PcG蛋白與血液腫瘤及靶向治療的相關(guān)性研究進(jìn)展

卞育婕,初雅婧,袁衛(wèi)平

(中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院 北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院血液病醫(yī)院(血液學(xué)研究所)實(shí)驗(yàn)血液學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，天津 300020)

表觀遺傳修飾由Waddington[1]于1942年提出，現(xiàn)在主要是指不改變核苷酸序列，但基因表達(dá)卻發(fā)生了可遺傳、可逆的改變,并最終導(dǎo)致表型改變，主要體現(xiàn)為5種形式：DNA修飾、組蛋白修飾、非編碼RNA調(diào)控、染色體重塑、核小體定位[2]。PcG蛋白是組蛋白修飾物，在基因轉(zhuǎn)錄過(guò)程中可以通過(guò)壓縮染色質(zhì)結(jié)構(gòu)使轉(zhuǎn)錄因子無(wú)法接近靶基因啟動(dòng)子或抑制 RNA聚合酶Ⅱ與靶基因結(jié)合等方式來(lái)抑制轉(zhuǎn)錄的起始，在調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖、分化、周期等生理進(jìn)程中發(fā)揮重要作用。造血干細(xì)胞(hematopoietic stem cell,HSC)的自我更新與分化也與PcG蛋白的調(diào)節(jié)密切相關(guān)[3]。研究表明，白血病干細(xì)胞(leukemia stem cell,LSC)起源于HSC[4]，PcG蛋白異常表達(dá)導(dǎo)致HSC向LSC轉(zhuǎn)變，可能是導(dǎo)致多種血液腫瘤發(fā)生的機(jī)制之一[5]。因此，PcG蛋白已成為血液腫瘤發(fā)病機(jī)制和治療的研究熱點(diǎn),以PcG為靶點(diǎn)的多種藥物也已進(jìn)入臨床試驗(yàn)或應(yīng)用于血液腫瘤的治療?，F(xiàn)就PcG蛋白的組成及分子生物學(xué)功能，PcG蛋白異常表達(dá)導(dǎo)致的HSC缺陷及血液腫瘤的發(fā)生，以及針對(duì)PcG蛋白的血液腫瘤的靶點(diǎn)治療進(jìn)行綜述。

1 PcG蛋白與功能

PcG蛋白最早因調(diào)節(jié)果蠅體內(nèi)調(diào)控果蠅發(fā)育的同源基因(homeobox genes,HOX)而被發(fā)現(xiàn)，隨后在哺乳動(dòng)物中也發(fā)現(xiàn)存在對(duì)應(yīng)的PcG蛋白同源類似物[6]。不同PcG蛋白組成多梳抑制復(fù)合物(polycomb repressive complex，PRC)，PRC主要分為PRC1、PRC2、多梳抑制性泛素化酶，見圖1。

PRC1又分為經(jīng)典PRC1和非經(jīng)典PRC1。經(jīng)典PRC1核心亞基主要包括環(huán)指蛋白1A/B基因(ring finger protein 1A/B，RING1A/B)、CBX(Chromobox)1、PCGF(polycomb group ring finger protein),與其他PCGF亞基相比, B細(xì)胞特異的莫羅尼白血病插入位點(diǎn)1(B cell-specific murine leukemia virus insertion site-1，BMI1)基因、黑色素瘤核蛋白-18(melanoma protein 18，MEL-18)基因等與表觀遺傳修飾關(guān)系最為密切。RING1A/B調(diào)控組蛋白E3連接酶活性，催化組蛋白H2A的第119位Lys泛素化；CBX連接PRC2主要的催化產(chǎn)物——組蛋白H3第27位賴氨酸上三甲基化(H3K27me3)，將PRC1募集至靶基因；PCGF與RING1A/B組成的異二聚體是支撐PRC1裝配的主要結(jié)構(gòu)。非經(jīng)典PRC1不含CBX，而具有與CBX功能類似但不依賴H3K27me3的RYBP(PING1 and YY1 binding protein)，與RING1A/B類似具備催化組蛋白H2A第119位賴氨酸單泛素化酶活性賴氨酸去甲基化酶2B[7]。

