托伐普坦片的制備及體外溶出評價*

黃 耀，余 瑜，張 濤，楊 杰

（1. 重慶醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，重慶 400016； 2. 福安藥業(yè)集團重慶禮邦藥物開發(fā)有限公司，重慶 401121）

托伐普坦（TVPT）是一種口服精氨酸加壓素V2受體拮抗劑，通過阻滯血管加壓素和集合管V2受體結(jié)合，使水通道蛋白－2 不能移動到細胞膜表面，抑制尿液濃縮，不排鈉而增加自由水的排出，達到利尿效果[1]，適用于臨床明顯的高容量性和正常容量性低鈉血癥，包括伴心力衰竭、肝硬化及抗利尿激素分泌異常綜合征（SIADH）[2]。2011年，原研公司獲原國家食品藥品監(jiān)督管理總局正式批準在中國生產(chǎn)和銷售托伐普坦，國內(nèi)尚無其他公司仿制成功并上市銷售。

托伐普坦的溶解性較差，影響制劑中藥物的溶出釋放，進一步影響體內(nèi)的生物利用度，故提高其體外溶出速率至關(guān)重要。固體分散技術(shù)是提高難溶性藥物溶出度的常用方法。藥物在固體分散體（SD）中可形成固體溶液、微晶或無定型分散狀態(tài)，具有很高的分散程度，可顯著提高溶解度和溶出速率[3－5]。原研專利[6－7]是將藥物和羥丙纖維素（HPC）溶解在乙醇和二氯甲烷的混合有機溶劑中，經(jīng)噴霧干燥而得無定型的托伐普坦和羥丙纖維素的非晶型組合物。

SD 的制備方法有熔融法、溶劑蒸發(fā)法、溶劑－熔融法和研磨法等。本研究中將托伐普坦原料藥和HPC 溶于95%乙醇形成載藥溶液，以乳糖作為底物，采用流化床底噴工藝制備成SD[8]，最后將其與輔料經(jīng)干法制粒、壓片后制備成片劑[9]，避開使用較大毒性有機溶劑二氯甲烷，并降低了工藝成本。通過粉末X 射線衍射法進行物相鑒別，測定SD 的飽和溶解度，并測定片劑的體外溶出曲線，為下一步托伐普坦口服制劑的開發(fā)奠定基礎(chǔ)?，F(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

WBF－2G 型流化床實驗機（重慶英格造粒包衣技術(shù)有限公司）；XD－6 型多晶X 粉末衍射儀（北京普析通用儀器有限責(zé)任公司）；BM－59XCD 型偏光顯微鏡（上海彼愛母光學(xué)儀器制造有限公司）；708 ＋850DS 型自動溶出儀（安捷倫科技有限公司）；UV－2600 型紫外可見分光光度計（日本島津公司）。

1.2 試藥

托伐普坦原料藥（福安藥業(yè)集團重慶博圣制藥有限公司，批號為L－170401V）；HPC（日本曹達株式會社，批號為NFI－2531，型號為SL）；微晶纖維素（美國DuPont 公司，批號為P117831197，型號為PH101）；微晶纖維素（美國DuPont 公司，批號為P215829048，型號為PH102）；玉米淀粉（安徽山河藥用輔料有限公司，批號為161006，型號為SH－L）；低取代羥丙纖維素（日本信越化學(xué)工業(yè)株式會社，批號為5093238，型號為LH－11）；一水乳糖（美劑樂沃斯堡牛奶房兩合公司，批號為L101513216A535，型號為100 目）；硬脂酸鎂（安徽山河藥用輔料有限公司，批號為170301，型號為SH－YM－M）；乙醇（四川金山制藥有限公司，批號為170801，藥用級）。

2 方法與結(jié)果

2.1 樣品制備

固體分散體制備：95%乙醇作為載藥溶劑，稱取適量托伐普坦原料藥（150 g）與HPC（75 g），加入載藥溶劑（3 600 g）中，于60 ～80 ℃水浴下攪拌至澄清。以乳糖為底物，采用流化床底噴工藝制備SD，進風(fēng)溫度為90 ℃，噴霧壓力為0.22 MPa，送液速度為20 ～50 mL／min，風(fēng)機頻率為15 ～18 Hz，物料溫度為55 ℃，噴液結(jié)束后干燥30 min。

