乙肝病毒核心抗原特異性CD8+細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞及相關(guān)細(xì)胞因子與HBV-DNA、ALT的相關(guān)性研究

劉洋　鞏宇寧　楊國香　李媛

【摘要】 目的 探討乙型肝炎（乙肝）病毒核心抗原特異性CD8+細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞及相關(guān)細(xì)胞因子與乙型肝炎病毒脫氧核糖核酸（HBV-DNA）、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）的相關(guān)性。方法 選擇47例急性乙肝患者作為急性乙肝組， 同期39例慢性乙肝活動期患者作為慢性乙肝組， 同期28例健康體檢者作為對照組， 比較三組核心抗原特異性CD8+細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞及相關(guān)因子（Core18-27、Env335-343、Pol 575-583）、HBV-DNA、ALT、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）、谷氨?；D(zhuǎn)移酶（GGT）、總膽紅素（TBIL）水平， 分析乙肝病毒核心抗原特異性CD8+細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞及相關(guān)因子與HBV-DNA、ALT的相關(guān)性。結(jié)果 急性乙肝組Core18-27、Env335-343、Pol 575-583水平分別為（1.24±0.51）%、（0.09±0.01）%、（0.09±0.02）%， 高于對照組的（0.09±0.02）%、（0.06±0.02）%、（0.07±0.02）%和慢性乙肝組的（0.05±0.01）%、（0.04±0.01）%、（0.03±0.01）%， 且對照組均高于慢性乙肝組， 差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。急性乙肝組HBV-DNA、ALT、AST 、GGT及TBIL水平分別為（21.59±4.32）×103 copies/ml、（85.35±5.49）U/L、（120.59±12.19）U/L、（125.98±13.42）U/L、（40.39±1.32）μmol/L， 均高于慢性乙肝組的（13.21±3.29）×103 copies/ml、（62.14±5.05）U/L、（87.56±6.87）U/L、（102.12±10.06）U/L、（25.49±1.21）μmol/L和對照組的0、（32.21±3.25）U/L、（30.29±3.41）U/L、（33.49±3.09）U/L、（12.59±0.14）μmol/L， 且慢性乙肝組高于對照組， 差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。Core18-27、Env335-343和Pol 575-583與HBV-DNA、AST 、ALT、GGT及TBIL水平均呈正相關(guān)（P<0.05）。結(jié)論 乙肝病毒核心抗原特異性CD8+細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞及相關(guān)細(xì)胞因子與HBV-DNA、ALT存在相關(guān)性， 加強其表達水平測定反映疾病嚴(yán)重程度， 有助于指導(dǎo)臨床治療。

【關(guān)鍵詞】 核心抗原特異性CD8+細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞;乙型肝炎病毒脫氧核糖核酸;谷丙轉(zhuǎn)氨酶

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2020.11.015

研究表明[1]， 在急性自限性乙肝患者中， 非特異性免疫反應(yīng)與特異性免疫反應(yīng)對于疾病的控制具有重要的作用， 肝臟的損傷亦是免疫反應(yīng)直接引起， 而病毒并未造成肝細(xì)胞損傷。肝細(xì)胞中乙肝病毒的清除更多依賴于乙肝病毒抗原表面特異性CD8+細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞， 但是其在乙肝病毒中的表達及與HBV-DNA、ALT存在相關(guān)性研究較少[2]。為此， 本研究探討乙肝病毒核心抗原特異性CD8+細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞及相關(guān)細(xì)胞因子與HBV-DNA、ALT之間的相關(guān)性， 報告如下。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 選取2017年6月～2019年10月本院收治的47例急性乙肝患者作為急性乙肝組， 男25例，

女22例;年齡20～56歲， 平均年齡（35.39±6.88）歲。選擇同期收治的39例慢性乙肝活動期患者作為慢性乙肝組， 男21例， 女18例;年齡23～58歲， 平均年齡（36.11±7.30）歲。選擇同期28例健康體檢者作為對照組， 男15例， 女13例;年齡22～59歲， 平均年齡（36.09±7.64）歲。三組一般資料比較， 差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）， 具有可比性。

1. 2 方法 ①核心抗原特異性CD8+細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞及相關(guān)因子水平測定。標(biāo)本采集：急性乙肝組、慢性乙肝組入院后次日取外周靜脈血5 ml， 對照組健康體檢當(dāng)天取外周靜脈血5 ml。采用流式細(xì)胞儀測定核心抗原特異性CD8+細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞及相關(guān)因子水平。②外周血清HBV-DNA水平測定。采用實時熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）檢測儀測定三組外周血清HBV-DNA水平， 試劑由達安基因診斷中心提供， 嚴(yán)格按試劑說明書操作。③肝功能水平測定。取上述分離的血清標(biāo)本， 采用全自動生化分析儀測定三組肝功能（ALT、AST、GGT及TBIL等指標(biāo)）。

1. 3 觀察指標(biāo) 比較三組核心抗原特異性CD8+細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞及相關(guān)因子（Core18-27、Env335-343、Pol 575-583）、HBV-DNA、ALT、AST 、GGT、TBIL水平， 分析乙肝病毒核心抗原特異性CD8+細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞及相關(guān)因子與HBV-DNA、ALT的相關(guān)性。

