氣相色譜法測定替比培南酯中的殘留溶劑

李 龍，顏世強(qiáng)，郭 偉*，鄭德強(qiáng)

（1.山東達(dá)因海洋生物制藥有限公司，山東 威海 264300；2.山東省藥學(xué)科學(xué)院，山東 濟(jì)南 250101 ）

替比培南酯是替比培南的前體藥物，口服后被酯酶水解釋放出母核替比培南，與細(xì)菌青霉素結(jié)合蛋白（PBP）結(jié)合，抑制細(xì)胞壁的合成，是可口服的碳青霉烯類抗生素。2009年首次在日本上市，本品具有廣譜抗菌性、活性強(qiáng)、副作用小等優(yōu)點(diǎn)，臨床上用于治療兒童上呼吸道與耳鼻喉感染的治療[1-3]。

本品在合成過程中使用到乙腈、乙醇、乙酸乙酯、正丁醇、異丙醇、甲基叔丁基醚、N,N-二甲基甲酰胺等有機(jī)溶劑，根據(jù)2015年版中國藥典規(guī)定，對于合成所使用的有機(jī)溶劑應(yīng)建立合理的檢測方法對殘留溶劑進(jìn)行監(jiān)控，并且其含量不得大于規(guī)定限度[4]。本文采用毛細(xì)管柱的氣相色譜法，以頂空方法進(jìn)樣，測定替比培南酯中殘留溶劑。進(jìn)行了精密度、回收率等方法學(xué)驗(yàn)證，結(jié)果表明本法簡單、快捷、靈敏、可靠。

1 儀器和試劑

1.1 儀器

安捷倫7890A型氣相色譜儀，7697E型頂空進(jìn)樣器，DB-624毛細(xì)管色譜柱（30 m×0.53 mm，3.0μm，安捷倫科技有限公司）。

1.2 試劑

替比培南酯（由本單位自制，批號：20130301，20130302，20130303）；乙腈（TEDIA，批號：16125072，含量：99.7 %）；無水乙醇（康科德，批號：160722，含量：99.9 %）；甲基叔丁基醚（TEDIA，批號：12110633，含量：99.0 %）；N,N-二甲基甲酰胺（科密歐，批號：20060701，含量：99.0 %）；乙酸乙酯，正丁醇，異丙醇（國藥集團(tuán)，批號：20150916，T20100517，20151204，含量分別為99.5 %，99.5 %，99.0 %）。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液的制備

2.1.1 對照品溶液1制備 精密稱取乙腈8.6 mg，無水乙醇、乙酸乙酯、正丁醇、異丙醇、甲基叔丁基醚各約100 mg，置入同一50 ml量瓶，加N,N-二甲基乙酰胺稀釋至刻度，搖勻，作為對照品貯備液。精密量取對照品貯備液3 ml，置入25 ml量瓶，加N,N-二甲基乙酰胺稀釋至刻度，搖勻，精密量取2.0 ml，置入頂空瓶，密封，即得。

2.1.2 對照品溶液2制備 精密稱取N,N-二甲基甲酰胺11 mg，置入已加入二甲基亞砜約40 ml的50 ml量瓶，再加二甲基亞砜稀釋至刻度，搖勻，精密量取2 ml，置入10 ml量瓶，加二甲基亞砜稀釋至刻度，搖勻，精密量取2 ml，置入10 ml頂空瓶，密封，即得。

2.1.3 供試品溶液1制備 精密稱取本品約100 mg，置入頂空瓶，精密加入N,N-二甲基乙酰胺2.0 ml，振搖使溶解，密封，即得。

2.1.4 供試品溶液2制備 精密稱取本品約0.5 g，置入10 ml量瓶，加入二甲基亞砜溶解并定稀釋刻度，精密量取2 ml，置入頂空瓶中，密封，即得。

2.2 色譜條件

2.2.1 乙腈、乙醇、乙酸乙酯、正丁醇、異丙醇、甲基叔丁基醚測定色譜條件 色譜柱為6 %氰丙基苯基-94 %二甲基聚硅氧烷為固定液的毛細(xì)管柱（DB-624，30 m×0.53 mm，3.0 μm）；柱溫為起始溫度40 ℃，以5 ℃/min速率升溫至70 ℃，再以30 ℃/min速率升溫至220 ℃，保持2 min；進(jìn)樣口溫度200℃；檢測器溫度為250 ℃；載氣為氮?dú)?，流速? ml/min。頂空瓶平衡溫度為90 ℃，平衡時(shí)間為30 min，進(jìn)樣體積為1.0 ml。