PRC2是S-腺苷-L-甲硫氨酸依賴性組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶，核心亞基主要包括Zeste基因增強(qiáng)子同源物(enhancer of Zeste homolog，EZH)、胚胎外胚層發(fā)育蛋白(embryonic ectoderm development，EED)、Zeste基因抑制子12(suppressor of Zeste 12,SUZ12)、視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤結(jié)合蛋白46/48(retinoblastoma binding proteins 46/48,RBAP46/48)。EZH2、EED、SUZ12、RBAP46/48的C端共同組成甲基轉(zhuǎn)移酶催化結(jié)構(gòu)域，催化組蛋白H3第27位賴氨酸甲基化生成H3K27me1、H3K27me2、H3K27me3；EED通過(guò)與Phe97、Trp364、Tyr365組成芳香結(jié)構(gòu)并與H3K27me3相互作用激活PRC2的組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶活性，從而傳播抑制性組蛋白標(biāo)記；RBAP46/48則可增強(qiáng)甲基轉(zhuǎn)移酶催化活性[5]。

PRC：多梳抑制復(fù)合物；PCGF：多梳基因環(huán)指蛋白基因；RING1A/B：環(huán)指蛋白1A/B基因；PHC1：多同源同系物1；RBAP46/48：視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤結(jié)合蛋白46/48；EED：胚胎外胚層發(fā)育蛋白；KDM2B：賴氨酸去甲基化酶2B；RYBP：PING1 and YY1 binding protein；CBX：Chromobox；EZH：Zeste基因增強(qiáng)子同源物；SUZ12：Zeste基因抑制子12；H2AK119ub1：組蛋白H2A第119位賴氨酸進(jìn)行單泛素化蛋白；H3K27me3：組蛋白H3第27位賴氨酸上三甲基化；ASXL：Additional sex comb；PR-DUB：多梳抑制性泛素化酶

圖1 PcG蛋白與組蛋白相互作用示意圖

多梳抑制性泛素化酶是一種組蛋白去泛素化酶，可去除組蛋白H2A第119位賴氨酸進(jìn)行單泛素化蛋白(H2AK119ub1)的單泛素化標(biāo)記，多梳抑制性泛素化酶的缺失導(dǎo)致體內(nèi)H2AK119ub1水平增加近10倍并導(dǎo)致果蠅中HOX基因的去阻遏。在果蠅中，Calypso與ASXL(additional sex comb)組成配偶體，Calypso是分布在蛋白C端水解酶類的去泛素化酶，需要ASX的存在才具備酶活性；在哺乳動(dòng)物中，BRCA1相關(guān)蛋白是Calypso同源物，與ASX同源物1-3結(jié)合成配偶體，同樣BAP1也需要在ASX同源物蛋白存在的情況下才具備酶活性[8]。

PRC2定位至染色體后催化組蛋白產(chǎn)生H3K27me3，PRC1亞基CBX連接到H3K27me3后催化組蛋白產(chǎn)生H2AK119ub1，H2AK119ub1可增強(qiáng)JARID2(Jumonji and AT-rich interaction domain containing 2)活性募集更多PRC2至染色體，PRC2繼續(xù)募集PRC1，進(jìn)而形成放大的正反饋信號(hào)環(huán)路；PRC1催化產(chǎn)物H2AK119ub1通過(guò)與RNA聚合酶Ⅱ結(jié)合來(lái)抑制靶基因轉(zhuǎn)錄，進(jìn)而阻斷RNA聚合酶Ⅱ的置換，抑制靶基因轉(zhuǎn)錄；PRC2催化產(chǎn)物H3K27me3壓縮染色體來(lái)抑制靶基因轉(zhuǎn)錄；多梳抑制性泛素化酶使H2AK119ub1去泛素化來(lái)抑制PRC1部分功能，三者共同作用調(diào)節(jié)靶基因的表達(dá)。

2 PcG蛋白與造血

造血穩(wěn)態(tài)是HSC自我更新和分化動(dòng)態(tài)平衡的結(jié)果，PcG蛋白通過(guò)調(diào)節(jié)HSC自我更新與分化維持造血穩(wěn)態(tài)。遺傳小鼠模型和患者突變的研究強(qiáng)調(diào)了染色質(zhì)調(diào)節(jié)在正常和惡性血細(xì)胞生成中的關(guān)鍵影響，因此，PcG蛋白異常表達(dá)可引起HSC數(shù)量和功能異常，無(wú)法維持機(jī)體正常造血,進(jìn)而導(dǎo)致多種血液腫瘤的發(fā)生。

