ABTS自由基清除率=

[1-(Ai-Aj)/A0]× 100%

(2)

1.2.4.3 普魯士藍(lán)法

鐵還原力的測(cè)定參考文獻(xiàn)[16]。分別精密移取2.0 mL 不同質(zhì)量濃度的樣品和Vc溶液于10 mL試管中，再分別加入2.0 mL 磷酸緩沖溶液(2.0 mol/L，pH6.6)和2.0 mL 1%鐵氰化鉀，搖勻，于50 ℃恒溫水浴20 min后取出急速冷卻，再分別加入2.0 mL 10%三氯乙酸溶液。將上述溶液離心10 min(6 000 rpm)，取上清液2.0 mL，加入1.5 mL蒸餾水及0.5 mL 0.1% FeCl3溶液混勻，靜置10 min后于700 nm測(cè)定吸光度，每個(gè)樣品平行測(cè)定 3 次，鐵還原力大小用每克樣品的Vc當(dāng)量表示(μmoL/g)。

1.2.5抑制亞硝化活性研究

1.2.5.1 鹽酸萘乙二胺法

亞硝酸鹽清除率的測(cè)定參考文獻(xiàn)[17]。pH3.0的檸檬酸-磷酸氫二鈉緩沖溶液2.0 mL，分別加入不同質(zhì)量濃度的樣品和Vc溶液1.0 mL，5 μg/mL的亞硝酸鈉溶液2.0 mL于25 mL比色管中，在37℃水浴1 h，取出，立即加入0.4%對(duì)氨基苯磺酸2.0 mL，混勻，靜置3～5 min，各加1.0 mL 0.2%鹽酸萘乙二胺溶液。加蒸餾水至刻度，混勻，靜置15 min，在538 nm下測(cè)定吸光度，每個(gè)樣品平行測(cè)定 3 次。根據(jù)公式(3)計(jì)算出石韋不同溶劑提取物對(duì)亞硝酸鹽的清除率。

亞硝酸鹽清除率=

[1-(Ai-Aj)/A0]× 100%

(3)

式中：A0為空白對(duì)照組的吸光度值(蒸餾水代替樣品溶液)；Ai為樣品組的吸光度值；Aj為未加亞硝酸鈉溶液的吸光度值(蒸餾水代替亞硝酸鈉溶液)，下同。

1.2.5.2α-萘胺法

亞硝胺合成阻斷率的測(cè)定參考文獻(xiàn)[18]。分別移取不同質(zhì)量濃度的樣品和Vc溶液5.0 mL于25 mL比色管中，加入pH3.0的檸檬酸-磷酸氫二鈉緩沖液10.0 mL、1 mmoL/L NaNO2溶液1.0 mL、1 mol/L的二甲胺溶液1.0 mL，加入蒸餾水至25.0 mL，在37 ℃下恒溫1 h。吸取1.0 mL上述溶液至25 mL小燒杯中，加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.5% Na2CO3溶液0.5 mL，于紫外分析儀上(254 nm)照15 min。取出后加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)1%對(duì)氨基苯磺酸1.5 mL，再加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.1%α-萘胺1.5 mL、蒸餾水0.5 mL，搖勻，靜置15 min，在最大吸收波長(zhǎng)525 nm處測(cè)定吸光度，每個(gè)樣品平行測(cè)定3次。根據(jù)公式(4)計(jì)算出石韋不同溶劑提取物對(duì)亞硝胺合成的阻斷率。

亞硝胺合成的阻斷率=

[1-(Ai-Aj)/A0]× 100%

(4)

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

2 結(jié)果與分析

2.1 石韋各提取物總酚和總黃酮含量

沒(méi)食子酸標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖1所示，線性擬合方程Y=0.104 6X+ 0.032 2，R2=0.997，線性關(guān)系良好。

圖1 沒(méi)食子酸標(biāo)準(zhǔn)曲線

蘆丁標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖2所示，線性擬合方程Y=0.013 3X-0.007 2，R2=0.997，線性關(guān)系良好。

圖2 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線

石韋4個(gè)不同溶劑提取物總酚和總黃酮含量如表1所示。結(jié)果顯示，總酚和總黃酮在不同溶劑提取物中的含量差異顯著(P<0.05)，且總酚和總黃酮含量大小均為PL-B>PL-W>PL-E>PL-P。其PL-B中的總酚、總黃酮含量最高，分別為29.85±2.15和37.23±2.41 mg/g，明顯大于其余3個(gè)提取物。表明正丁醇可高度富集石韋醇提取物中的酚類(lèi)和黃酮類(lèi)成分，對(duì)PL-B的進(jìn)一步分離純化以研究石韋酚類(lèi)和黃酮類(lèi)成分具有重要的指導(dǎo)意義。

表1 石韋不同溶劑提取物的總酚和總黃酮含量

注：同行肩標(biāo)字母不同表示差異顯著(P<0.05)，下同。

Note:Different data in the same row means significant difference(P<0.05),the same below.

