丁香酚對花鱸幼魚的麻醉效果

虞為 吳進喜 林黑著 文國樑 曹煜成 黃小林 黃忠 楊育凱 李濤 趙旺

摘要：為研究丁香酚對花鱸（Lateolabrax maculatus）幼魚的麻醉效果。采用靜水方法在水溫（27±1）℃下研究不同質(zhì)量濃度丁香酚（20、25、30、40、50、60、80 mg/L 和 100 mg/L）對規(guī)格為（21.6±2.75） cm長和（1103±30.67） g重的花鱸麻醉效果和呼吸頻率的影響。25～100 mg/L 質(zhì)量濃度的丁香酚均能使花鱸進入深度麻醉期，且麻醉濃度與平均入麻時間呈負相關(guān)，與平均復(fù)蘇時間成正相關(guān);丁香酚質(zhì)量濃度為50 mg/L時，麻醉效果較好。低濃度丁香酚20 mg/L對花鱸呼吸頻率影響不明顯。在質(zhì)量濃度達到40～100 mg/L時，魚體由麻醉期（A3）進入深度麻醉期（A4），呼吸頻率迅速降低。以50 mg/L丁香酚將花鱸麻醉后再在空氣中進行暴露，暴露時間與復(fù)蘇時間呈正相關(guān)。暴露時間在2～30 min 范圍內(nèi)的復(fù)蘇率為100 %。當時間增加至35、40和45 min 時，復(fù)蘇率降低至66%，33%和0。且暴露時間大于20 min花鱸只能進入恢復(fù)期3期（R3）。因此，50 mg/L 的丁香酚麻醉液是花鱸幼魚的理想麻醉濃度。

關(guān)鍵詞：丁香酚;花鱸（Lateolabrax maculatus）;幼魚;麻醉

花鱸（Lateolabrax maculatus），又稱海鱸，隸屬鱸形目鮨科花鱸屬，為肉食性魚類，肉質(zhì)細嫩，營養(yǎng)豐富，深受消費者的喜愛，是重要的海水經(jīng)濟魚類品種之一[1]。在花鱸養(yǎng)殖與流通過程中，多見的離水操作，如捕撈和搬運過程等各種人工脅迫均致使魚體出現(xiàn)相應(yīng)損傷，從而對后續(xù)魚的成活率造成影響。事實上，為減少人為操作帶來的損傷和死亡率，麻醉劑起著舉足輕重的作用;它不僅能使魚體鎮(zhèn)靜，還能緩解魚類受驚，從而減少魚體表發(fā)生碰撞擦傷的情況;除此之外，麻醉條件下還能降低魚體代謝耗能，維持水體質(zhì)量。

間氨基苯甲酸乙酯甲磺酸鹽（MS-222）與丁香酚作為目前常用的漁用麻醉劑已被廣泛使用，目前斑點叉尾鮰Ictalurus punctatus、黑鯛Sparus macrocephlus、中華鱘Acipenser sinensis、大西洋鮭Salmo salar、斑馬魚Danio rerio、鯉魚Cyprinus carpio、羅非魚Oreochromis spp.、大黃魚Larimichthys crocea等[2-7]多種魚已經(jīng)完成了相關(guān)麻醉試驗的研究，而對于丁香酚麻醉花鱸效應(yīng)的相關(guān)研究未見報道。本研究采用不同質(zhì)量濃度的丁香酚對花鱸幼魚進行麻醉試驗，通過觀察花鱸幼魚的行為反應(yīng)確定適合花鱸的最佳丁香酚濃度，為花鱸的增殖放流和養(yǎng)殖生產(chǎn)提供有效的參考。

1材料與方法

1.1實驗材料

丁香酚（C10H12O2）（2- 甲氧- 4- 丙烯基酚）為無色或蒼黃色液體，不溶于水，易溶于醇類等有機溶劑，相對分子質(zhì)量為 164.20，純度大于99%，購置于上海阿拉丁生化科技股份有限公司?；|魚選自中國水產(chǎn)科學(xué)研究院南海水產(chǎn)研究所深圳試驗基地，水源為純海水，水溫保持在 （28±1）℃，水體溶氧 ≥6.8 mg/L，pH 6.5～7.5。試驗魚活力強、體格健壯、體表完整、體色正常。丁香酚和無水乙醇按照體積比例為 1∶9配置為母液備用，麻醉試驗操作時現(xiàn)配，配置藥液充分攪拌均勻后靜置 15 min。試驗容器的規(guī)格為： 15 cm×15 cm×30 cm，連續(xù)充氧曝氣，保持試驗水體的溶氧在7 mg/L以上，水溫27 ℃左右。實驗時間為2019年10月18～20日。