2.1PRC1與HSC 敲除RING1A/B，在體外導(dǎo)致Lin-細(xì)胞集落出現(xiàn)生長(zhǎng)缺陷[9]；在體內(nèi)，小鼠骨髓中HSC耗竭、脾臟中不同程度HSC或髓系祖細(xì)胞過(guò)度增殖，并發(fā)生再生障礙性貧血。PcG蛋白被認(rèn)為主要通過(guò)轉(zhuǎn)錄抑制來(lái)調(diào)節(jié)基因表達(dá)，但有研究表明，在細(xì)胞有絲分裂過(guò)程中，RING1A/B可調(diào)節(jié)與啟動(dòng)子結(jié)合的染色質(zhì)相關(guān)蛋白的泛素化，當(dāng)細(xì)胞進(jìn)入G1期，這種修飾對(duì)于標(biāo)記基因的表達(dá)是必需的；敲除RING1A/B，其所標(biāo)記的轉(zhuǎn)錄相關(guān)基因無(wú)法表達(dá)，細(xì)胞周期阻滯在G1期，HSC無(wú)法自我更新與分化[10]。

在小鼠細(xì)胞體外培養(yǎng)時(shí)，CBX7過(guò)表達(dá)可提高HSC、多潛能祖細(xì)胞的自我更新能力，但CBX7過(guò)表達(dá)抑制致死劑量照射小鼠體內(nèi)HSC造血重建，CBX7缺陷導(dǎo)致HSC的增殖和集落形成能力下降,提示CBX7可維持HSC、多潛能祖細(xì)胞的自我更新能力；CBX2過(guò)表達(dá)對(duì)HSC增殖無(wú)影響，CBX4或CBX8過(guò)表達(dá)導(dǎo)致HSC趨向分化和耗竭[11]。在利用CBX過(guò)表達(dá)細(xì)胞構(gòu)建的HSC競(jìng)爭(zhēng)移植模型中，CBX7過(guò)表達(dá)HSC具備顯著的競(jìng)爭(zhēng)性再生優(yōu)勢(shì)；而CBX2過(guò)表達(dá)小鼠體內(nèi)僅完成B淋巴細(xì)胞重建，提示CBX2可促進(jìn)淋巴細(xì)胞生成，而非髓系細(xì)胞生成；CBX4或CBX8過(guò)表達(dá)HSC均未能促成長(zhǎng)期造血重建[12]?？傊煌珻BX蛋白的存在賦予PRC1不同的靶基因選擇性，共同維持HSC的自我更新和分化之間的動(dòng)態(tài)平衡。

BMI1-/-小鼠胎肝HSC數(shù)量正?？梢跃S持正常造血，但出生后骨髓HSC減少、全血細(xì)胞減少并在2個(gè)月內(nèi)死亡；將BMI1-/-小鼠胎肝HSC移植至致死劑量照射小鼠體內(nèi)，肝臟無(wú)法維持長(zhǎng)期造血重建[13]；BMI1過(guò)表達(dá)，促進(jìn)HSC體外造血分化中紅系和混合系集落的產(chǎn)生，提示BMI1在維持HSC自我更新和分化中發(fā)揮重要作用[14]。BMI1缺陷的HSC中Ink4a-Arf上調(diào)，其編碼兩種蛋白質(zhì)p16Ink4a和p19Arf。p16Ink4a作為細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶抑制劑起作用，通過(guò)激活Rb途徑阻礙細(xì)胞周期進(jìn)程，而p19Arf協(xié)調(diào)p21/p53介導(dǎo)的細(xì)胞周期停滯和凋亡。BMI1-/-HSC由于p16Ink4a和p19Arf去阻遏導(dǎo)致HSC無(wú)法自我更新與分化，提示抑制Ink4a-Arf是BMI1調(diào)控HSC自我更新與分化的有效機(jī)制；BMI1通過(guò)在氧化應(yīng)激時(shí)保護(hù)DNA免受損傷來(lái)調(diào)控HSC自我更新與維持的功能，在BMI1缺陷的情況下，HSC中活性氧類水平升高，導(dǎo)致細(xì)胞凋亡增加，HSC數(shù)量減少和活性降低[15]。

