腫瘤壞死因子α、白介素1β、白介素6 在2 型糖尿病不同中醫(yī)證型中表達(dá)差異性研究

何君婷 龔文波

2 型糖尿病（T2DM）是一種慢性炎癥性疾病[1]。T2DM 患者的胰島素抵抗（IR）程度與血清C-反應(yīng)蛋白（CRP）水平顯著相關(guān)[2]。對(duì)動(dòng)物模型與人體研究發(fā)現(xiàn)，T2DM 患者的胰島存在炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)現(xiàn)象，T2DM患者胰島組織切片顯示纖維化與淀粉樣沉積，從而給胰島炎癥反應(yīng)說(shuō)提供了證據(jù)[3]。文獻(xiàn)報(bào)道氣虛或氣機(jī)不利是糖尿病的基本病機(jī)，在疾病發(fā)生發(fā)展過(guò)程中，會(huì)演變?yōu)殛幪?、氣陰兩虛證[4]。研究表明，腫瘤壞死因子α（TNF-α）、白細(xì)胞介素1β（IL-1β）、白細(xì)胞介素6（IL-6）表達(dá)上調(diào)是糖尿病炎癥反應(yīng)的重要途徑和指標(biāo)[5]。本研究探討IL-1β、IL-6、TNF-α 在三種證型中的表達(dá)差異。

1 臨床資料

1.1 一般資料 選取2016 年8 月—2017 年8 月浙江省寧波市中醫(yī)院內(nèi)分泌科門診就診T2DM 患者202 例，隨機(jī)數(shù)字表法分為氣虛組68 例，陰虛組67例，氣陰兩虛組72 例。選取本院體檢中心同期健康體檢人群73 名為對(duì)照組，所有研究對(duì)象均簽署知情同意書，本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)審核通過(guò)。

1.2 診斷及排除標(biāo)準(zhǔn) T2DM 診斷標(biāo)準(zhǔn):參照中國(guó)T2DM 防治指南（2013 年版）診斷標(biāo)準(zhǔn):空腹血糖（FPG）7.0mmol/L；或糖耐量試驗(yàn)（OGTT）11.1mmol/L；或隨機(jī)血糖11.1mmol/L[6]。中醫(yī)辨證標(biāo)準(zhǔn):參照《中藥新藥臨床研究指導(dǎo)原則》[7]、《中西醫(yī)結(jié)合糖尿病診療標(biāo)準(zhǔn)》[8]、《消渴病（糖尿?。┲嗅t(yī)分期辨證與療效評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)》[9]的標(biāo)準(zhǔn)。氣虛證:主癥為神疲乏力，少氣懶言，汗出氣短，脈細(xì)無(wú)力；次癥為自汗，怔仲健忘，舌淡或淡胖。符合2 項(xiàng)主癥及1 項(xiàng)次癥即可診斷。陰虛證:主癥為咽干口渴；怕熱汗多或有盜汗；手足心或五心煩熱；舌紅，苔薄黃或薄白；次癥為消谷善饑；形體消瘦；大便秘結(jié)；脈細(xì)數(shù)。符合2 項(xiàng)主癥及1 項(xiàng)次癥即可診斷。氣陰兩虛證:主癥為神疲乏力，汗出氣短，五心煩熱，咽干口渴，舌紅少津，苔薄或白膩；次癥為怔仲健忘，多食易饑，心悸失眠，脈細(xì)或濡細(xì)。符合2 項(xiàng)主癥及1 項(xiàng)次癥即可診斷。排除標(biāo)準(zhǔn):（1）糖尿病急性并發(fā)癥，如糖尿病酮癥、糖尿病高滲性昏迷；（2）糖尿病各種應(yīng)激狀態(tài)，如感染、創(chuàng)傷、大出血等；（3）糖尿病其他兼癥，如腫瘤、免疫系統(tǒng)或血液系統(tǒng)疾病者；（4）因嚴(yán)重心腦腎并發(fā)癥者；（5）妊娠或哺乳期婦女。

2 研究方法

2.1 觀察指標(biāo)及方法 采集所有研究對(duì)象清晨空腹靜脈血5mL，運(yùn)用酶聯(lián)免疫吸附劑測(cè)定（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）法測(cè)定TNF-α、IL-1β、IL-6 蛋白表達(dá)水平，具體操作嚴(yán)格按試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行，所有試劑盒購(gòu)自英國(guó)abcom 公司（批號(hào)ab181421、ab46052、ab46027）。并同時(shí)采用葡萄糖氧化酶法測(cè)定血清FPG，高效液相離子層析法測(cè)定糖化血紅蛋白（HbAlc）水平，ELISA 法測(cè)定超敏-C 反應(yīng)蛋白（hs-CRP）等相關(guān)指標(biāo)。

2.2 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 25.0 統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（） 表示，兩組間比較采用t 檢驗(yàn)，多組間比較采用方差分析，均以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 四組研究對(duì)象一般資料比較 氣虛組68 例，男35 例，女33 例，年齡（54.30±8.80）歲，病程（5.21±2.18）年，體質(zhì)量指數(shù)（BMI）（23.32±3.06）kg/m2；陰虛組67 例，男35 例，女32 例，年齡（55.30±8.60）歲，病程（6.81±2.73）年，BMI（22.72±2.87）kg/m2；氣陰兩虛組72 例，男38 例，女34 例，年齡（52.30±7.90）歲，病程（5.76±3.35）年，BMI（22.09±2.48）kg/m2。對(duì)照組73名，男37 名，女36 名，年齡（52.10±8.10）歲，BMI（22.12±2.86）kg/m2。四組研究對(duì)象一般資料比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。

