三氯化鐵分光光度法測(cè)定藥物中亞甲基二膦酸

王 寧，陳孟毅，付 博，宋志浩，張?zhí)N瀚，胡 驥

原子高科股份有限公司，北京 102413

亞甲基二膦酸(MDP)是二膦酸類藥物，是注射用亞錫亞甲基二膦酸鹽凍干藥盒的主要成分。MDP經(jīng)99Tcm-標(biāo)記后的锝[99Tcm]亞甲基二膦酸鹽注射液主要用于全身或局部骨顯像，診斷骨關(guān)節(jié)疾病、原發(fā)或轉(zhuǎn)移性骨腫瘤病等[1-3]；經(jīng)99Tc-標(biāo)記后的锝[99Tc]亞甲基二膦酸鹽注射液為類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎治療藥物，具有消炎、鎮(zhèn)痛等作用[4-5]。2015版藥典收錄的MDP含量分析方法[6]是一種間接測(cè)定方法，先將有機(jī)膦轉(zhuǎn)變?yōu)闊o(wú)機(jī)磷后，進(jìn)行無(wú)機(jī)磷含量測(cè)定，再用總無(wú)機(jī)磷量減去轉(zhuǎn)化前的無(wú)機(jī)磷量后計(jì)算得到，操作繁瑣，耗時(shí)長(zhǎng)。因此，開(kāi)發(fā)簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確、快速的MDP含量測(cè)定方法對(duì)藥品生產(chǎn)中質(zhì)量控制具有重要意義。

MDP結(jié)構(gòu)中無(wú)生色團(tuán)，極性較強(qiáng)，在反相柱上很難保留。同時(shí)，凍干藥盒中的氯化亞錫具有較強(qiáng)的還原性和紫外吸收，易干擾MDP的含量測(cè)定。雙膦酸類藥物的質(zhì)量控制方法有重量分析法[7]、酸堿滴定法[8]、電位滴定法[9-10]、分光光度法[11-12]、柱前或柱后衍生反相高效液相色譜法[13-14]、離子交換高效液相色譜法[15]、離子色譜法[16]、反相離子對(duì)高效液相色譜法[17-19]等方法。其中重量分析、滴定方法操作繁瑣，準(zhǔn)確度不足，且結(jié)果易受共存物影響；現(xiàn)有的分光光度法多需要進(jìn)行多步的處理或長(zhǎng)時(shí)間的絡(luò)合反應(yīng)，不夠簡(jiǎn)單快速；高效液相色譜法具有同時(shí)分離MDP相關(guān)物質(zhì)的優(yōu)點(diǎn)，但設(shè)備昂貴，對(duì)儀器、操作要求較高。本研究根據(jù)三氯化鐵與MDP形成絡(luò)合物的現(xiàn)象[20]，研究利用分光光度法測(cè)定MDP含量的方法。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

UV2700紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)，日本島津公司；MS105電子天平，精度0.01 mg，梅特勒托利多公司。

亞甲基二膦酸標(biāo)準(zhǔn)品，歐洲委員會(huì)，歐洲藥典參考標(biāo)準(zhǔn)；注射用亞錫亞甲基二膦酸鹽，原子高科股份有限公司；六水合三氯化鐵，分析純，國(guó)藥集團(tuán)藥業(yè)股份有限公司；高氯酸，北京化工廠，純度70%～72%；所用水為純化水。

2 mol/L高氯酸溶液：使用25 mL移液管精密量取高氯酸16.24 mL溶解于100 mL水。20 mmol/L六水合三氯化鐵的高氯酸溶液：精密稱定六水合三氯化鐵0.54 g，用2 mol/L高氯酸溶液溶解定容于100 mL容量瓶。1 g/L MDP標(biāo)準(zhǔn)品溶液：取20 mg MDP標(biāo)準(zhǔn)品，10.00 mL水溶解，取5.00 mL定容于10 mL容量瓶。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

取0.25 mL 1 g/L MDP標(biāo)準(zhǔn)溶液，加入0.50 mL三氯化鐵的高氯酸溶液，定容至5 mL。以試劑為空白，使用10 mm光程、3.5 mL標(biāo)準(zhǔn)比色皿，于波長(zhǎng)300 nm處測(cè)定吸光度。

2 結(jié)果與討論

2.1 吸收光譜

以高氯酸溶液為空白，波長(zhǎng)范圍200～500 nm，對(duì)MDP溶液、三氯化鐵的高氯酸溶液及MDP與三氯化鐵高氯酸溶液混合液進(jìn)行吸收光譜掃描，結(jié)果示于圖1。由圖1看出，MDP無(wú)吸收，三氯化鐵在239 nm處有最大吸收，三氯化鐵與MDP絡(luò)合物在260 nm處最大吸收。300 nm處絡(luò)合物吸收峰受三氯化鐵吸收影響較小，選擇300 nm為測(cè)定波長(zhǎng)。