MEL-18和BMI1同屬于PCGF蛋白,兩者氨基酸序列高度同源但功能不同。BMI1在未成熟HSC中高表達(dá)，隨著細(xì)胞分化表達(dá)減少，而MEL-18隨著HSC分化表達(dá)增加；雖然BMI1-/-的小鼠胎肝HSC功能缺陷，但MEL-18-/-小鼠胎肝HSC功能不受影響，而B細(xì)胞數(shù)量減少[16-17]。因此，MEL-18可能主要在更多分化細(xì)胞中發(fā)揮調(diào)節(jié)作用而不參與HSC的自我更新與維持。

Rae28-/-小鼠胎肝HSC數(shù)量從胚胎期14.5 d逐漸降低，圍生期死亡率升高；移植Rae28-/-小鼠HSC至致死劑量照射的小鼠體內(nèi)，受體小鼠的骨髓造血功能衰竭，表現(xiàn)為HSC及各系細(xì)胞減少，無(wú)法完成功能性造血重建,提示Rae28在維持胎肝HSC的自我更新與分化方面發(fā)揮重要作用，但Rae28對(duì)成體HSC功能的影響仍有待闡述[18]。研究表明，Rae28缺陷會(huì)抑制泛素-蛋白酶體介導(dǎo)的Geminin降解，Geminin是DNA復(fù)制許可因子Cdt1的抑制劑，因此累積的Geminin抑制DNA復(fù)制，從而抑制HSC自我更新[19]。

2.2PRC2與HSC Zeste蛋白的兩種同源類似物EZH1、EZH2擁有相同SET催化結(jié)構(gòu)域，催化H3第27位Lys甲基化，兩者既有相同的作用靶點(diǎn)又有各自選擇性作用靶點(diǎn)，EZH1、EZH2雙敲除的HSC，H3第27位Lys不能被甲基化，僅敲除EZH2后H3第27位Lys仍能被甲基化，但嚴(yán)重?fù)p傷了HSC的自我更新能力，EZH1可以補(bǔ)償成體HSC中的EZH2缺陷，但不能補(bǔ)償胎肝HSC中EZH2缺陷。

研究表明，EZH1-/-的小鼠骨髓造血衰竭表現(xiàn)為HSC及各系細(xì)胞減少,提示EZH1在維持HSC更新中發(fā)揮重要作用[20]；EZH1促進(jìn)胚胎干細(xì)胞分化為多種淋巴細(xì)胞，并導(dǎo)致體內(nèi)功能確定性的成熟HSC出現(xiàn)，在哺乳動(dòng)物早期胚胎階段抑制胚胎干細(xì)胞的多能性[21]。EZH1在成體HSC中特異性表達(dá)，并且隨HSC分化表達(dá)減少，主要調(diào)控成體HSC造血，對(duì)胎肝HSC的造血調(diào)控是非必需的[22]。

EZH2在人和小鼠骨髓和胎肝細(xì)胞中廣泛表達(dá)，為重要的HSC調(diào)控因子，在連續(xù)HSC移植中HSC逐漸耗竭，但EZH2過(guò)表達(dá)可維持HSC自我更新，實(shí)現(xiàn)連續(xù)移植后HSC仍能大量增殖以維持受體鼠體內(nèi)造血重建[23]。但EZH2缺陷的HSC仍具備較強(qiáng)的移植能力，受體鼠淋巴細(xì)胞發(fā)育和免疫球蛋白可變區(qū)基因片段重排受到影響，淋巴譜系發(fā)育缺陷，而髓系發(fā)育并未受到影響。研究表明，EZH過(guò)表達(dá)抑制了HSC中p16Ink4a、p19Arf、促分化的基因(如DNA連接蛋白抑制基因2、亞硫酸氧化酶基因7)、促凋亡基因(如NADH氧化酶基因A、p21)等表達(dá)來(lái)維持HSC自我更新與分化[24]。

研究表明，EED突變純合子胎肝HSC的H3K27me3明顯減少，小鼠于胚胎期死亡；與突變純合子相比，EED突變雜合子HSC的克隆形成能力和骨髓再生活性增加,提示EED在維持HSC自我更新中發(fā)揮重要作用[5]；EED-/-小鼠脾臟體積明顯縮小，脾臟和骨髓蒼白，血細(xì)胞計(jì)數(shù)呈血白細(xì)胞和紅細(xì)胞減少，骨髓淋巴細(xì)胞和髓系細(xì)胞均減少,提示EED調(diào)節(jié)胚胎發(fā)育和造血平衡[25]。SUZ12-/-小鼠胎肝HSC和成體HSC均顯示造血功能缺陷，體內(nèi)各系細(xì)胞生成減少,提示SUZ12在造血穩(wěn)態(tài)的調(diào)節(jié)中發(fā)揮重要作用[26]。