2.2 體外抗氧化活性測(cè)定結(jié)果

2.2.1 DPPH 自由基清除能力

石韋不同溶劑提取物對(duì)DPPH自由基的清除率測(cè)定結(jié)果見(jiàn)圖3、表2。由圖3可知，在40～200 μg/mL的質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，石韋各溶劑提取物對(duì)DPPH自由基均具有一定程度的清除作用，清除率隨質(zhì)量濃度的增大而增大，呈一定的量效關(guān)系。在相同質(zhì)量濃度下，PL-B對(duì)DPPH自由基的清除率最高，最高可達(dá)90.76%。

由表2可知，石韋各溶劑提取物清除DPPH自由基能力大小依次為PL-B>PL-W>PL-E>PL-P，其中PL-B和PL-W清除DPPH 自由基的IC50值較為接近，且顯著小于PL-E和PL-P，表明石韋清除DPPH自由基的活性物質(zhì)主要集中在較大極性的水提取物和正丁醇提取物。

圖3 石韋各溶劑提取物對(duì)DPPH自由基清除能力的影響

表2 石韋各溶劑提取物清除DPPH自由基的IC50值

2.2.2 ABTS自由基清除能力

石韋不同溶劑提取物對(duì)ABTS自由基的清除率測(cè)定結(jié)果見(jiàn)圖4、表3。由圖4可知，石韋各溶劑提取物清除ABTS自由基能力隨質(zhì)量濃度的增大而增強(qiáng)。當(dāng)質(zhì)量濃度為200 μg/mL時(shí)，清除率由高到低依次為：PL-B>PL-W>PL-E>PL-P，其中PL-B的清除率高達(dá)90.08%，接近于陽(yáng)性對(duì)照Vc(95.67%)。

由表3可知，石韋各溶劑提取物清除ABTS自由基能力具有顯著性差異(P<0.05)，清除能力大小依次為PL-B>PL-W>PL-E>PL-P。其中PL-B清除ABTS自由基的IC50值為97.47±12.10 μg/mL，遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于其它3個(gè)溶劑提取物，表明石韋對(duì)ABTS自由基清除的活性物質(zhì)可有效富集在正丁醇提取物。

圖4 石韋各溶劑提取物對(duì)ABTS自由基清除能力的影響

表3 石韋各溶劑提取物清除ABTS自由基的IC50值

2.2.3 鐵還原能力的測(cè)定

石韋不同溶劑提取物對(duì)鐵還原能力的測(cè)定結(jié)果見(jiàn)圖 5。由圖5可知，石韋PL-B的鐵還原能力最強(qiáng)(822.08±24.82 μmoL Vc/g)，單因素方差分析和多重比較(Duncan法)結(jié)果顯示，PL-B的鐵還原能力與其它溶劑提取物存在顯著性差異(P<0.05)，表明石韋對(duì)鐵還原能力的活性物質(zhì)主要集中在正丁醇提取物。

2.3 體外抑制亞硝化活性測(cè)定結(jié)果

2.3.1 亞硝酸鹽的清除能力

石韋不同溶劑提取物對(duì)亞硝酸鹽的清除率測(cè)定結(jié)果見(jiàn)圖6、表4。由圖6可知，在模擬胃酸條件下，石韋各溶劑提取物具有一定的清除亞硝酸鹽的能力，隨質(zhì)量濃度增大而增強(qiáng)。

圖5 石韋各溶劑提取物對(duì)鐵還原能力的影響

由表4可知，石韋各溶劑提取物清除亞硝酸鹽能力大小依次為PL-B>PL-W>PL-E>PL-P。其中PL-B清除亞硝酸鹽的 IC50值為7.071±0.231 mg/mL，明顯小于其余三個(gè)溶劑提取物，表明石韋對(duì)亞硝酸鹽清除的活性物質(zhì)主要集中在正丁醇提取物。

圖6 石韋各溶劑提取物對(duì)亞硝酸鹽清除能力的影響

表4 石韋各溶劑提取物清除亞硝酸鹽的IC50值

2.3.2 亞硝胺合成的阻斷能力

石韋不同溶劑提取物對(duì)亞硝胺合成的阻斷力測(cè)定結(jié)果見(jiàn)圖7、表5。由圖7可知，石韋各溶劑提取物具有一定的阻斷亞硝胺合成的能力，隨質(zhì)量濃度增大而增強(qiáng)，呈一定的量效關(guān)系。其中，PL-B對(duì)亞硝胺合成的阻斷能力最強(qiáng)，在質(zhì)量濃度為20.0 mg/mL時(shí)，阻斷率達(dá)65.03%。

