新生血管性青光眼患者血清及房水中Klotho和Endothelin-1的表達及意義

譚蔚 張朝軍 陳伯凡 胡杰

新生血管性青光眼(nonvascular glaucoma，NVG)是一種臨床上較為常見的繼發(fā)性青光眼疾病，該病可以隨著視網(wǎng)膜靜脈阻塞、視網(wǎng)膜缺血綜合征及糖尿病性視網(wǎng)膜病變等缺血性疾病的發(fā)病率逐年上升，而導(dǎo)致新生血管性青光眼的發(fā)病率也逐漸上升[1,2]。KLotho是一種新發(fā)現(xiàn)的蛋白質(zhì)，推測其在衰老過程中具有重要作用；而血漿內(nèi)皮素-1(Endothelin-1，ET-1)是一種作用于抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞生長的特殊因子[3,4]。根據(jù)上述觀點，本研究以重慶普瑞眼科醫(yī)院和重慶市江津區(qū)中心醫(yī)院經(jīng)臨床診斷收治的92例新生血管性青光眼患者、81例原發(fā)性青光眼患者以及73白內(nèi)障患者為研究對象，探討新生血管性青光眼患者血清及房水中Klotho和ET-1的表達及臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 將重慶普瑞眼科醫(yī)院和重慶市江津區(qū)中心醫(yī)院2015年3月至2018年11月經(jīng)臨床診斷并收治的92例新生血管性青光眼患者納入新生血管性青光眼組，另選取同一時間就診的81例原發(fā)性青光眼患者和73例白內(nèi)障患者分別納入原發(fā)性青光眼組和白內(nèi)障組。3組之間性別比、年齡、體重指標(biāo)、病史情況等一般資料差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。研究對象均知情同意并簽署自愿參與本次研究相關(guān)文件。本研究經(jīng)過醫(yī)院倫理委員會審批。見表1。

表1 3組一般資料比較

1.2 納入與排除標(biāo)準(zhǔn)

1.2.1 納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合新生血管性青光眼診斷標(biāo)準(zhǔn)[5]的患者；②無精神疾病史、意識清晰且能夠良好溝通的患者。

1.2.2 排除標(biāo)準(zhǔn)：①長期服用或者使用糖皮質(zhì)激素的患者；②有嚴(yán)重肝、腎功能不全或其他嚴(yán)重器質(zhì)性疾病的患者；③存在免疫系統(tǒng)疾病或者內(nèi)分泌系統(tǒng)疾病的患者。

1.3 指標(biāo)測定方法[6，7]所有受試者保證清晨空腹，次日早晨約8∶00時抽取靜息狀態(tài)下肘靜脈3 ml血液，置于離心機中，4℃下2 000 r/min離心10 min(離心半徑為5.4 cm)，取上清液0.3～0.4 ml至無菌管內(nèi)。所有受試者平躺于手術(shù)臺上，完成相應(yīng)消毒、沖洗以及麻醉后，使用眼瞼撐開器撐開眼瞼的同時使用注射器從角膜緣進入前房，抽取0.15～0.20 ml房水后立即置入無菌管內(nèi)。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗對所有標(biāo)本進行血清以及房水中的血漿ET-1和Klotho蛋白水平的檢測。

2 結(jié)果

2.1 3組患者血清及房水中Klotho和ET-1水平比較 新生血管性青光眼組患者血清及房水中Klotho水平明顯低于原發(fā)性青光眼組和白內(nèi)障組，且原發(fā)性青光眼組明顯低于白內(nèi)障組(P<0.05)；新生血管性青光眼組患者血清及房水中Endothelin-1水平明顯高于原發(fā)性青光眼組和白內(nèi)障組，且原發(fā)性青光眼組明顯高于白內(nèi)障組(P<0.05)。見表2。

組別Klotho(ng/ml)血清房水ET-1(pg/ml)血清房水新生血管性青光眼組(n=92)35.52±4.8950.48±2.641.45±0.071.58±0.08原發(fā)性青光眼組(n=81)49.03±10.96*56.37±10.22*1.17±0.09*1.16±0.34*白內(nèi)障組(n=73)56.32±7.67*#65.07±12.33*#1.02±0.06*#0.98±0.06*# F值6.65310.25722.1234.101 P值0.0020.001<0.0010.043

注：與新生血管性青光眼組比較，*P<0.05；與原發(fā)性青光眼組比較，#P<0.05

2.2 3組患者血清及房水中其他臨床指標(biāo)水平比較 新生血管性青光眼組患者血清及房水中VEGF、IL-6以及PEDF水平明顯高于原發(fā)性青光眼組和白內(nèi)障組(P<0.05)，且原發(fā)性青光眼組明顯高于白內(nèi)障組(P<0.05)。見表3。