3 PcG蛋白與血液腫瘤

3.1PRC1與血液腫瘤 血液腫瘤是起源于HSC的惡性增殖性腫瘤,其發(fā)生是一個(gè)多步驟過(guò)程。參與細(xì)胞周期調(diào)控的基因活性異常是細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化的先決條件之一，許多惡性細(xì)胞也已失去正常的細(xì)胞周期進(jìn)程。原癌基因和抑癌基因(如Ink4a-Arf)通常在癌細(xì)胞中失調(diào)，PcG蛋白的異常表達(dá)會(huì)導(dǎo)致包括原癌基因和抑癌基因在內(nèi)的靶基因發(fā)生突變、缺失和過(guò)表達(dá)等遺傳改變，這些異常的遺傳改變驅(qū)動(dòng)抑癌基因的失活或致癌基因的啟動(dòng),導(dǎo)致HSC無(wú)法自我更新與分化來(lái)維持機(jī)體正常造血,進(jìn)而出現(xiàn)以異常造血為主要表征的血液腫瘤的發(fā)生。但PcG蛋白功能復(fù)雜，在不同血液腫瘤中以不同分子機(jī)制分別發(fā)揮致癌或抑癌作用。

RING1A/B通常在骨髓增生異常綜合征(myelodysplastic syndromes,MDS)、急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)、非霍奇金淋巴瘤、彌漫大B淋巴瘤等血液腫瘤中過(guò)表達(dá)并且與預(yù)后不良相關(guān)。研究發(fā)現(xiàn)，幼年型髓單核細(xì)胞白血病患者的腫瘤細(xì)胞系中存在RING突變體-CBL-C384R，其上調(diào)細(xì)胞內(nèi)Janus激酶2和LYN激酶表達(dá)，并增強(qiáng)粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子的下游信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，是幼年型粒單細(xì)胞白血病發(fā)病的可能機(jī)制之一[23]。

CBX7過(guò)表達(dá)與C-myc共同作用導(dǎo)致T細(xì)胞或B細(xì)胞淋巴瘤[27]；敲除CBX8或抑制其與點(diǎn)突變的結(jié)合可以干擾HOXA9基表達(dá)上調(diào)從而阻止MLL-AF9白血病的發(fā)生；而CBX2與CBX4與白血病的發(fā)展無(wú)關(guān)[28]。

BMI1的過(guò)表達(dá)常見于MDS、AML、慢性粒細(xì)胞白血病和各種類型的淋巴瘤患者[24，29]。BMI1可能協(xié)同誘導(dǎo)白血病轉(zhuǎn)化，Sall4是一種導(dǎo)致AML發(fā)生的致癌基因，與BMI1啟動(dòng)子結(jié)合并誘導(dǎo)其表達(dá)；HoxA9-Meis1白血病小鼠模型中，HOXA9和Meis1致癌基因可誘導(dǎo)小鼠骨髓HSC轉(zhuǎn)化為L(zhǎng)SC。Hoxa9-Meis1轉(zhuǎn)導(dǎo)的BMI1-/-胎肝HSC移植入致死劑量照射小鼠，僅能在初次移植受體體內(nèi)誘導(dǎo)AML，連續(xù)移植后無(wú)法誘導(dǎo)受體鼠AML的產(chǎn)生，提示BMI1對(duì)維持LSC至關(guān)重要[30-31]。BMI1通過(guò)抑制p16Ink4a、p19Arf維持LSC的惡性增殖以及導(dǎo)致惡性腫瘤的發(fā)生。

有研究通過(guò)評(píng)估多例AML患者中多個(gè)PcG家族成員的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)BMI1過(guò)表達(dá)廣泛存在，而Mel-18是少數(shù)幾個(gè)未顯示過(guò)表達(dá)的PcG基因之一[32]。此外，在多例血液惡性腫瘤患者HSC中存在Rae28變異，而且Rae28的失活與腫瘤惡性程度有關(guān)并提示不良預(yù)后[19]。