1.2實驗方法

使用高質(zhì)量濃度丁香酚在靜水條件下對體質(zhì)量接近的花鱸幼魚展開麻醉預(yù)試驗。麻醉實驗前花鱸幼魚停食24 h。加入麻醉劑的實驗組有10尾魚，每尾魚在操作過程中被單獨觀察并只用1次，實驗過程中重復(fù)5尾魚需要更換新鮮水體。麻醉試驗開始1 h以內(nèi)，將不能進入更深麻醉狀態(tài)或停止呼吸的魚轉(zhuǎn)入復(fù)蘇桶中至恢復(fù)原來狀態(tài)。參考Hikasa等[8]以及Mcfarland和Klontz等[9]在研究中的標準且結(jié)合花鱸幼魚的實際情況，將試驗的麻醉階段分為 A0～A4 5個等級，復(fù)蘇階段被劃分為R1～R4 4個階段，具體劃分標準見表1。

1.2.1各濃度丁香酚對花鱸幼魚麻醉的影響麻醉試驗魚的平均體質(zhì)量為（110.3±30.67）g，實驗組均設(shè)3個平行，每個平行組10尾花鱸幼魚。試驗中丁香酚質(zhì)量濃度為：20、25、30、40、50、60、80 mg/L和100 mg/L，試驗過程中記錄花鱸的麻醉時間和復(fù)蘇時間。試驗結(jié)束后在海水中暫養(yǎng)3天，觀察記錄成活率。

1.2.2丁香酚對花鱸幼魚呼吸頻率的影響試驗中的花鱸幼魚為45尾，隨機平均分至9個組中，分別放入丁香酚質(zhì)量濃度為 20、30、40、50、60、80 mg/L和 100 mg/L的水體中，測定其 10～300 s內(nèi)鰓蓋的張合次數(shù)。幼魚在深度麻醉后迅速撈出并轉(zhuǎn)至清水復(fù)蘇，記錄試驗中花鱸的復(fù)蘇尾數(shù)和死亡尾數(shù)。

1.2.3空氣暴露時間對深度麻醉魚體復(fù)蘇的影響花鱸幼魚在質(zhì)量濃度 50 mg/L深度麻醉，在空氣中暴露 2、4、6、8、10、15、20、25、30、35、40和45 min，隨后迅速轉(zhuǎn)至純海水中進行復(fù)蘇，記錄花鱸幼魚的復(fù)蘇時間、復(fù)蘇數(shù)以及死亡數(shù)。

1.2.4數(shù)據(jù)分析通過GraphPad Prism 8和Excel 2016等軟件對數(shù)據(jù)進行分析處理，用Duncan's 法對數(shù)據(jù)進行多重比較，組間差異顯著時P<0.05。

2結(jié)果與分析

2.1花鱸幼魚在不同質(zhì)量濃度丁香酚處理下麻醉效果

根據(jù)試驗結(jié)果記錄，丁香酚濃度為20 mg/L時，花鱸幼魚無法進入深度麻醉。丁香酚濃度在25～100 mg/L范圍中，隨著丁香酚質(zhì)量濃度的增加，花鱸進入麻醉的時間逐漸遞減，但復(fù)蘇時間卻逐漸遞增。麻醉時間無明顯變化時（P>0.05） ，其質(zhì)量濃度為50、60、80 mg/L。在質(zhì)量濃度為50、60 mg/L時，復(fù)蘇時間無明顯變化（P>005）。復(fù)蘇率均為100%，3 d后死亡率為0。見圖1。

2.2花鱸幼魚在不同濃度丁香酚處理下的呼吸頻率

在5 min之內(nèi)，在20 mg/L和30 mg/L的丁香酚麻醉組，鱸魚呼吸頻率變化趨勢相似且均未停止呼吸。當丁香酚質(zhì)量濃度為 40 mg/L和50 mg/L時，花鱸90秒進入深度麻醉A4期;質(zhì)量濃度為 60、80 mg/L和100 mg/L時，40秒左右進入深度麻醉A4期;隨后呼吸頻率降低為0。見圖2。

2.3空氣中的暴露時長對深度麻醉花鱸幼魚復(fù)蘇的影響

在 0～40 min 時間內(nèi)，隨著魚體在空氣中暴露時長增加，花鱸幼魚復(fù)蘇時間依次遞增，空氣中暴露0～8 min內(nèi)、10～30 min內(nèi)以及35～40 min內(nèi)，復(fù)蘇時間差異不顯著（P>0.05）。空氣中暴露10 min復(fù)蘇時間較之前顯著增加（P<005）;空氣中暴露35 min復(fù)蘇時間也出現(xiàn)了陡增;暴露時間小于30 min花鱸魚存活率100%， 當時間增加至35，40和45 min 時，復(fù)蘇率分別為66 %，33%和0。見圖3、表2。