1——MDP，2——三氯化鐵高氯酸溶液，3——0.1 mmol/L MDP+0.2 mmol/L FeCl3，4——0.4 mmol/L MDP+0.2 mmol/L FeCl3，5——0.6 mmol/L MDP+0.2 mmol/L FeCl3，6——1.0 mmol/L MDP+0.2 mmol/L FeCl3

2.2 絡(luò)合物化學(xué)計(jì)量比、穩(wěn)定常數(shù)及三氯化鐵用量的選擇

保持三氯化鐵濃度恒定為0.2 mmol/L，MDP濃度分別為0、0.02、0.03、0.05、0.10、0.15、0.20、0.25、0.30 mmol/L時(shí)測(cè)量混合樣品溶液在300 nm處的吸收，結(jié)果示于圖2。由圖2結(jié)果得到，三氯化鐵與MDP反應(yīng)的摩爾比約為1∶1，在實(shí)際測(cè)量樣品中MDP濃度為0.2～0.3 mmol/L，為保持三氯化鐵過(guò)量，并減小三氯化鐵濃度對(duì)測(cè)定結(jié)果的影響，選擇三氯化鐵濃度為2 mmol/L。同時(shí)，為防止Fe3+水解，在溶液中加入高濃度的高氯酸。

圖2 MDP濃度對(duì)吸光度的影響

圖3 在0.2 mol/L高氯酸中MDP-Fe3+絡(luò)合物等摩爾溶液的約伯曲線

2.3 工作曲線

注射用亞錫亞甲基二膦酸鹽樣品100 mL水溶解后，MDP質(zhì)量濃度約為0.05 g/L，選擇MDP質(zhì)量濃度分別為0.02、0.04、0.05、0.06、0.08 g/L時(shí)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。在5個(gè)容量瓶中分別加入0.50 mL 20 mmol/L三氯化鐵溶液，分別加入0.10、0.20、0.25、0.30、0.40 mL 1 g/L MDP標(biāo)準(zhǔn)品溶液，定容至5 mL。以0.2 mol/L高氯酸溶液為空白，在波長(zhǎng)300 nm處測(cè)定吸收值，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果示于圖4。

圖4 工作曲線

由圖4結(jié)果可知，線性方程y=14.61x+0.029 7，相關(guān)系數(shù)r=0.999 1，結(jié)果表明MDP質(zhì)量濃度在0.02～0.08 g/L范圍內(nèi)具有良好的線性。

2.4 注射用亞錫亞甲基二膦酸鹽中其他組分的影響

按實(shí)驗(yàn)方法考察了凍干藥盒中其他組分?jǐn)U大10倍對(duì)測(cè)定結(jié)果的影響。結(jié)果列于表1。由表1可知，在注射用亞錫亞甲基二膦酸鹽樣品中，氯化亞錫、抗壞血酸、氯化鈉的量擴(kuò)大10倍時(shí)MDP回收率為99.3%～100.7%，測(cè)定結(jié)果相對(duì)誤差均在±3%以內(nèi)。

表1 除MDP外其他組分?jǐn)U大10倍的測(cè)定結(jié)果

2.5 體系的穩(wěn)定性

0.05 g/L MDP與三氯化鐵混合后放置90 min進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果表明體系在90 min內(nèi)穩(wěn)定。

2.6 回收率

配制MDP標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)量濃度為0.04、0.05、0.06 g/L的注射用亞錫亞甲基二膦酸鹽全組分樣品，按本實(shí)驗(yàn)方法測(cè)定MDP含量，并與藥典方法[6]對(duì)照，結(jié)果列于表2。表2結(jié)果表明，本方法測(cè)得的MDP回收率在98.8%～102.0%之間，藥典法的回收率為103.9%～108.9%。

表2 MDP標(biāo)準(zhǔn)品加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)

2.7 樣品測(cè)定

取注射用亞錫亞甲基二膦酸鹽6瓶，分別用5 mL水溶解，按照實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行測(cè)定，并與藥典方法測(cè)定值進(jìn)行比較，結(jié)果列于表3。表2和表3實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，兩種方法測(cè)定結(jié)果基本一致，但本實(shí)驗(yàn)方法(sr=0.97%，n=6)較藥典方法(sr=3.93%，n=6)大大縮短了測(cè)定時(shí)間和操作步驟，且具有更高的準(zhǔn)確度和精密度。

表3 本方法與藥典方法比較(n=6)

3 結(jié) 論

本工作建立的分光光度法測(cè)定亞甲基二膦酸鹽的分析方法，樣品僅需一次混合即可直接進(jìn)行測(cè)定，相較于其他測(cè)定方法，特別是藥典法，大大地縮短了測(cè)定時(shí)間和操作步驟，具有快速準(zhǔn)確、操作簡(jiǎn)單、成本低等優(yōu)點(diǎn)，可用于注射用亞錫亞甲基二膦酸中MDP含量的快速、準(zhǔn)確測(cè)定。