HCG日血清雌、孕激素水平對內(nèi)膜整合素αVβ3和LIF表達及凍融胚胎移植結(jié)局的影響

許偉標 蔡喆

【摘要】 目的 探討人絨毛膜促性腺激素（HCG）日血清雌、孕激素水平對內(nèi)膜整合素αVβ3、白血病抑制因子（LIF）表達及凍融胚胎移植（FET）結(jié)局的影響。方法 122例實施128個周期體外受精（IVF）助孕的患者， 按HCG日血清雌二醇（E2）及孕酮（P）水平分為A組（E2<5210 pg/ml、P<1.05 ng/ml， 33個周期， 31例）、B組（E2≥5210 pg/ml、P<1.05 ng/ml， 36個周期， 33例）、C組（E2<5210 pg/ml、P≥1.05 ng/ml，?28個周期， 28例）、D組（E2≥5210 pg/ml、P≥1.05 ng/ml， 31個周期， 30例）。所有患者均進行超排卵方案及凍融胚胎移植。取卵后7 d左右吸取內(nèi)膜組織， 比較四組HCG日血清E2、P、LH水平及凍融胚胎移植臨床結(jié)局、種植窗期內(nèi)膜整合素αVβ3和LIF表達情況。結(jié)果 B組HCG日血清E2為（7528.2±239.0）pg/ml， D組HCG日血清E2為（7895.9±282.4）pg/ml， 均高于A組的（1739.1±162.9）pg/ml， 差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）;C組HCG日血清P為（1.4±0.6）ng/ml， D組HCG日血清P為（1.2±0.4）ng/ml，?均高A組的（0.6±0.2）ng/ml， 差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論 HCG日血清雌、孕激素水平不影響內(nèi)膜整合素αVβ3和LIF表達及凍融胚胎移植周期的結(jié)局。

【關(guān)鍵詞】 雌激素;孕激素;整合素αVβ3;白血病抑制因子

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2020.12.035

人類輔助生殖技術(shù)（assisted reproductive technology， ART）發(fā)展迅速， 體外受精-胚胎移植（in vitro fertilization?and embryo transfer， IVF-ET）獲得胚胎的數(shù)量及質(zhì)量也不斷提高， 但對于母體與胚胎間的聯(lián)系了解不多。IVF助孕中， 激素生理平衡的改變會使內(nèi)膜相關(guān)因子表達產(chǎn)生變化， 這種變化可能影響凍融胚胎移植（frozen-thawed embryo transfer， FET）周期結(jié)局。整合素是存在于細胞表面的一種跨膜糖蛋白， 在內(nèi)膜中會發(fā)生周期性改變。研究發(fā)現(xiàn)[1， 2]， 整合素αVβ3表達于黃體期， 持續(xù)至妊娠期， 與種植窗一致， 是內(nèi)膜容受性標志物之一。白血病抑制因子（leuakemia inhibitory factor， LIF）是一種多功能糖蛋白， 黃體中期表達最高， 即種植窗期表達最高， 增生期極低水平表達， 是內(nèi)膜容受性標記物。本研究探討HCG日血清雌、孕激素水平對種植窗期內(nèi)膜整合素αVβ3和LIF表達及凍融胚胎移植結(jié)局的影響。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 選取2017年1～12月在本中心實施128個周期IVF助孕的122例患者， 依據(jù)Wu等[3]的研究， ROC曲線分析HCG日血清E2、P水平對IVF結(jié)局的影響， 確定高P界值為1.05 ng/ml，?高E2界值為5210 ng/ml。根據(jù)HCG日血清E2、P水平分為A組（E2<5210 pg/ml、P<1.05 ng/ml， 33個周期，?31例）、B組（E2≥5210 pg/ml、P<1.05 ng/ml， 36個周期， 33例）、C組（E2<5210 pg/ml、P≥1.05 ng/ml， 28個周期， 28例）、D組（E2≥5210 pg/ml、P≥1.05 ng/ml， 31個周期， 30例）。納入標準：①年齡<40歲;②卵巢儲備功能正常;③獲得>4個卵子;④男方精液常規(guī)檢查正常。四組患者一般資料比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）， 具有可比性。見表1。

1. 2 方法

1. 2. 1 超排卵方案 采用黃體期長方案， 長效促性腺激素釋放激素激動劑（GnRH-a）降調(diào)節(jié)， 14～20 d后給予卵泡刺激素（FSH）超排卵治療， 卵泡最大直徑≥18 mm時注射HCG， 36～38 h后超聲指導(dǎo)下取卵。受精后18～20 h觀察受精情況， 胚胎培養(yǎng)3 d， 冷凍所有胚胎。

1. 2. 2 凍融胚胎移植 月經(jīng)第2～4天， 陰超記錄子宮、內(nèi)膜、卵巢及卵泡情況， 若未見優(yōu)勢卵泡且內(nèi)膜≤5 mm予戊酸雌二醇片（商品名：補佳樂）4 mg， b.i.d.， 12～14 d后抽血查促黃體生成素（LH）、E2及P， 如有卵泡發(fā)育或內(nèi)膜<8 mm則取消周期， 如內(nèi)膜厚度≥8 mm， 當(dāng)日給予黃體酮60 mg肌內(nèi)注射， 注射第4天行凍融胚胎移植。移植后第12～14天測定血清HCG。移植后第28～30天陰超檢查見宮腔內(nèi)有孕囊者為臨床妊娠。

