對江浙地區(qū)高度近視眼人群進(jìn)行MYOC基因突變的調(diào)查

章立新，洪 楠，葉 蓓，夏建華，沈 曄*

（1.衢州職業(yè)技術(shù)學(xué)院醫(yī)學(xué)院，浙江 衢州 324000；2.浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院， 浙江 杭州 310003）

目前,對高度近視(HM）與原發(fā)性開角型青光眼（POAG）的關(guān)聯(lián)性進(jìn)行研究的困難較大。相關(guān)的調(diào)查研究表明，高度近視和原發(fā)性開角型青光眼常同時存在。高度近視人群發(fā)生原發(fā)性開角型青光眼的比例是非高度近視人群發(fā)生原發(fā)性開角型青光眼的7倍[1-2]。原發(fā)性開角型青光眼患者的近視率遠(yuǎn)高于非原發(fā)性開角型青光眼人群的近視率[3]。本次研究主要是調(diào)查江浙地區(qū)高度近視眼人群 MYOC基因突變的情況。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2015年10月至2016年10月期間在浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院住院治療的74例浙江籍近視眼患者作為研究對象。本次研究對象的納入標(biāo)準(zhǔn)是：1）患者無青光眼疾病。2）患者無青光眼疾病家族史。將這74例患者分為高度近視眼組（n=41）和非高度近視眼組（n=33）。在高度近視眼組患者中，有男性患者20例，女性21患者例；其平均年齡為（56.87±8.12）歲；其近視度數(shù)均大于900度；其眼軸長度均大于27 mm。在非高度近視眼患者中，有男性患者16例，女性患者17例；其平均年齡為（60.13±6.05）歲；其近視度數(shù)均小于300度；其眼軸長度均小于25 mm。兩組患者的一般資料相比，P＞0.05，具有可比性。

1.2 方法

對這兩組患者均進(jìn)行DNA提取、引物合成、PCR擴(kuò)增及MYOC基因測序，方法是：采集研究對象5 ml的外周靜脈血作為血液標(biāo)本。將此血液標(biāo)本放入含抗凝劑的試管中，然后將其放到-20 ℃的冰箱中保存。在實驗室對血液標(biāo)本進(jìn)行DNA提取、引物合成及PCR擴(kuò)增。然后，將血液標(biāo)本送至北京信諾佰世醫(yī)學(xué)檢驗所，采用Sanger雙脫氧鏈終止法對血液標(biāo)本進(jìn)行MYOC基因的啟動子、外顯子和內(nèi)含子測序。分別利用GenBank、dbSNP、ENCODE、ClinVar、ESP外顯子組數(shù)據(jù)庫和WWW.Myocilin.com等公共數(shù)據(jù)庫對本次研究的測序結(jié)果進(jìn)行MYOC基因突變點及致病情況的分析。

1.3 觀察指標(biāo)

比較兩組患者各項臨床指標(biāo)及對兩組患者M(jìn)YOC基因突變點及致病性進(jìn)行檢測的結(jié)果。本研究中的臨床指標(biāo)主要包括兩組患者等效球鏡度數(shù)、眼軸長度及眼內(nèi)壓。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

對本次研究中的數(shù)據(jù)均采用SPSS 19.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行處理，計量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，采用t檢驗，計數(shù)資料用百分比（%）表示，采用χ2檢驗。以P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者等效球鏡度數(shù)、眼軸長度及眼內(nèi)壓的比較

高度近視組眼患者的等效球鏡度數(shù)低于非高度近視眼組患者，其眼軸長度大于非高度近視眼組患者，其眼內(nèi)壓高于非高度近視眼組患者，P＜0.05。詳見表1。

表1 兩組患者等效球鏡度數(shù)、眼軸長度及眼內(nèi)壓的比較(）

表1 兩組患者等效球鏡度數(shù)、眼軸長度及眼內(nèi)壓的比較(）

組別 例數(shù) 等效球鏡度數(shù)(D)眼軸長度(mm) 眼內(nèi)壓(mmHg)高度近視眼組 41 -16.36±6.01 28.59±4.19 16.19±3.47非高度近視眼組 33 -0.21±1.91 22.77±0.87 14.78±3.51 t值 27.51 14.59 2.96 P值 0.00 0.00 0.03

2.2 對兩組患者M(jìn)YOC基因的突變點及致病性進(jìn)行檢測的結(jié)果

對兩組患者M(jìn)YOC基因的突變點及致病性進(jìn)行檢測的結(jié)果顯示，高度近視眼組患者M(jìn)YOC基因的致病性突變率高于非高度近視眼組患者，且其致病性突變發(fā)生在1號外顯子多于發(fā)生在3號外顯子。詳見表2。