同列數(shù)中具同小寫字母則意味組間無顯著差異，具不同小寫字母的表示組間差異顯著（P<0.05）。

3討論

3.1丁香酚對花鱸幼魚麻醉的有效質(zhì)量濃度

中國作為世界上最大水產(chǎn)養(yǎng)殖國，在水產(chǎn)養(yǎng)殖生產(chǎn)以及科研活動過程中，麻醉劑被廣泛使用并且起重要作用。約有數(shù)十種魚類麻醉劑被熟知和使用，包括日常使用的丁香酚等[10]。麻醉劑在現(xiàn)代水產(chǎn)養(yǎng)殖和科研動物福利方面發(fā)揮重要作用。麻醉劑能夠使試驗和生產(chǎn)中魚體保持鎮(zhèn)靜，緩解各種人為脅迫所帶來的不良應(yīng)激反應(yīng)，科學(xué)合理使用麻醉劑對于高效順利完成各種工作極其重要;此外，在魚類的生產(chǎn)運輸過程中使用麻醉劑可以降低魚體的新陳代謝，減少應(yīng)激帶來的傷害和機體能量消耗，提高運輸過程中魚的成活率，從而有效減少成本。近些年，丁香酚由于具有市場價格優(yōu)越，麻醉效果高且使用較安全的特點，已被廣泛應(yīng)用于水產(chǎn)行業(yè)。

本研究中，隨著丁香酚質(zhì)量濃度的升高，實驗花鱸幼魚進入麻醉時間縮短，其復(fù)蘇至正常狀態(tài)的時間延長。這與丁香酚對蘇氏圓腹魚芒Pangasius sutchi、長薄鰍Leptobotia elongat和日本黃姑魚Nibea japonica等麻醉效果的研究結(jié)果呈現(xiàn)一致[11-13]。本階段結(jié)果顯示丁香酚質(zhì)量濃度為25～100 mg/L的麻醉液均可使花鱸幼魚進入麻醉階段，并且能夠完全復(fù)蘇。同時，Marking 等[14]認為理想麻醉劑的標準是180 s內(nèi)進入麻醉、并且300 s秒內(nèi)復(fù)蘇，因此，40～60 mg /L 的丁香酚麻醉液是花鱸幼魚的理想麻醉濃度區(qū)間，此研究結(jié)果同丁香酚對長薄鰍幼魚的麻醉試驗。此外，魚體規(guī)格、水溫和水質(zhì)等眾多因素也會影響麻醉效果。

3.2丁香酚對花鱸幼魚呼吸頻率的影響

不同麻醉程度下，魚的呼吸頻率受影響且呈現(xiàn)差異化。麻醉試驗中藥物先進入血液循環(huán)系統(tǒng)再進入中樞神經(jīng)系統(tǒng)，使魚行為能力和呼吸頻率均出現(xiàn)顯著變化。低濃度的丁香酚影響了花鱸幼魚的運動狀態(tài)和感覺，試驗前期花鱸呼吸頻率并無太大變化。相反，高濃度丁香酚明顯降低了魚的呼吸頻率。魚呼吸中樞麻醉對丁香酚有更高濃度的閾值。試驗觀察顯示，呼吸頻率降低的階段魚基本處在深度麻醉的過程（A3～A4）中，此階段花鱸魚體的呼吸中樞可能受到了抑制。本研究表明，各質(zhì)量濃度的丁香酚處理下的花鱸幼魚呼吸頻率于后期均表現(xiàn)為下降的趨勢，同鱖Siniperca chuatsi、長薄鰍Leptobotia elongate，Bleeker、圓斑星鰈Verasper variegates、鯉Cyprinus carpio等[11，15-17]的研究結(jié)果一致，且隨著丁香酚質(zhì)量濃度的不斷升高，花鱸呼吸頻率下降速度越來越快。當麻醉劑濃度 ≤30 mg/L時，花鱸幼魚呼吸頻率呈漸變趨勢下降，后期趨于穩(wěn)定;而丁香酚濃度 ≥40 mg/L時，試驗花鱸幼魚呼吸頻率迅速下降，進入休克期;因此，呼吸頻率受麻醉藥物影響較大。

