超高效液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法檢測(cè)水稻中雙草醚的殘留量

馬新剛，梁 林，張愛娟，左伯軍

(山東省農(nóng)藥科學(xué)研究院 山東省化學(xué)農(nóng)藥重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，山東 濟(jì)南 250033)

雙草醚，化學(xué)名稱2,6-雙(4,6-二甲氧嘧啶-2-氧基)苯甲酸鈉，是一種超高效、廣譜、低毒的除草劑，被廣泛用于水稻生產(chǎn)，對(duì)水稻品種的選擇性高達(dá) 90%以上，通過抑制亮氨酸、纈氨酸和異亮氨酸等支鏈氨基酸合成過程中所需的乙酰乳酸合成酶 (ALS)，干擾細(xì)胞分裂，抑制植物分生組織生長(zhǎng)，從而殺死雜草，主要用于防治水稻田稗草等禾本科雜草和闊葉雜草，秧田、直播田、小苗移載田和拋秧田均可使用[1]。

中國(guó)是世界上水稻產(chǎn)量最高的國(guó)家，總產(chǎn)量高達(dá)2億t以上，水稻產(chǎn)業(yè)發(fā)展直接關(guān)系到國(guó)家糧食安全和社會(huì)穩(wěn)定。我國(guó)規(guī)定雙草醚在稻谷和糙米上MRL值為0.01 mg/kg(臨時(shí)限量)。目前，我國(guó)對(duì)雙草醚的殘留分析方法研究主要集中在田水、土壤、水稻等基質(zhì)。白潔和謝強(qiáng)[2]用氣相色譜法檢測(cè)了稻米和土壤中雙草醚的殘留，前處理過程需要將雙草醚衍生化，然后過SPE柱。鄭麗英、楊仁斌和郭正元等[3]用高效液相色譜儀建立了水、土壤、植株和稻米中雙草醚殘留分析方法，提取凈化過程耗時(shí)長(zhǎng)，使用了多種溶劑。劉敬民、李萬(wàn)芳和石隆平等[4]利用高效液相色譜儀研究了雙草醚原藥的分析方法。秦美玲、柴爽爽和馬有寧等[5]使用HPLC-MS/MS法研究了雙草醚在稻米中的最終殘留，溶劑使用量大，凈化過程使用了吸附劑。李叢荻、何裕建和袁龍飛等[6]建立了HPLC-MS/MS檢測(cè)稻田中雙草醚的殘留方法，前處理過程使用了超聲、旋蒸、凈化劑等，過程繁瑣。

本文采用超高效液相色譜質(zhì)譜法，建立了檢測(cè)稻谷中雙草醚殘留量的分析方法，前處理方法可靠簡(jiǎn)單，定性定量快速準(zhǔn)確，結(jié)果重現(xiàn)性好，為開展雙草醚在稻谷上安全使用技術(shù)研究提供了參考依據(jù)。

1 試驗(yàn)材料與方法

1.1 儀器設(shè)備與藥劑

超高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀(Agilent 1290Ⅱ-6460)，美國(guó)安捷倫公司；多管高速渦旋混合儀(MTV-100)，杭州市奧盛儀器設(shè)備有限公司；精密電子天平(AL204)，梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司；離心機(jī)(TDL-5-A)，上海市安亭科學(xué)儀器設(shè)備廠。

氯化鈉(分析純，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司)；乙腈(色譜純，瑞典歐森巴克環(huán)境化學(xué)公司；分析純，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司)；甲酸(色譜純，賽默飛世爾科技公司)；雙草醚標(biāo)準(zhǔn)品(純度為96.3%，購(gòu)自德國(guó)Dr.Ehrenstorfer GmbH)。

溶液配制：準(zhǔn)確稱取0.0222 g雙草醚標(biāo)準(zhǔn)品，將準(zhǔn)確稱重的標(biāo)準(zhǔn)品轉(zhuǎn)移至50 mL容量瓶中，用乙腈溶解，待標(biāo)準(zhǔn)品完全溶解，定容得428 mg/L雙草醚標(biāo)準(zhǔn)溶液，置于4℃冰箱中保存，使用時(shí)用乙腈稀釋成100 mg/L的雙草醚標(biāo)準(zhǔn)溶液。

提取液配制：準(zhǔn)確量取0.5 mL甲酸，用乙腈定容至500 mL，配制成0.1%甲酸乙腈溶液(v/v)。

1.2 樣品提取方法

準(zhǔn)確稱取搗碎的糙米樣品10.0 g(稻殼、稻桿樣品2.0 g)至50 mL具塞式塑料離心管內(nèi)，加入10 mL 超純水和10 mL 0.1%甲酸乙腈，2500 r/min，高速渦旋4 min，加入5 g氯化鈉，渦旋30 s；4500 r/min，高速離心4 min，取上清液1 mL，過0.22 μm有機(jī)系微孔濾膜，待檢測(cè)。