1. 3 觀察指標 比較四組HCG日血清E2、P、LH水平及凍融胚胎移植臨床結(jié)局、種植窗期內(nèi)膜整合素αVβ3和LIF表達情況。HCG日當(dāng)天抽取空腹肘靜脈血3 ml， 分血清， -20℃保存待測， 檢測E2、P及LH水平。在卵子獲取后的7～8 d吸取子宮內(nèi)膜組織。獲取子宮內(nèi)膜前用生理鹽水沖洗陰道、宮頸外口， 用子宮內(nèi)膜取樣器Pipelle管于子宮體中上段吸取少許內(nèi)膜組織， 檢測LIF、整合素αVβ3。凍融胚胎移植臨床結(jié)局包括可移植胚胎數(shù)、優(yōu)質(zhì)胚胎率、種植率、臨床妊娠率、流產(chǎn)率。

1. 4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS22.0統(tǒng)計學(xué)軟件進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析。計量資料以均數(shù)±標準差（ x-±s）表示， 采用t檢驗;計數(shù)資料以率（%）表示， 采用χ2檢驗。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2. 1 四組患者HCG日血清E2、P及LH水平比較 B組HCG日血清E2為（7528.2±239.0）pg/ml， D組HCG日血清E2為（7895.9±282.4）pg/ml， 均高于A組的（1739.1±162.9）pg/ml， 差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）;C組HCG日血清P為（1.4±0.6）ng/ml， D組HCG日血清P為（1.2±0.4）ng/ml， 均高A組的（0.6±0.2）ng/ml， 差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。見表2。

2. 2 四組患者凍融胚胎移植臨床結(jié)局比較 四組可移植胚胎數(shù)、優(yōu)質(zhì)胚胎率、種植率、臨床妊娠率、流產(chǎn)率比較， 差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。見表3。

2. 3 四組種植窗期內(nèi)膜整合素αVβ3和LIF表達的比較 四組內(nèi)膜整合素αVβ3和LIF表達情況比較， 差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。見表4。

3 討論

子宮內(nèi)膜在組織學(xué)及分子學(xué)上周期性改變， 內(nèi)膜的容受性也發(fā)生改變[4]。在種植窗期， 雌、孕激素調(diào)節(jié)了子宮內(nèi)膜中因子的表達， 這些內(nèi)膜因子可能作為胚胎著床的介質(zhì)影響胚胎著床。大量的研究發(fā)現(xiàn)[5-7]， 子宮內(nèi)膜種植窗期一些因子的表達都可以反映內(nèi)膜容受性。

3. 1 整合素αVβ3和LIF 在內(nèi)膜中的表達 子宮內(nèi)膜上皮處于接受狀態(tài)時， 內(nèi)膜上皮上的粘附分子表達， 從而促使胚胎與之發(fā)生附著反應(yīng)。整合素作為粘附因子的一員， 是細胞膜上以α、β異二聚體形式存在的糖蛋白分子， 是多種細胞外基質(zhì)分子的受體， 其介導(dǎo)細胞間的信號傳導(dǎo)， 在內(nèi)膜的表達中存在多種亞型， 只有αVβ3開始表達于月經(jīng)的黃體中期， 維持到妊娠期， 是內(nèi)膜植入窗啟動的標示[8]。

LIF可以調(diào)節(jié)胚胎滋養(yǎng)層細胞功能和血管形成， 多種動物的內(nèi)膜上發(fā)現(xiàn)有LIF-mRNA和其蛋白的表達。在增殖期， LIF-mRNA和蛋白很難測到， 但在分泌期， 兩者的水平明顯升高， 而此時段是胚胎種植時間， 因此， LIF與內(nèi)膜的容受性有關(guān)[9， 10]。Stewart等[11]通過研究發(fā)現(xiàn)， 老鼠的LIF基因被敲除后， 卵子受精后可以形成囊胚， 但不能著床， 而在該小鼠子宮腔內(nèi)補充LIF后， 囊胚的種植率有明顯提高， 這表明LIF可以作為內(nèi)膜容受性的標志物。

3. 2 E2、P水平對整合素αVβ3和LIF表達及凍融胚胎移植結(jié)局的影響 超排卵中孕激素升高會使孕激素受體（PR）的表達下降， 同時會促進內(nèi)膜的整合素αVβ3表達提早、增強。在一項對黃素化卵泡的研究中發(fā)現(xiàn)， 正常排卵組的P水平更高， 整合素αVβ3的表達增強， 表明植入窗推遲及內(nèi)膜容受性下降， 胚胎植入率下降[12]。林娜等[13]比較高雌孕激素水平對種植期整合素αVβ3表達的影響， 結(jié)果顯示高E2組、高P組、高E2并高P組整合素αVβ3與對照組比較， 差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。本研究中對照組為低E2并低P組， 結(jié)果顯示四個組中， 內(nèi)膜整合素αvβ3的表達也沒有差異， 這可能與P水平設(shè)定的界值不同有關(guān)， 使得研究的結(jié)果不一致。