表2 對兩組患者M(jìn)YOC基因的突變點及致病性進(jìn)行檢測的結(jié)果

3 討論

高度近視又被稱為病理性近視、進(jìn)展性近視和變性性近視。高度近視人群眼底后極部發(fā)生變性改變的幾率較高且危害較大。青光眼是一組視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞和神經(jīng)纖維層發(fā)生進(jìn)行性病理改變的眼部綜合征。青光眼患者可發(fā)生特征性視野缺損和視神經(jīng)萎縮。青光眼患者若得不到及時有效的治療，可導(dǎo)致其視野全部喪失。青光眼是一種不可逆的致盲性眼病[4]。原發(fā)性開角型青光眼患者的前部視神經(jīng)常發(fā)生進(jìn)展性病變，且常伴有視盤凹陷、視神經(jīng)萎縮及視野缺損等情況。部分原發(fā)性開角型青光眼患者的眼壓并不高，即使其處在嚴(yán)重青光眼性視神經(jīng)結(jié)構(gòu)功能損害的階段，其眼壓仍處于正常的范圍內(nèi)[5]。在對合并有原發(fā)性開角型青光眼的高度近視眼患者的病情進(jìn)行診斷時，常發(fā)生以下幾種情況，導(dǎo)致臨床醫(yī)師無法對其病情進(jìn)行準(zhǔn)確的早期診斷。1）患者的眼壓處于正常的范圍內(nèi)。2）高度近視眼患者的視杯較大，也可發(fā)生視盤凹陷[6]。3）高度近視眼患者的近視弧較大，可導(dǎo)致其視網(wǎng)膜脈絡(luò)膜發(fā)生萎縮，使臨床醫(yī)師無法正確判斷其發(fā)生視盤蒼白及萎縮的原因。4）患者的鞏膜、脈絡(luò)膜組織在鼻側(cè)發(fā)生過度牽引，導(dǎo)致其顳側(cè)視網(wǎng)膜血管變直，進(jìn)而使其血管發(fā)生移位[7]。5）原發(fā)性開角型青光眼及高度近視眼患者均會導(dǎo)致其近視程度加深，這使高度近視患者放松了對發(fā)生原發(fā)性開角型青光眼的警惕性，導(dǎo)致很多合并有原發(fā)性開角型青光眼的高度近視眼患者的病情未得到準(zhǔn)確的早期診斷。近年來，臨床上對合并有原發(fā)性開角型青光眼的高度近視眼患者的病情進(jìn)行診斷的技術(shù)有了進(jìn)一步的提高[8-9]。但目前的診斷技術(shù)還無法準(zhǔn)確地篩查出未來可能發(fā)展成原發(fā)性開角型青光眼的人群。因此，本次研究對江浙地區(qū)高度近視眼人群進(jìn)行MYOC基因突變的調(diào)查，可從其基因分子水平上研究原發(fā)性開角型青光眼的致病基因位點，以便更好地認(rèn)識該病的發(fā)病機(jī)制，提高我國早期診斷原發(fā)性開角型青光眼的準(zhǔn)確性。截至目前，臨床上已經(jīng)發(fā)現(xiàn)至少20個遺傳片段與原發(fā)性開角型青光眼有關(guān)，其中17個基因片段被人類基因組組織（www.genenames.org）命名委員會命名。在這些基因片段中，MYOC基因是最早被發(fā)現(xiàn)的原發(fā)性開角型青光眼的致病基因之一[10-11]。MYOC基因位于染色體1q24.3–q25.2上，具有3個外顯子，2個內(nèi)含子和一個啟動子。近年來，關(guān)于原發(fā)性開角型青光眼的遺傳相關(guān)基因的研究較多，但仍存在很多問題：1）目前只發(fā)現(xiàn)與原發(fā)性開角型青光眼相關(guān)的基因，但這些相關(guān)的基因在導(dǎo)致患者發(fā)生原發(fā)性開角型青光眼的機(jī)制中尚無定論。2）不同地理區(qū)域、不同種族的人群存在遺傳背景差異。對此問題進(jìn)行研究的有印度地區(qū)的Mukhopadh等[12]、日本地區(qū)的Ikezoe等[13]、摩洛哥地區(qū)的Melki等[14]、澳大利亞地區(qū)的Mackey等[15]、中國洛陽家系的王鳳云等[16]、中國徐州家系的孔琛柯等[17]、中國南方地區(qū)家系的魏雁濤等[18]學(xué)者。目前，對原發(fā)性開角型青光眼發(fā)生基因突變的研究僅局限在一部分區(qū)域，缺乏全面性及針對性，不能代表普遍現(xiàn)象[19]。中國江浙地區(qū)人群MYOC基因突變位點未見報道?？紤]到人群的差異，可能還有部分的中國人群特異的基因位點有待發(fā)現(xiàn)[20]。本次研究的結(jié)果顯示，高度近視眼組患者的等效球鏡度數(shù)低于非高度近視眼組患者，其眼軸長度大于非高度近視眼組患者，其眼內(nèi)壓高于非高度近視眼組患者，P＜0.05。對兩組患者M(jìn)YOC基因突變點及致病性進(jìn)行檢測的結(jié)果顯示，高度近視眼組患者M(jìn)YOC基因的致病性突變率高于非高度近視眼組患者，且其致病性突變發(fā)生在1號外顯子多于發(fā)生在3號外顯子。這與周曉敏[21]的研究結(jié)果（高度近視眼患者存在200多個MYOC基因序列改變，其中約40%為致病性突變，約90%的致病性突變發(fā)生在3號外顯子）有所不同。

綜上所述，中國江浙地區(qū)高度近視眼人群MYOC基因的致病性突變率遠(yuǎn)高于非高度近視眼人群，且其致病性突變發(fā)生在1號外顯子多于發(fā)生在3號外顯子。