物理混合物制備：將托伐普坦原料藥與HPC 及乳糖過60 目篩，混合均勻，得物理混合物（PM）。

托伐普坦片制備：稱取SD 或PM、微晶纖維素101、玉米淀粉、低取代羥丙纖維素、硬脂酸鎂，過60 目篩1遍；再將物料倒入料斗混合機中，轉(zhuǎn)速為12 r／min，混合5 min；采用干法制粒機將混合后物料進行干法制粒，進料頻率為8 Hz，壓片頻率為6 Hz，制粒頻率為8 Hz；將干法制粒后顆粒與微晶纖維素102、硬脂酸鎂置料斗混合機中混合3 min；采用旋轉(zhuǎn)壓片機進行壓片，每片重120 mg，硬度4 ～6 kg。

2.2 固體分散體表征

使用XD－6 型多晶X 射線粉末衍射儀記錄樣品的粉末衍射圖，設(shè)置工作參數(shù)（Cu 靶，起始角為4°，終止角為55°，步寬為0.02，波長為1.54 nm，管電壓為36 kV，管電流為20 mA），以2°／min 的掃描速率分析樣品。托伐普坦原料藥、乳糖和TVPT－SD 粉末X 射線衍射圖見圖1?？梢?，原料藥在2 θ 值為12°～17°處具有衍射特征峰，表明托伐普坦作為具有主要特征衍射峰的結(jié)晶材料存在于自然界中。而TVPT－SD 的衍射圖與乳糖的衍射圖基本一致，且12°～17°處的衍射特征峰消失，表明TVPT－SD 中的托伐普坦主要表現(xiàn)為無定形。

圖1 托伐普坦固體分散體、托伐普坦原料藥和乳糖的粉末X射線衍射圖

2.3 體外溶出試驗

波長選擇：參考原研專利中溶出度測定方法[6－7]，確定本品溶出度檢測方法為紫外－可見分光光度法，檢測波長為268 nm 和350 nm 處的差值。

標準曲線制備：取托伐普坦對照品32 mg，精密稱定，置100 mL 容量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品貯備液。精密量取對照品貯備液，分別用0.05%十二烷基硫酸鈉（SDS）的0.1 mol／L 鹽酸溶液將貯備液稀釋成質(zhì)量濃度為1.6，3.2，6.4，12.8，16，19.2 μg／mL 的溶液，測定各溶液的吸光度，以吸光度（A）對質(zhì)量濃度（C）作標準曲線，得標準曲線回歸方程A ＝0.039 1 C－0.003 4，r ＝0.996 5（n ＝6）。結(jié)果表明，托伐普坦質(zhì)量濃度在1.6 ～19.2 μg／mL 范圍內(nèi)與吸光度線性關(guān)系良好。

樣品回收試驗：分別取托伐普坦對照品約8，13，16 mg，各3 份，精密稱定，置100 mL 容量瓶中，加甲醇50 mL 超聲使溶解；另取處方比例的空白輔料，同置上述容量瓶中，加入含0.05%SDS 的0.1 mol／L 鹽酸溶液40 mL，超聲處理20 min，稀釋定容至刻度，搖勻，用0.45 μm 濾膜濾過；取續(xù)濾液5 mL，置50 mL 容量瓶中，稀釋定容至刻度，搖勻，作為50%，80%，100%回收率供試品溶液，測定各供試品溶液的吸光度，計算回收率。結(jié)果表明，其平均回收率為99.03% ，RSD 為2.17%（n ＝9），表明方法回收率良好，不受輔料干擾。

溶 出 曲 線 測定：參 考 原 研 專 利[6－7]，采 用708 ＋850DS 型自動溶出儀，照2015年版《中國藥典（四部）》通則0931 第二法（槳法），以0.1 mol／L 鹽酸溶液（含0.05%DS）900 mL 為溶出介質(zhì)，置各溶出杯內(nèi)，加溫，待溶出介質(zhì)溫度恒定在（37±0.5）℃時進行試驗。分別于5，10，15，20，30，45，60 min 時[10]取樣5 mL，經(jīng)水系濾頭（規(guī)格為33 mm×0.45 μm）過濾后，取續(xù)濾液置UV－2600 型紫外可見分光光度計，采用雙波長測定法（于268 nm 和350 nm 波長處）測定吸光度。按外標法計算累積溶出度，并作出溶出曲線。