3.2PRC2與血液腫瘤 EZH2的催化產(chǎn)物H3K27me3抑制許多靶基因轉(zhuǎn)錄，其功能障礙被認(rèn)為可能作用于原癌或抑癌基因發(fā)揮致癌或抑癌作用。EZH2突變的研究表明，在多種腫瘤中觀察到EZH2基因的體細(xì)胞突變[33]。在淋巴瘤中存在EZH2的酪氨酸641(Y641F)的雜合點(diǎn)突變，并且已經(jīng)在淋巴瘤中報(bào)道了EZH2過(guò)表達(dá)或EZH2的SET結(jié)構(gòu)域中的突變，導(dǎo)致H3K27me3增加[34]；濾泡性淋巴瘤EZH2的功能獲得性突變導(dǎo)致H3K27me3增加從而抑制周期依賴性激酶基因1A、T細(xì)胞/淋巴瘤基因1A等基因表達(dá)[35]。相反，在MDS、骨髓增殖性腫瘤、急性T淋巴細(xì)胞白血病等疾病中存在EZH2的缺失、移碼、無(wú)義和錯(cuò)義突變，提示EZH2的功能缺失性突變與腫瘤的發(fā)生發(fā)展有關(guān)，EZH2可能發(fā)揮腫瘤抑制作用[36]；與在患者中的這些發(fā)現(xiàn)一致，在EZH2缺陷的小鼠模型中，研究者發(fā)現(xiàn)EZH2缺陷上調(diào)了RUNX1(RUNX family transcription factor 1)基因的表達(dá)，并成功誘導(dǎo)了MDS的發(fā)生[8]。

盡管EED和SUZ12突變頻率較EZH2低，但也與多種腫瘤形成相關(guān)。EED和SUZ12協(xié)同調(diào)節(jié)EZH2的甲基轉(zhuǎn)移酶活性，EED或SUZ12異常將通過(guò)影響EZH2酶活性導(dǎo)致腫瘤發(fā)生。研究發(fā)現(xiàn)，EED單倍體缺陷小鼠自發(fā)發(fā)生MDS、骨髓增殖性腫瘤[37]；EED雜合小鼠較純合小鼠更易患惡性腫瘤，并與Evi1過(guò)表達(dá)共同導(dǎo)致白血病發(fā)生[38]。SUZ12突變存在于多種腫瘤中，尤其是套細(xì)胞淋巴瘤(mantle cell lymphoma,MCL)存在大量的SUZ12突變體的基因擴(kuò)增產(chǎn)物；SUZ12突變抑制Ink4，促進(jìn)MCL細(xì)胞增殖和抑制細(xì)胞凋亡[26]。

4 針對(duì)異常PcG蛋白功能的靶點(diǎn)治療

PcG在正常造血過(guò)程中發(fā)揮重要作用，異常表達(dá)的PcG亞基導(dǎo)致造血系統(tǒng)異常,從而導(dǎo)致多種血液腫瘤的發(fā)生。因此，靶向異常的PcG亞基并給予糾正是血液腫瘤靶向治療的重要方向，靶向異常PcG亞基的相關(guān)藥物及臨床試驗(yàn)總結(jié)見表1。

表1 針對(duì)PcG蛋白的靶向治療概述

SAH-EZH2：穩(wěn)定的EZH2α-螺旋肽；CBX：Chromobox；RING：環(huán)指蛋白；EZH：Zeste基因增強(qiáng)子同源物；BMI1：B細(xì)胞特異的莫羅尼白血病插入位點(diǎn)1；EED：胚胎外胚層發(fā)育蛋白；CML：慢性髓系白血?。籑DS：骨髓增生異常綜合征；AML：急性髓系白血??；DLBCL：彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤；MCL：套細(xì)胞淋巴瘤；FL：濾泡性淋巴瘤；NHL：非霍奇金淋巴瘤；MM：多發(fā)性骨髓瘤；MLL：混合譜系白血?。?：已臨床應(yīng)用