3.3空氣中暴露時間對花鱸幼魚復(fù)蘇的影響

魚體在空氣中暴露常會出現(xiàn)在科研和生產(chǎn)過程中。探索深度麻醉的花鱸魚體復(fù)蘇情況與空氣中暴露時間長短的關(guān)系時，對于活體花鱸幼魚無水操作具有重要的參考價值和指導(dǎo)意義。本研究中空氣暴露后復(fù)蘇實驗的丁香酚質(zhì)量濃度為50 mg/L，隨著暴露時間的增加而復(fù)蘇所用的時間也增加，這與丁香酚對鯽魚 Carassius auratus的[18]麻醉結(jié)果相反，但與丁香酚對大黃魚Pseudosciaena crocea[19]和暗紋東方鲀Takifugu obscurus幼魚[20]的結(jié)果相同，極有可能是因為魚種類不同所導(dǎo)致，具體差異有待日后進一步研究和探索。同時暴露時間在30 min內(nèi)，花鱸幼魚復(fù)蘇率為100%。當暴露時間增加至35，40和45 min 時，復(fù)蘇率降低至66 %，33%和0，即此時花鱸幼魚死亡率分別為33%，67%和100%。因此，麻醉后對花鱸幼魚進行各種離水操作時，其離水時間不應(yīng)該超過30 min，此時間段內(nèi)可確保花鱸幼魚在操作中的安全。

本研究為花鱸資源調(diào)查、人工試驗操作及運輸提供了有效的理論參考。此外，仍然有待進一步開展丁香酚作為麻醉劑在不同目的（運輸、稱重、采卵等） 、不同物種和不同規(guī)格水產(chǎn)動物等方面差異的試驗研究。

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Anesthetic Effect of Eugenol on Lateolabrax maculatus

YU Wei1，2，WU Jinxi1，3， LIN Heizhao1，2，WEN Guoliang1，2，CAO Yucheng1，2，

HUANG Xiaolin1，2，HUANG Zhong1，2，YANG Yukai1，2，LI Tao1，2，ZHAO Wang1，2

（1.Key Laboratory of South China Sea Fishery Resources Exploitation & Utilization，Ministry of Agriculture and Rural Affairs，

South China Sea Fisheries Research Institute，Chinese Academy of Fishery Sciences，Guangzhou，510300，China;

2.Shenzhen Base of South China Sea Fisheries Research Institute，Chinese Academy of Fishery Sciences，Shenzhen，518120，China;

3.College of Fisheries，Guangdong Ocean University，Zhanjiang，524088，China）

Abstract：In order to study the anesthetic effect of eugenol on juvenile Lateolabrax maculatus，fish with different body weight of （110.3±30.67） g were exposed to different mass concentrations of eugenol （20、25、30、40、50、60、80 mg/L and 100 mg/L） at water temperature of 27 ℃ by hydrostatic method.The concentration of 25～100 mg/L of eugenol could make L.maculatus into the anesthesia period，the anesthesia concentration and the average time into anesthesia was negatively correlated，the concentration of anesthesia and the average recovery time was positively correlated.When the mass concentration of eugenol was 50 mg/L，the anesthetic effect was better.20 mg/L eugenol had no significant effect on the respiratory rate of the fish.When the mass concentration reached 40～100 mg/L，the fish from the anaesthesia stage （A3） turned into the deep anaesthesia stage （A4），and the respiratory rate rapidly decreased.After anaesthesia，the L.maculatus was exposed in the air，and the exposure time was positively correlated with the recovery time.The recovery rate within 2～30 min exposure was 100%.When the time increased to 35，40 and 45 min，the recovery rate decreased to 66 %，33% and 0.And if the exposure time is more than 20 minutes， the L.maculatus can only reach the recovery period R3.Therefore，50 mg/L eugenol anaesthetic solution is the ideal anaesthetic concentration for juvenile L.maculatus.

Key words：eugenol;Lateolabrax maculatus;juvenile fish;anesthesia（收稿日期：2020-04-08）

基金項目：中國水產(chǎn)科學(xué)研究院南海水產(chǎn)研究所中央級公益性科研院所基本科研業(yè)務(wù)費專項資金資助（2018ZD01）;深圳市科技計劃知識創(chuàng)新基礎(chǔ)研究項目（編號：JCYJ 20170817103947002）;深圳市大鵬新區(qū)科技創(chuàng)新和產(chǎn)業(yè)發(fā)展專項資金資助項目（編號：PT202001-21）;;廣東省現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系創(chuàng)新團隊建設(shè)專項資金（編號：2019KJ149， 2019KJ143）。

作者簡介：虞為（1986-），男，助理研究員，研究方向：動物營養(yǎng)與飼料科學(xué)研究。E-mail：540749772@qq.com。

通信作者：林黑著（1965-），男，博士生導(dǎo)師，研究方向：動物營養(yǎng)與飼料科學(xué)研究。E-mail：linheizhao@163.com。DOI：10.3969/j.issn.1004-6755.2020.04.002