2.3 血清及房水中Klotho和Endothelin-1水平與各項生化指標(biāo)的相關(guān)性分析 在新生血管性青光眼組中，Klotho水平與年齡無相關(guān)性(P>0.05)，與VEGF、IL-6以及PEDF水平呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)；Endothelin-1水平與年齡相關(guān)性無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，與VEGF、IL-6以及PEDF水平呈正相關(guān)(P<0.05)。見表4。

3 討論

新生血管性青光眼疾病的病因以及發(fā)病機制等各方面都十分的復(fù)雜，且治療難度大，該病患者若無法得到及時有效的治療則會嚴(yán)重影響甚至損傷患者的視力功能[8]。該病是因為虹膜表面或者前房角生成新生血管，導(dǎo)致小梁網(wǎng)以及周邊的虹膜組織發(fā)生粘連，從而引起患者的眼球內(nèi)部眼壓升高的疾病[9,10]。其主要的病因是纖維血管膜收縮牽拉，使房角關(guān)閉，引起眼壓升高和劇烈疼痛[11]。鑒于這種青光眼的起因是新生血管而不是眼內(nèi)出血，Weiss等于1963年提出了新生血管性青光眼的名稱，該病嚴(yán)重影響了患者及其家屬的生活質(zhì)量，給很多家庭帶來了各種各樣的問題，因此如何有效的治療和診斷新生血管性青光眼是臨床上需要迫切解決的問題之一[12,13]。

組別VEGF(μg/L)血清房水IL-6(ng/ml)血清房水PEDF(pg/ml)血清房水新生血管性青光眼組(n=92)504.3±41.21118.4±159.7292.4±22.7691.2±50.198.63±6.72302.62±53.34原發(fā)性青光眼組(n=81)341.6±21.6*359.1±21.1*103.5±13.2*167.3±2.0*74.93±5.36*257.11±46.19*白內(nèi)障組(n=73)174.2±16.3*#184.8±17.2*#86.1±12.7*#92.2±9.6*#69.57±4.96*#228.64±42.17*# F值3.1713.38023.91237.1036.65352.180 P值0.0450.037<0.001<0.0010.002<0.001

注：與新生血管性青光眼組比較，*P<0.05；與原發(fā)性青光眼組比較，#P<0.05

表4 血清及房水中Klotho和Endothelin-1與生化指標(biāo)相關(guān)性分析

本次試驗采用酶聯(lián)免疫吸附試驗對所有標(biāo)本進行血清以及房水中的ET-1和Klotho蛋白水平的檢測。采用單因素方差分析比較，多重比較采用SNK-q檢驗。結(jié)果顯示新生血管性青光眼組患者血清及房水中Klotho水平明顯低于原發(fā)性青光眼組和白內(nèi)障組，且原發(fā)性青光眼組明顯低于白內(nèi)障組(P<0.05)；新生血管性青光眼組患者血清及房水中ET-1水平明顯高于原發(fā)性青光眼組和白內(nèi)障組，且原發(fā)性青光眼組明顯高于白內(nèi)障組(P<0.05)。其原因可能是因為結(jié)締組織的收縮是造成粘連性房角關(guān)閉的原因，而血漿ET-1可以特異性的直接作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞，顯著的抑制其的增殖和遷移[14,15]。

本次實驗結(jié)果顯示新生血管性青光眼組患者血清及房水中VEGF、IL-6以及PEDF水平明顯高于原發(fā)性青光眼組和白內(nèi)障組(P<0.05)，且原發(fā)性青光眼組明顯高于白內(nèi)障組(P<0.05)。有許多的研究發(fā)現(xiàn)Klotho因子的表達可以收到許多的因素所調(diào)節(jié)，同時其還參與了炎性反應(yīng)、氧化應(yīng)激反應(yīng)甚至是病理性尿毒素的調(diào)控[16,17]。本次實驗采用相關(guān)性分析方法探討血清及房水中Klotho和血漿ET-1水平與各項生化指標(biāo)的相關(guān)性。結(jié)果顯示在新生血管性青光眼組中，Klotho水平與年齡無相關(guān)性(P>0.05)，與VEGF、IL-6以及PEDF水平呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)；Endothelin-1水平與年齡相關(guān)性無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，與VEGF、IL-6以及PEDF水平呈正相關(guān)(P<0.05)。Klotho基因經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)其分布于神經(jīng)以及心血管系統(tǒng)中，與內(nèi)皮細(xì)胞、舒張血管細(xì)胞以及平滑肌細(xì)胞等細(xì)胞組合的生長密切關(guān)聯(lián)[18，19]。同時，Klotho因子的下調(diào)對氧化反應(yīng)起著一定的作用，其可以導(dǎo)致過氧化氫濃度的降低，減少過氧化氫所誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡[20]。

綜上所述，新生血管性青光眼患者血清及房水中Klotho和ET-1均存在異常表達，且與VEGF、IL-6以及PEDF水平具有相關(guān)性，可以作為一種參考新生血管性青光眼疾病發(fā)生或者發(fā)展的生物指標(biāo)。