3.2 四組研究對(duì)象血FPG、HbAlc 及hs-CRP 比較氣陰兩虛組、氣虛組、陰虛組FPG、HbAlc、hs-CRP 均明顯高于對(duì)照組（P＜0.05），氣陰兩虛組、氣虛組及陰虛組組間比較FPG、HbAlc、hs-CRP 差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見(jiàn)表1。

表1 四組研究對(duì)象血FPG、HbAlc 及hs-CRP 比較（）

表1 四組研究對(duì)象血FPG、HbAlc 及hs-CRP 比較（）

注:FPG 為空腹血糖；HbAlc 為糖化血紅蛋白；hs-CRP 為超敏C 反應(yīng)蛋白；與對(duì)照組比較，aP＜0.05

3.3 四組研究對(duì)象血TNF-α、IL-1β、IL-6 比較 與對(duì)照組比較，陰虛組和氣虛組TNF-α 升高（P＜0.05），氣陰兩虛組TNF-α、IL-1β、IL-6 均顯著升高（P＜0.05）；與陰虛組、氣虛組比較，氣陰兩虛組TNF-α、IL-1β、IL-6 均顯著升高（P＜0.05）。見(jiàn)表2。

表2 四組研究對(duì)象血TNF-α、IL-1β、IL-6 比較（）

表2 四組研究對(duì)象血TNF-α、IL-1β、IL-6 比較（）

注:TNF-α 為腫瘤壞死因子α；IL-1β 為白介素1β；IL-6 為白介素6；與對(duì)照組比較，aP＜0.05；與陰虛組、氣虛組比較，bP＜0.05

4 討論

《素問(wèn)·經(jīng)脈別論》言:“飲入于胃，游溢精氣，上輸于脾，脾氣散精……水精四布，五經(jīng)并行?！薄捌馍⒕奔词侵笇嬍持械臓I(yíng)養(yǎng)成分精微物質(zhì)，有效地輸送至全身并充分利用的過(guò)程，只有脾氣的健運(yùn)，才能“受氣取汁”，將飲食中的水谷變成氣血精微。脾氣不足或中焦氣機(jī)不利可能會(huì)導(dǎo)致精微物質(zhì)，包括血糖代謝失常。明代醫(yī)家樓英所著的《醫(yī)學(xué)綱目》中指出“蓋肺藏氣，肺無(wú)病則氣能管攝津液之精微，津液之精微者收養(yǎng)筋骨之血脈，余者溲，肺病則津液無(wú)氣管攝，津微亦隨之溲下”，導(dǎo)致氣陰俱損，闡述了消渴病形成氣陰兩虛證的病機(jī)。臨床研究顯示，益氣、養(yǎng)陰或益氣養(yǎng)陰法辨證治療T2DM 均取得較好療效，同時(shí)研究也表明其作用機(jī)制與調(diào)控、改善T2DM 患者炎癥因子水平相關(guān)，如TNF-α、IL-6 等[10-12]。

高糖時(shí)IL-1β 可激活β 細(xì)胞內(nèi)的激酶核因子-κB（NF-κB），而抑制NF-κB 通路則可使β 細(xì)胞免于包括糖毒性等多種損害，故高糖能引起β 細(xì)胞凋亡，是胰島炎癥的最早證據(jù)[13]。其機(jī)制為高糖誘導(dǎo)β 細(xì)胞表達(dá)促凋亡受體Fas，同時(shí)高糖誘導(dǎo)下β 細(xì)胞產(chǎn)生的IL-1β 進(jìn)一步上調(diào)，IL-1β 和FFAs 使得β 細(xì)胞功能受損，最終發(fā)生凋亡[5]。在人胰島培養(yǎng)物中，F(xiàn)FAs可以刺激IL-1β 與依賴IL-1β 的促炎因子分泌，而高糖聯(lián)合FFAs 則產(chǎn)生更強(qiáng)大的促炎效應(yīng)，IL-1β 的表達(dá)水平與T2DM 的炎癥狀態(tài)及胰島細(xì)胞凋亡密切相關(guān)[14]。本研究顯示，T2DM 患者h(yuǎn)s-CRP 水平顯著高于健康人群。其中氣陰兩虛T2DM 患者血IL-1β 以及TNF-α、IL-6 水平均顯著高于氣虛證和陰虛證者（P 均＜0.05），認(rèn)為氣陰兩虛證T2DM 患者的炎癥反應(yīng)程度更高；炎癥因子的測(cè)定有可能成為T2DM 氣陰兩虛證的客觀輔助診斷指標(biāo)。

T2DM 是一種自然免疫和慢性炎癥疾病，多種炎癥因子參與其中，能否通過(guò)對(duì)相關(guān)炎癥因子的量化測(cè)定來(lái)輔助診斷T2DM 的病程階段以及確定中醫(yī)證型，還需要進(jìn)一步通過(guò)大樣本多中心的按病程、分階段的研究。