1.3 色譜和質(zhì)譜條件

色譜柱：Eclipse PlusC18 RRHD(50 mm×2.1 mm，1.8 μm)；流動(dòng)相：V(乙腈) ：V(0.1%甲酸水溶液)=70：30；流速：0.3 mL/min；進(jìn)樣體積：1 μL；柱溫：室溫。

質(zhì)譜采用ESI(+)，毛細(xì)管電壓：4 kV；干燥氣溫度：300℃；干燥氣流量：11 L/min；霧化氣壓力：15psi；反應(yīng)氣：N2；檢測(cè)方式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)。定性定量分析結(jié)果(見表1)。

表1 雙草醚的質(zhì)譜檢測(cè)條件

2 結(jié)果與分析

2.1 儀器條件的確定

用1 mg/L雙草醚標(biāo)準(zhǔn)溶液，在電噴霧電離ESI(+/- )方式下進(jìn)行全掃描(m/z 100～500)，綜合比較基線噪聲、響應(yīng)強(qiáng)度和抗干擾能力等因素，最終選定正離子采集模式下的質(zhì)荷比為m/z431為母離子。通過進(jìn)一步優(yōu)化二級(jí)質(zhì)譜參數(shù)，分別獲得定量離子對(duì)m/z 431/275和定性離子對(duì)m/z 431/413，碎裂電壓均為80V,相應(yīng)的碰撞能量分別為10 V和5 V。質(zhì)譜圖(見圖1)和色譜圖(見圖2)。

圖1 雙草醚的二級(jí)質(zhì)譜圖

圖2 雙草醚標(biāo)準(zhǔn)溶液及糙米、稻殼和稻桿中添加回收定量色譜圖

2.2 前處理方法摸索

雙草醚屬于酸性農(nóng)藥，易溶于乙腈等有機(jī)溶劑中，本實(shí)驗(yàn)選擇0.1%甲酸乙腈作為提取溶劑，樣品基質(zhì)背景少，結(jié)合UPLC-MS/MS檢測(cè)方法靈敏度高、選擇性好、抗基質(zhì)干擾強(qiáng)等特點(diǎn)，提取液無需凈化。

2.3 基質(zhì)效應(yīng)

試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，雙草醚在糙米、稻殼和稻桿三種基質(zhì)中響應(yīng)值與溶劑配制的標(biāo)樣溶液響應(yīng)值無明顯差異，因此判斷本試驗(yàn)中雙草醚不存在基質(zhì)效應(yīng)。

2.4 方法的線性范圍

將雙草醚的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液用乙腈依次稀釋為2、0.5、0.1、0.05、0.01 mg/L的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。按1.3色譜條件進(jìn)樣，每個(gè)質(zhì)量濃度重復(fù)3次，以標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的質(zhì)量濃度對(duì)應(yīng)各組分色譜峰面積作圖。雙草醚線性回歸方程Y = 50011X+172，相關(guān)系數(shù)(r)為0.9997。

2.5 方法的準(zhǔn)確度和精密度

于空白基質(zhì)中添加一定量的雙草醚標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液，進(jìn)行添加回收試驗(yàn)。結(jié)果表明(見表2)：雙草醚在空白糙米樣品中以0.02～1 mg/kg為三個(gè)添加水平，平均添加回收率為95%～101%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為6%～8%；在空白稻殼樣品中以0.05～5 mg/kg為三個(gè)添加水平，平均添加回收率為97%～101%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為1%～4%；在空白稻桿樣品中以0.05～5 mg/kg為三個(gè)添加水平，平均添加回收率為99%～113%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為2%～3%。

表2 雙草醚在糙米、稻殼和稻桿中的添加回收率及相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差

2.6 樣品檢測(cè)

應(yīng)用建立的方法對(duì)2018年黑龍江、吉林、山東、安徽、上海、湖南、湖北、四川、廣西、云南、廣東、海南 12地水稻樣品進(jìn)行了檢測(cè)，結(jié)果糙米、稻殼、稻桿樣品中雙草醚含量均低于方法的定量限(糙米0.02 mg/kg，稻殼、稻桿0.05 mg/kg)。

3 結(jié)論

本試驗(yàn)建立了水稻中雙草醚的檢測(cè)方法，該方法簡(jiǎn)單快速、可靠準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，方法滿足農(nóng)藥殘留檢測(cè)的要求，可實(shí)現(xiàn)大批量樣品的快速檢測(cè)。