由表5可知，石韋各溶劑提取物阻斷亞硝胺合成能力大小依次為PL-B>PL-W>PL-E>PL-P。其中PL-B阻斷亞硝胺合成的IC50值為15.010±1.224 mg/mL，明顯小于其余三個(gè)溶劑提取物，表明石韋阻斷亞硝胺合成的活性物質(zhì)主要集中在正丁醇提取物。

圖7 石韋各溶劑提取物對(duì)亞硝胺合成阻斷能力的影響

表5 石韋各溶劑提取物阻斷亞硝胺合成的IC50值

2.4 總酚和總黃酮含量與抗氧化活性和抑制亞硝化活性的相關(guān)性分析

石韋不同溶劑提取物總酚、總黃酮含量與抗氧化活性和抑制亞硝化活性的相關(guān)性結(jié)果見(jiàn)表 6。

由表6可知，石韋各溶劑提取物總酚、總黃酮含量與ABTS自由基清除能力、亞硝胺合成的阻斷能力呈極顯著正相關(guān)(P<0.01)，與DPPH自由基清除能力、鐵還原能力、亞硝酸鹽清除能力呈顯著正相關(guān)(P<0.05)。表明石韋各溶劑提取物總酚、總黃酮含量與抗氧化活性和抑制亞硝化活性具有顯著相關(guān)性，其中總酚、總黃酮含量對(duì)ABTS自由基清除能力及亞硝胺合成的阻斷能力的影響大于DPPH 自由基清除能力、鐵還原能力、亞硝酸鹽清除能力。

表6 相關(guān)性分析結(jié)果

注：**雙側(cè)極顯著相關(guān)(P<0.01)，*雙側(cè)顯著相關(guān)(P<0.05)。

Note:**indicates significant correlation at 0.01 level(both sides);*indicates significant correlation at 0.05 level(bilateral).

3 結(jié)論與討論

石韋為常用中藥，臨床用于膀胱炎、泌尿系結(jié)石、尿血的治療[7]，療效確切，其資源分布較廣，有良好的開(kāi)發(fā)前景，但其發(fā)揮活性作用的物質(zhì)基礎(chǔ)尚不明確。

實(shí)驗(yàn)以藥材石韋為原料，對(duì)其總酚、總黃酮含量及其抗氧化和抑制亞硝化活性進(jìn)行了系統(tǒng)研究。試驗(yàn)結(jié)果表明，各提取物均含有總酚、總黃酮，其中正丁醇提取物(PL-B)中總酚、總黃酮的含量較高，并顯著高于其他提取物，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)?；钚匝芯匡@示，各提取物均有不同程度的還原力、自由基清除作用以及抑制亞硝化作用，并呈一定的量效關(guān)系。從整體上看，正丁醇提取物(PL-B)表現(xiàn)出較強(qiáng)的DPPH、ABTS 自由基清除作用和較強(qiáng)的Fe3+還原作用，且明顯強(qiáng)于其他提取物(P<0.05)。與此同時(shí)，正丁醇提取物(PL-B)對(duì)亞硝化反應(yīng)有較好的抑制作用，能夠清除亞硝酸鹽和阻斷亞硝胺的合成，并優(yōu)于其他提取物，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示，石韋抗氧化和抑制亞硝化活性成分主要存在于極性較大的正丁醇提取物中，這可能與其富含黃酮類(lèi)、酚酸類(lèi)活性成分有關(guān)[19]，學(xué)者M(jìn)izuno等[20]也從石韋正丁醇提取物中分離得到了綠原酸，且含量豐富，現(xiàn)已為藥典規(guī)定的石韋指標(biāo)性成分。相關(guān)性分析顯示，總酚、總黃酮含量對(duì)ABTS自由基清除能力及亞硝胺合成阻斷能力呈極顯著正相關(guān)(P<0.01)，對(duì)DPPH 自由基清除能力、鐵還原能力、亞硝酸鹽清除能力呈顯著正相關(guān)(P<0.05)。因此，石韋提取物中，石韋正丁醇提取物具有較強(qiáng)的體外抗氧化和抑制亞硝化活性，總酚、總黃酮是其發(fā)揮作用的物質(zhì)基礎(chǔ)。石韋正丁醇提取物可用于天然抗氧化劑開(kāi)發(fā)，同時(shí)極有可能是一種新的防癌抗癌天然保健品。提示應(yīng)以ABTS自由基清除和亞硝胺合成阻斷能力為活性指標(biāo)對(duì)石韋正丁醇提取物中的總酚和總黃酮進(jìn)一步分離純化，明確活性物質(zhì)基礎(chǔ)，并對(duì)抗氧化和抑制亞硝化活性成分的構(gòu)效關(guān)系、作用機(jī)制、以及活性成分間的協(xié)同或拮抗作用等方面開(kāi)展系統(tǒng)性研究，將有助于闡明石韋藥用科學(xué)內(nèi)涵，為開(kāi)發(fā)石韋作為防癌抗癌保健食品和天然抗氧化劑提供參考。