2.2.2N,N-二甲基甲酰胺測定的色譜條件 色譜柱為6 %氰丙基苯基-94 %二甲基聚硅氧烷為固定液的毛細(xì)管柱（DB-624，30 m×0.53 mm，3.0 μm）；柱溫為程序升溫，起始溫度100 ℃，以15 ℃/min速率升溫至230 ℃，保持3 min；進(jìn)樣口溫度220 ℃；檢測器溫度為250 ℃；載氣為氮?dú)?，流速? ml/min。頂空瓶平衡溫度為110 ℃，平衡時(shí)間為20 min，進(jìn)樣體積為1.0 ml。

3 結(jié)果與討論

3.1 頂空平衡溫度的選擇

本實(shí)驗(yàn)首先使用同一色譜條件檢測乙腈、乙醇、乙酸乙酯、正丁醇、異丙醇、甲基叔丁基醚、N,N-二甲基甲酰胺，頂空平衡溫度90 ℃，但N,N-二甲基甲酰胺在此平衡溫度下，難以揮發(fā)至檢出濃度。因此采用平衡溫度110 ℃單獨(dú)檢測N,N-二甲基甲酰胺[5-6]。

3.2 柱溫選擇

3.2.1 乙腈、乙醇、乙酸乙酯、正丁醇、異丙醇、甲基叔丁基醚 選取乙腈、乙醇、乙酸乙酯、正丁醇、異丙醇、甲基叔丁基醚對照品溶液，按表1對色譜柱柱溫進(jìn)行篩選，通過考察對照品的最小分離度，最終確定了選取色譜條件3作為乙腈、乙醇、乙酸乙酯、正丁醇、異丙醇、甲基叔丁基醚最終測定條件。

表1 升溫程序?qū)ψ钚》蛛x度影響

3.2.2N,N-二甲基甲酰胺 由于N,N-二甲基甲酰胺響應(yīng)較低[7-8]，通過改變頂空平衡溫度與頂空瓶體積，以期提高其響應(yīng)值，最終確定了條件4作為測定條件。

表2 頂空條件對N, N-二甲基甲酰胺峰面積影響

3.3 方法學(xué)驗(yàn)證[9]

3.3.1 線性 分別取乙腈、乙醇、乙酸乙酯、正丁醇、異丙醇、甲基叔丁基醚和N,N-二甲基甲酰胺對照品儲備液，配制濃度為6.85～34.24 μg/ml，0.083～0.416，0.083～0.415，0.083～0.415，0.083～0.416，0.084～0.420 mg/ml和1.089～10.89 μg/ml的對照品溶液，按2.2項(xiàng)色譜條件檢測，各組分的線性回歸方程及相關(guān)系數(shù)見表3。

表3 線性回歸方程及相關(guān)系數(shù)

3.3.2 精密度 按照分析步驟平行測定6份樣品，記錄峰面積（A）與保留時(shí)間（RT），計(jì)算RSD，結(jié)果見表4。

表4 殘留溶劑系統(tǒng)精密度試驗(yàn)結(jié)果

3.3.3 回收率 按2.1.1項(xiàng)方法制備對照品貯備液，精密量取對照品貯備液2.4，3.0，3.6 ml，用N,N-二甲基乙酰胺分別稀釋成25 ml溶液，稱取替比培南酯約100 mg，共9份，置10 ml頂空瓶中，分別加入上述對照品溶液2 ml，密封，作為回收率供試品溶液1，依法測定。按2.1.2項(xiàng)方法制備對照品貯備液，精密稱取替比培南酯約0.5 g，共9份，置入10 ml量瓶，分別加入上述溶液1.6，2.0，2.4 ml，各3份，加入二甲基亞砜溶解并定容至刻度，搖勻，作為回收率供試品溶液2，精密量取回收率供試品溶液2各2 ml置入10 ml頂空瓶，依法測定，結(jié)果見表5。

3.3.4 檢測限 量取對照品貯備液，進(jìn)行適當(dāng)稀釋，使各成分產(chǎn)生約3倍基線噪音的信號。乙醇、異丙醇、乙腈、甲基叔丁基醚、乙酸乙酯、正丁醇和N,N-二甲基甲酰胺的最低檢測濃度分別為0.84，0.83，0.173，0.083，0.167，2.084和1.089 μg/ml。

表5 回收率試驗(yàn)結(jié)果

3.4 樣品分析

按上述方法對多批樣品中殘留溶劑進(jìn)行檢測，采用外標(biāo)法進(jìn)行定量，結(jié)果見表6。

表6 有機(jī)殘留溶劑測定結(jié)果