1. 4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS18.0統(tǒng)計學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)。計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（ x-±s）表示， 采用t檢驗;計數(shù)資料以率（%）表示， 采用χ2檢驗;采用Pearson相關(guān)性分析軟件對乙肝病毒核心抗原特異性CD8+細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞及相關(guān)因子與HBV-DNA、ALT進行相關(guān)性分析。P<0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2. 1 三組核心抗原特異性CD8+細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞及相關(guān)因子比較 急性乙肝組Core18-27、Env335-343、Pol 575-583水平分別為（1.24±0.51）%、（0.09±0.01）%、（0.09±0.02）%， 高于對照組的（0.09±0.02）%、（0.06±0.02）%、（0.07±0.02）%和慢性乙肝組的（0.05±0.01）%、（0.04±0.01）%、（0.03±0.01）%， 且對照組均高于慢性乙肝組， 差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。見表1。

2. 2 三組HBV-DNA、ALT、AST、GGT及TBIL水平比較 急性乙肝組HBV-DNA、ALT、AST、GGT及TBIL水平分別為（21.59±4.32）×103 copies/ml、（85.35±5.49）U/L、（120.59±12.19）U/L、（125.98±13.42）U/L、（40.39±1.32）μmol/L， 均高于慢性乙肝組的（13.21±3.29）×103 copies/ml、（62.14±5.05）U/L、（87.56±6.87）U/L、（102.12±10.06）U/L、（25.49±1.21）μmol/L和對照組的0、（32.21±3.25）U/L、（30.29±3.41）U/L、（33.49±3.09）U/L、（12.59±0.14）μmol/L， 且慢性乙肝組高于對照組， 差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。見表2。

2. 3 乙肝病毒核心抗原特異性CD8+細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞及相關(guān)因子與HBV-DNA、ALT的相關(guān)性分析Core18-27、Env335-343和Pol575-583與HBV-DNA、AST、ALT、GGT及TBIL水平均呈正相關(guān)（P<0.05）。見表3。

3 討論

本研究結(jié)果顯示， 急性乙肝組Core18-27、Env335-343、Pol575-583水平均高于對照組和慢性乙肝組， 且對照組均高于慢性乙肝組， 差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。說明乙肝病毒核心抗原特異性CD8+細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞及相關(guān)細(xì)胞因子在病毒清除及肝損傷中呈高表達， 能直接參與疾病的發(fā)生、發(fā)展。分析原因， 急性自限性肝炎、肝內(nèi)自然殺傷細(xì)胞（NK細(xì)胞）、自然殺傷T細(xì)胞（NKT）， 在分泌細(xì)胞因子、感染細(xì)胞的溶細(xì)胞作用、活化肝內(nèi)免疫細(xì)胞、細(xì)胞因子中發(fā)揮了重要作用[3， 4]。但是， 靶細(xì)胞內(nèi)仍存在病毒復(fù)制， 能激活足夠數(shù)量特異性細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞， 并能破壞靶肝細(xì)胞， 釋放病毒抗原， 從而能增強抗病毒免疫， 最終完全清除病毒[5， 6]。慢性乙肝病毒感染者由于感染年限相對較長， 具有免疫能力的患者機體伴有免疫紊亂， 多表現(xiàn)為弱乙肝病毒特異性T細(xì)胞免疫反應(yīng)， 導(dǎo)致肝內(nèi)免疫損傷強烈， 難以有效的清除病毒， 導(dǎo)致外周血乙肝病毒特異性細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞比率相對較低或檢測不到[7]。

本研究中， 急性乙肝組HBV-DNA、ALT、AST、GGT及TBIL水平均高于慢性乙肝組和對照組， 慢性乙肝組高于對照組， 差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。說明在急性、慢性肝炎患者中常伴有 HBV-DNA、ALT、AST、GGT及TBIL水平異常， 能反映患者的疾病嚴(yán)重程度。為了進一步分析乙肝病毒核心抗原特異性CD8+細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞及相關(guān)細(xì)胞因子與HBV-DNA、ALT的關(guān)系， 本研究中對其進行相關(guān)性分析， 結(jié)果表明：Core18-27、Env335-343和Pol575-583與HBV-DNA、AST 、ALT、GGT及TBIL水平均呈正相關(guān)（P<0.05）。因此， 乙肝病毒急性/慢性感染患者加強核心抗原特異性CD8+細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞及相關(guān)細(xì)胞因子測定能反映患者疾病嚴(yán)重程度， 有助于指導(dǎo)臨床治療。

綜上所述， 乙肝病毒核心抗原特異性CD8+細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞及相關(guān)細(xì)胞因子在病毒清除及肝損傷中發(fā)揮作用， 且與HBV-DNA、ALT存在相關(guān)性， 加強其表達水平測定反映疾病嚴(yán)重程度， 有助于指導(dǎo)臨床治療。

參考文獻

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[收稿日期：2020-03-02]

作者單位：010017 蒙古自治區(qū)人民醫(yī)院檢驗科

通訊作者：李媛