4.1針對(duì)PRC1的靶點(diǎn)治療 應(yīng)用伊馬替尼治療CML，患者腫瘤細(xì)胞中CBX6、CBX7和BMI1均升高，但作用不同。CBX6、7發(fā)揮抑癌基因作用，誘導(dǎo)致癌基因沉默和腫瘤細(xì)胞死亡，因此大部分患者對(duì)伊馬替尼治療有短期的良好反應(yīng)[39]。但有部分腫瘤細(xì)胞發(fā)生逃逸并在BMI1作用下自我更新促進(jìn)腫瘤進(jìn)展，即預(yù)示耐藥性的出現(xiàn)及預(yù)后不良[40]。組蛋白乙?；敢种苿┓⒅Z他通過(guò)驅(qū)動(dòng)小泛素化修飾蛋白來(lái)介導(dǎo)CBX2的降解，導(dǎo)致CBX缺陷的白血病細(xì)胞增殖受損，以達(dá)到延緩和抑制白血病進(jìn)展的目的[41]。地西他濱治療可顯著降低MDS和AML患者腫瘤細(xì)胞內(nèi)RING1A/B和EZH2的表達(dá)水平,有效延長(zhǎng)生存期[30]。

PTC-208、PTC-029、PTC596是近年來(lái)開發(fā)的靶向BMI1的新型小分子選擇性抑制劑，具有不同的作用模式[42]。PTC-028誘導(dǎo)BMI1的磷酸化，加速BMI1降解；PTC-209干擾BMI1的轉(zhuǎn)錄后調(diào)控從而下調(diào)BMI1；MCL-1是AML中關(guān)鍵的抗凋亡Bcl-2家族蛋白，在AML細(xì)胞中特別是在CD34+CD38-干細(xì)胞、祖細(xì)胞群高表達(dá)，BMI1通過(guò)磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B上調(diào)MCL-1，而PTC596通過(guò)磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B通路抑制MCL-1，促進(jìn)AML干細(xì)胞、祖細(xì)胞凋亡來(lái)治療AML。PTC-209由于其有限的效力和較差的藥動(dòng)學(xué)特性尚未進(jìn)入臨床試驗(yàn)。PTC596已在晚期實(shí)體瘤患者(NCT02404480)中完成了Ⅰ期臨床試驗(yàn)[43]。PTC596可有效殺死AML患者來(lái)源的干細(xì)胞、祖細(xì)胞，顯示出良好的安全性。

4.2針對(duì)PRC2的靶點(diǎn)治療 EZH2廣泛調(diào)節(jié)基因的表達(dá)和調(diào)控細(xì)胞功能，在不同腫瘤中發(fā)揮致癌基因或抑癌基因的功能。因此，EZH2是腫瘤的潛在治療靶點(diǎn)，目前針對(duì)EZH2致癌作用的EZH2抑制劑的臨床前和臨床試驗(yàn)正在進(jìn)行，且EZH2抑制劑的有效性在淋巴瘤和多發(fā)性骨髓瘤中也得到證實(shí)。

3-去氮腺苷的環(huán)戊醇類似物競(jìng)爭(zhēng)性抑制S-腺苷同型半胱氨酸水解酶活性而導(dǎo)致S-腺苷同型半胱氨酸在細(xì)胞內(nèi)堆積，S-腺苷同型半胱氨酸與EZH2的酶活性中心結(jié)合而抑制EZH2的甲基轉(zhuǎn)移酶活性,解除EZH2對(duì)抑癌基因的抑制,在急性早幼粒細(xì)胞白血病、淋巴瘤中發(fā)揮抑癌作用，但有研究指出3-去氮腺苷的環(huán)戊醇類似物應(yīng)用于動(dòng)物模型時(shí)存在毒性作用[42]。GSK126[44]和EPZ005687[45]也是選擇性S-腺苷甲硫氨酸競(jìng)爭(zhēng)性小分子抑制劑，可以結(jié)合野生型EZH2和Y641，導(dǎo)致H3K27me3表達(dá)上調(diào)和被EZH2抑制的靶基因表達(dá)上調(diào)，在體外細(xì)胞培養(yǎng)和動(dòng)物模型中有效抑制彌漫大B淋巴瘤的進(jìn)展。EZH2抑制劑EPZ6438(tazemetostat)可降低H3K27me3的水平，從而抑制EZH2突變導(dǎo)致的非霍奇金淋巴瘤生長(zhǎng)。EPZ6438目前正應(yīng)用于評(píng)估B細(xì)胞淋巴瘤和晚期實(shí)體瘤患者的Ⅰ/Ⅱ期臨床試驗(yàn)(NCT01897571)[46]。EPZ011989是一種具有有效藥動(dòng)學(xué)特性的口服的選擇性EZH2抑制劑。EPZ011989在人B細(xì)胞淋巴瘤的小鼠異種移植模型中顯示出顯著的腫瘤生長(zhǎng)抑制作用[47]。EBI-2511是一種基于苯并呋喃衍生的EZH2抑制劑，在小鼠的腫瘤異種移植模型中抑制腫瘤細(xì)胞增殖，并且正在臨床前開發(fā)用于治療與EZH2突變相關(guān)的腫瘤[48]。研究表明，穩(wěn)定的EZH2 α-螺旋肽(stabilized alpha-helix of EZH2,SAH-EZH2)通過(guò)破壞EZH2-EED復(fù)合物和降低EZH2蛋白水平選擇性地抑制H3K27me3，導(dǎo)致MLL-AF9白血病細(xì)胞的生長(zhǎng)停滯和分化[49]。另一種抑制EZH2與PRC2復(fù)合物相互作用的抑制劑CPI-1205目前正在一項(xiàng)B細(xì)胞淋巴瘤患者的Ⅰ期臨床試驗(yàn)中進(jìn)行評(píng)估[50]，針對(duì)EZH2的GSK-2816126[51]也進(jìn)入各種惡性血液腫瘤的臨床試驗(yàn)。