相關(guān)研究[5]顯示， 種植窗期血清P水平在妊娠組高于非妊娠組， LIF的表達也在妊娠組較高， 且LIF的表達與血清P水平相關(guān)， 提示種植窗內(nèi)膜LIF的表達受P調(diào)節(jié)， 而E2的水平則與LIF的表達沒有相關(guān)性。也有研究[6]表明， 切除卵巢后， 添加外源性雌激素并不能誘導(dǎo)LIF蛋白的表達， 但是孕激素則可誘導(dǎo)LIF的表達增加。E2上升可使植入期時間縮短， 排卵后E2的變化也使LIF發(fā)生變化， 兩者關(guān)系密切。但是， 在本研究中， 無論是P升高組， 還是E2升高組， LIF的表達都沒有增加， 所以LIF的表達除了與P、E2的水平相關(guān)外， 還可能與E2/P的比例有關(guān)， 兩者維持在適當(dāng)比例， LIF的表達才可能增強。

本研究結(jié)果顯示， 四組可移植胚胎數(shù)、優(yōu)質(zhì)胚胎率、種植率、臨床妊娠率、流產(chǎn)率比較， 差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。四組膜整合素αVβ3和LIF表達情況比較， 差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。

綜上所述， HCG日血清雌、孕激素水平不影響內(nèi)膜整合素αVβ3和LIF的表達及凍融胚胎移植周期的結(jié)局。雌孕激素對子宮內(nèi)膜容受性的影響是多方面的， 而子宮內(nèi)膜容受性的標志物也不僅僅只有整合素αVβ3和LIF， 本研究只觀察αVβ3和LIF有其局限性， 需要臨床擴大樣本量來進一步研究， 且需要用更多的具有代表性的內(nèi)膜容受性標志物來衡量， 才能有更準確的結(jié)果。

參考文獻

[1] Noyes RW， Hertig AT， Rock J， et al. Dating the endometrial biopsy. Am J Obstet Gynecol， 1975， 122（2）：262-263.

[2] Pafilis J， Batistatou A， Iliopoulou A， et al. Expression of adhesion molecules during normal pregnancy. Cell Tissue Res， 2007， 329（1）：1-11.

[3] Wu Z， Li R， Ma Y， et al. Effect of HCG-day serum progesterone and oestradiol concentrations on pregnancy outcomes in GnRH agonist cycles. Reproductive biomedicine online， 2012， 24（5）：511-520.

[4] 金麗， 潘潔雪， 丁國蓮， 等. 輔助生殖周期中超促排卵對子宮內(nèi)膜容受性的影響. 中國實用婦科與產(chǎn)科雜志， 2015， 31（1）：31-35.

[5] 董方莉， 譚麗， 鄭英. 植入窗期血清孕激素水平及子宮內(nèi)膜白血病抑制因子表達對體外受精﹣胚胎移植結(jié)局的預(yù)測價值. 生殖醫(yī)學(xué)雜志， 2007（16）：20-23.

[6] 霍立軍， 楊增明. 孕酮調(diào)節(jié)的胚胎著床相關(guān)分子及其作用. 中華婦產(chǎn)科雜志， 2002， 37（8）：505-507.

[7] Haines BP， Voyle RBJ， Rathjen PD. Intracellular and extracellular leukemiainhibitory factor proteins have different cellular activities thar are mediated by distinct protein motifs. Mol Biol Cell， 2000（11）：1369-1383.

[8] Lessey BA. Adhesion molecules and implantation. J Reprod Immunol， 2002， 55（1-2）：101-112.

[9] Charnock-Jones DS， Sharkey AM， Fenwick P， et al. Leukaemia inhibitory factor mRNA concentration peaks in human endometrium at the time of implantation and the blastocyst contains mRNA for the receptor at this time. J Reprod Fertil， 1994， 101（2）：421-426.

[10] Cullinan EB， Abbondanzo SJ， Anderson PS， et al. Leukemia inhibitory factor （LIF） and LIF receptor expression in human endometrium suggests a potential autocrine/paracrine function in regulating embryo implantation. Proc Natl Acad Sci U S A， 1996， 93（7）：3115-3120.

[11] Stewart CL， Kaspar P， Brunet LJ， et al. Blastocyst implantation depends on maternal expression of leukaemia inhibitory factor. Nature， 1992， 3359（6390）：76-79.

[12] Xu W， Yang J， Jiang L， et al. Impact of luteinized unruptured follicles on endometrial receptivity. J Huazhong Univ Sci Technolog Med Sci， 2011（31）：181-184.

[13] 林娜， 馬艷萍， 武澤， 等. IVF周期中高雌、孕激素水平對著床期子宮整合素αVβ3表達及子宮內(nèi)膜容受性的影響. 昆明醫(yī)科大學(xué)學(xué)報， 2015， 3（4）：48-52.

[收稿日期：2020-02-17]