膀胱癌組織中VEGF、Survivin和COX-2的表達(dá)與意義研究

（遼寧省營(yíng)口市中心醫(yī)院病理科，遼寧 營(yíng)口 115000）

膀胱癌指膀胱內(nèi)細(xì)胞惡性過度生長(zhǎng)，屬于泌尿系統(tǒng)常見疾病。該疾病發(fā)病屬于多步驟形成、多基因參與、多因素混合的過程，外在環(huán)境作用及異?；蛐头e累可造成惡性表型的出現(xiàn)?；颊叱霈F(xiàn)膀胱癌后，會(huì)出現(xiàn)腎功能損害、腰痛、尿痛、尿急、血尿等癥狀，對(duì)患者身體健康及生活質(zhì)量造成嚴(yán)重影響。Survivin指腫瘤特異性凋亡，對(duì)惡性腫瘤中異常表達(dá)進(jìn)行抑制，血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子可對(duì)新血管生長(zhǎng)進(jìn)行促進(jìn)，提升血管通透性[1]。惡性腫瘤疾病中，血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子表達(dá)十分明顯，與預(yù)后、侵襲轉(zhuǎn)移等具有密切聯(lián)系，認(rèn)為與腫瘤轉(zhuǎn)移灶生長(zhǎng)中的血管及腫瘤自身有聯(lián)系[2]。通過對(duì)膀胱癌組織中血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子、癌組織存活蛋白、環(huán)氧化酶-2進(jìn)行檢測(cè)，觀察血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子、癌組織存活蛋白、環(huán)氧化酶-2的意義與表達(dá)。

1 資料與方法

1.1 一般資料：時(shí)間為2017年1月至2018年1月，研究對(duì)象為以我院接收的膀胱癌患者，例數(shù)為60例，其中男40例，女20例，年齡35～82歲，平均年齡（57.54±2.34）歲；所有患者均通過病病理及手術(shù)證實(shí)，術(shù)前為實(shí)施化療，放療，取材手術(shù)標(biāo)本后在液氮罐中進(jìn)行保存。

1.2 方法：酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)Survivin抗體，使用福州邁新生物技術(shù)開發(fā)公司的酶聯(lián)免疫吸附法試劑盒及VEGF抗體進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子、癌組織存活蛋白、環(huán)氧化酶-2嚴(yán)格按照酶聯(lián)免疫吸附法說明書操作步驟實(shí)施。使用Western方法對(duì)膀胱癌組織中血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子、癌組織存活蛋白、環(huán)氧化酶-2含量進(jìn)行檢測(cè)，根據(jù)其說明書嚴(yán)格實(shí)施。使用 Gel-oc凝膠成像對(duì)Western blot條帶進(jìn)行掃描，對(duì)條帶面積及單位吸光度值進(jìn)行計(jì)算，各實(shí)驗(yàn)點(diǎn)的總吸光度值與對(duì)照組進(jìn)行比較，得出值。RT-PCR：對(duì)各組膀胱癌組織總RNA并定量進(jìn)行提取，各組取相同RNA反轉(zhuǎn)錄后，實(shí)施PCR。將5μLPCR擴(kuò)增的產(chǎn)物在2%的瓊脂糖凝膠上實(shí)施電泳。取出凝膠，對(duì)結(jié)果進(jìn)行記錄。使用凝膠電泳軟件進(jìn)行定量分析，β-actin條帶平均光密度比較目的基因，表示目的基因mRNA的相對(duì)表達(dá)量。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：使用SPSS17.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，使用t來進(jìn)行計(jì)量資料的檢驗(yàn)及比較，并用（）進(jìn)行表示，使用χ2來進(jìn)行計(jì)數(shù)資料的檢驗(yàn)比較，并用率（%）來進(jìn)行表示，（P＜0.05）表示差異十分顯著，存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 COX-2、Sur-vivin檢測(cè)結(jié)果：酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)顯示Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ期膀胱癌組織的 COX-2、Sur-vivin具有明顯表達(dá)。對(duì)比Ⅰ期，Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ期膀胱癌組織 COX-2、Sur-vivin陽(yáng)性細(xì)胞百分率及光密度值明顯上升（P＜0.01），COX-2、Sur-vivin在Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ期膀胱癌組織中表達(dá)明顯，Ⅳ期中最為明顯。蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)COX-2、Sur-vivin結(jié)果比較免疫組（P＜0.05）。TR-PCR檢測(cè)大鼠腦組織COX-2、Sur-vivin的表達(dá)水平比較蛋白質(zhì)（P＜0.05）。見表1。

2.2 VEGF檢查結(jié)果：Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ期膀胱癌組織中VEGF表達(dá)明顯，Ⅳ期最明顯（P＜0.05）。RT-PCR檢測(cè)蛋白質(zhì)與VEGFm RNA表達(dá)一致，在Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ期膀胱癌組織中VEGF表達(dá)明顯，Ⅳ期中最為明顯（P＜0.05）。進(jìn)行直線相關(guān)分析顯示，Sur-vivin、COX-2與VEGF的蛋白質(zhì)印跡法OD值呈正相關(guān)（r=0.485，P=0.0034；r=0.478，P=0.0041）。