除EZH2特異性抑制劑外，因EZH1部分代償EZH2功能，靶向EZH1/2可能是一種很有前景的治療方法。UNC1999靶向抑制EZH1/2使H3K27甲基化減少和H3K27乙?；黾?導(dǎo)致周期依賴性激酶基因2A等細(xì)胞周期調(diào)控基因和發(fā)育基因的去阻遏，誘導(dǎo)一系列抗白血病作用(如腫瘤細(xì)胞的凋亡)，從而抑制MLL白血病的發(fā)展[52]。OR-S1可選擇性抑制EZH1/2的組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶活性，激活Wnt信號(hào)通路來(lái)減少LSC以抑制白血病的進(jìn)展[53]。DS-3201b是一種針對(duì)EZH1和EZH2的特異性抑制劑，已在臨床前研究中證實(shí)了對(duì)復(fù)發(fā)或難治性非霍奇金淋巴瘤、人T細(xì)胞白血病-淋巴瘤等多種血液惡性腫瘤的抗腫瘤活性[54]。

A-395是一種破壞EED-H3K27me3相互作用的小分子抑制劑,在小鼠淋巴瘤異種移植模型中顯示出腫瘤抑制功效，在人骨肉瘤細(xì)胞中證實(shí)該藥物減少H3K27me3積累，主要作為組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑起作用[55]。小分子抑制劑阿司咪唑也可抑制EED/EZH2相互作用，破壞PRC2復(fù)合物的穩(wěn)定性，從而減少淋巴瘤細(xì)胞的增殖[56]。

5 結(jié) 語(yǔ)

來(lái)自體外和體內(nèi)模型的累積證據(jù)以及臨床研究共同證實(shí)PcG蛋白參與多種血液腫瘤的發(fā)生和發(fā)展。PcG蛋白的缺失或過(guò)表達(dá)通過(guò)抑制抑癌基因和上調(diào)致癌基因表達(dá)，促進(jìn)正常HSC向腫瘤干細(xì)胞轉(zhuǎn)化，是血液腫瘤發(fā)生和治療后復(fù)發(fā)的機(jī)制之一。因此，多種針對(duì)不同PcG蛋白的靶向藥物也已經(jīng)引入血液腫瘤的臨床試驗(yàn)，不同于傳統(tǒng)腫瘤的治療靶點(diǎn)的不可及性，在血液腫瘤的治療中引入靶向PcG蛋白的靶向藥物能夠更有效和特異性地到達(dá)治療靶點(diǎn)，目前已有針對(duì)PcG蛋白亞基的靶點(diǎn)藥物進(jìn)入臨床試驗(yàn)或應(yīng)用于血液腫瘤患者的臨床治療并取得初步療效。PcG蛋白功能復(fù)雜,許多復(fù)雜功能仍有待進(jìn)一步闡述，因此，詳細(xì)了解造血系統(tǒng)中PcG蛋白的復(fù)雜功能將為血液腫瘤治療提供新的靶點(diǎn)，以及為血液腫瘤靶向藥物耐藥問(wèn)題提供新的思路。