體外溶出測定結(jié)果：結(jié)果見圖2?？梢姡琍M 制備的樣品60 min 累積溶出量僅為17.99%，而SD 制備的樣品60 min 累積溶出量為94.12%，溶出速率明顯提高，更接近參比制劑。進一步驗證了托伐普坦原料藥在SD 中轉(zhuǎn)化為無定形，且經(jīng)過干法制粒及壓片后仍未發(fā)生晶型轉(zhuǎn)變。

2.4 飽和溶解度測定

稱取約含50 mg 托伐普坦原料藥和SD 置100 mL容量瓶中，分別加入60 mL pH 1.0 鹽酸溶液、pH 3.0 枸櫞酸緩沖溶液、pH 4.5 醋酸緩沖溶液和pH 6.8 磷酸緩沖溶液，在（37±0.5）℃水浴振蕩器中振搖24 h，用0.45 μm 水系微孔濾膜過濾，棄去初濾液2 mL，精密量取2 mL 續(xù)濾液，置5 mL 容量瓶中，加相應(yīng)溶液稀釋定容至刻度；在紫外可見分光光度計上采用雙波長測定法（于268 nm 和350 nm 波長處）測定吸光度，并計算其在不同介質(zhì)中的飽和溶解度。

圖2 參比制劑、固體分散體制備片和物理混合物制備片的溶出曲線

飽和溶解度：托伐普坦原料藥及TVPT－SD 在不同介質(zhì)中的溶解度見圖3?？梢?，相對于原料藥的飽和溶解度，SD 在各個不同pH 條件下的溶解性能均得到極大提升，且增溶后的溶解度與pH 不呈依賴性，表明托伐普坦原料藥通過流化床工藝轉(zhuǎn)化為無定形后存在于SD 中。

圖3 托伐普坦原料藥和固體分散體在不同介質(zhì)中的飽和溶解度

3 討論

根據(jù)表征結(jié)果，托伐普坦溶解度及溶出速率的提高可歸因為SD 技術(shù)，其使藥物晶體轉(zhuǎn)化為無定形形式后，具有較高的吉布斯能，故溶解時所需能量較少[11－12]。另外，潤濕性、多孔性及表面積的小粒徑結(jié)構(gòu)均是提高藥物溶出度的重要原因[13]。

本研究中采用了溶劑蒸發(fā)法中的流化床底噴法成功制備了TVPT－SD。該方法避免了高熱過程，較適宜對熱不穩(wěn)定且易揮發(fā)的藥物，但由于使用有機溶劑，增加了成本，有機溶劑也難以除盡，易引起藥物的重結(jié)晶而影響藥物的分散度[8]。

藥物晶型易受到溫度、壓力、相對濕度的影響而發(fā)生轉(zhuǎn)變，故在制劑工藝的粉碎、制粒、干燥、壓片、包衣等操作過程及貯存過程中易發(fā)生轉(zhuǎn)變，從而影響藥品溶出度及生物利用度[14]。干法制粒及壓片過程中，物料經(jīng)過反向旋轉(zhuǎn)滾軸的高擠壓過程，可能會影響藥物的晶型。BOZIC 等[15]研究發(fā)現(xiàn)，大環(huán)內(nèi)酯類抗生素在干法制粒過程中局部無定形化，且壓片過程中無定形化更嚴重。故本研究中不僅對TVPT －SD 進行溶解度測定，更在其經(jīng)過干法制粒及壓片后，與參比制劑進行溶出曲線對比。

采用流化床底噴法成功制備了TVPT－SD，與原研專利比較，避免了使用較大毒性的有機溶劑二氯甲烷，降低了工藝成本。體外溶出試驗結(jié)果表明，與普通藥物相比，SD 制備的片劑可顯著提高其體外溶出度，與參比制劑接近，為下一步托伐普坦片仿制藥的開發(fā)奠定了基礎(chǔ)。