3 討 論

膀胱癌指出現(xiàn)于膀胱黏膜上的一種惡性腫瘤，臨床上較為常見屬于泌尿系統(tǒng)疾病。COX（環(huán)氧化酶）為合成前列腺素的限速酶，在體內(nèi)包括COX-2、COX-1兩種亞型。資料顯示COX-2（環(huán)氧化酶-2）可能會(huì)促進(jìn)癌腫的發(fā)生，主要出現(xiàn)于患者病理組織中，如炎癥、腫瘤等。腫瘤出現(xiàn)轉(zhuǎn)移、浸潤(rùn)的必要條件為新生血管[3]。

表1 COX-2、Sur-vivin檢測(cè)結(jié)果對(duì)比（）

表1 COX-2、Sur-vivin檢測(cè)結(jié)果對(duì)比（）

注：#比較Ⅰ期，P＜0.05，比較Ⅱ、Ⅲ期，P＜0.05

腫瘤細(xì)胞分泌的VEGF為對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖造成刺激的重要因子之一，與其他實(shí)體瘤相同，膀胱癌組織中VEGF具有顯著表達(dá)，并且膀胱癌的轉(zhuǎn)移與發(fā)生與VEGF關(guān)系密切，可將其作為胱癌預(yù)后及轉(zhuǎn)移的重要指標(biāo)[4]。Survivin為腫瘤特異性凋亡抑制蛋白，治療腫瘤可使用干擾其作用和抑制其表達(dá)的方式，分子靶向單獨(dú)治療與其他抗癌治療方式共同使用，在臨床上應(yīng)用效果顯著。表現(xiàn)為可對(duì)腫瘤的生長(zhǎng)及形成進(jìn)行抑制[5]。并且在癌細(xì)胞株中轉(zhuǎn)染Survivin陰性突變質(zhì)?？蓪?duì)細(xì)胞凋亡進(jìn)行誘導(dǎo)。Livin為IAP新成員，在大部分人類實(shí)體瘤組織、細(xì)胞中及人的胚胎組織中均有特異表達(dá)。在正常人組織中表達(dá)較低，說明Livin可能與腫瘤進(jìn)展具有密切聯(lián)系[6]。這種腫瘤表達(dá)上的特異性使其變成最近臨床上腫瘤基因治療及診斷的新靶點(diǎn)。出現(xiàn)Survivin則說明腫瘤臨床分期高，組織分化不良[7]。本次研究檢測(cè)不同臨床分期的膀胱癌患者癌組織，均顯示有COX-2、Sur-vivin的表達(dá)，隨著患者病情加重，COX-2、Sur-vivin表達(dá)呈逐漸上升趨勢(shì)，其中Ⅳ期表達(dá)最為明顯[8]。膀胱癌組織中COX-2、Sur-vivin強(qiáng)度與膀胱癌臨床分期之間的關(guān)系呈正相關(guān)。膀胱癌預(yù)后越差，臨床分期越遲，COX-2、Sur-vivin表達(dá)強(qiáng)度越強(qiáng)[9]。更加證實(shí)COX-2、Sur-vivin對(duì)患者膀胱癌發(fā)病機(jī)制進(jìn)行參與。本次研究顯示，Ⅳ期中COX-2、Sur-vivin陽(yáng)性率比較無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移患者，明顯較高。說明COX-2、Sur-vivin對(duì)膀胱癌疾病的演進(jìn)進(jìn)行參與，COX-2（環(huán)氧化酶-2）、Survivin（癌組織存活蛋白）基因的過度表達(dá)可能與膀胱癌分子異常事件有關(guān)，可將Sur-vivin、COX-2作為膀胱癌預(yù)后及生物學(xué)行為判斷的標(biāo)準(zhǔn)之一，VEGF可促進(jìn)患者心血管生長(zhǎng)，并提升患者血管通透性，惡性腫瘤疾病中，血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子表達(dá)十分明顯，其與預(yù)后、侵襲轉(zhuǎn)移等在一定程度上具有聯(lián)系，認(rèn)為與腫瘤轉(zhuǎn)移灶生長(zhǎng)中的血管及腫瘤自身有聯(lián)系[10]。本次研究中，檢測(cè)參與研究的膀胱癌患者膀胱癌組織，結(jié)果均顯示有VEGF表達(dá)，患者病情越嚴(yán)重，其VEGF活性越高，最為明顯的為Ⅳ期膀胱癌組織，更加證明膀胱癌發(fā)病機(jī)制中有VEGF的參與，并且VEGF隨著患者病情的加重而逐漸上升[11-12]。與COX-2、Sur-vivin與膀胱癌演進(jìn)具有一致性，并且VEGF與COX-2（環(huán)氧化酶-2）、Survivin（癌組織存活蛋白）表達(dá)呈正相關(guān)性，因此，認(rèn)為膀胱癌發(fā)病機(jī)制中，VEGF表達(dá)與COX-2、Sur-vivin表達(dá)具有協(xié)同作用[13]。

綜上所述，在膀胱癌臨床病情進(jìn)展中，VEGF與COX-2、Sur-vivin呈平行性，即VEGF表達(dá)與COX-2、Sur-vivin表達(dá)的高低能夠在一定程度上對(duì)患者病情變化進(jìn)行反應(yīng)。當(dāng)前關(guān)于VEGF對(duì)癌癥的參與研究較多，對(duì)COX-2、Sur-vivin的研究剛剛開始，眾多問題還沒有進(jìn)行清楚說明，隨著研究的加深，VEGF與COX-2、Sur-vivin可稱為膀胱癌基因治療及診斷的新靶點(diǎn)。