一例種鴨場(chǎng)沙門氏菌和大腸桿菌混感的臨床診治

劉存霞 張華 盛媛 劉麗萍 劉娜 田雪 路曉 吳靜 劉玉山 王林 宋敏訓(xùn)

摘? 要：雛鴨沙門氏菌病是由沙門氏菌感染引起的一種急性流行性傳染性疾病，具有很高的致死率。某種鴨場(chǎng)臨床上出現(xiàn)雛鴨零星死亡，采食量下降，剖檢可見漿膜炎、包心包肝、肝臟腫大出血、脾臟出血壞死，送檢樣品經(jīng)細(xì)菌分離、鏡檢、PCR檢測(cè)，鑒定為沙門氏菌、大腸桿菌混合感染，根據(jù)藥敏試驗(yàn)結(jié)果，聯(lián)合使用頭孢曲松鈉、氟苯尼考治療，效果顯著。

關(guān)鍵詞：鴨;沙門氏菌;大腸桿菌;混感

中圖分類號(hào)：S858.32???? 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：C???? 文章編號(hào)：1673-1085（2020）3-0040-03

沙門氏菌病（Salmonellosis）是由腸桿菌科一個(gè)重要菌屬沙門氏菌屬（Salmonella）感染人和各種動(dòng)物引起的慢性和急性疾病的總稱[1，2]。被沙門氏菌污染的家禽及其他產(chǎn)品可以經(jīng)食物鏈傳播給人，造成人的食物中毒，嚴(yán)重者甚至死亡[3]。沙門氏菌在成年家禽體內(nèi)主要以隱性感染存在，通常不表現(xiàn)出明顯的臨床癥狀而長(zhǎng)期帶菌垂直傳播，目前，我國(guó)防控沙門氏菌的核心方法仍是種群凈化，以防止病原進(jìn)入種禽場(chǎng)生產(chǎn)鏈導(dǎo)致后代禽群受感染[4，5]。近年來(lái)隨著種鴨養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)不斷向集約化、規(guī)模化方向發(fā)展，易發(fā)生沙門氏菌及大腸桿菌混感，給養(yǎng)殖企業(yè)造成不可挽回的經(jīng)濟(jì)損失。

1? 材料與方法

1.1? 試劑? Simply P病毒DNA/RNA共提取試劑盒購(gòu)自杭州博日科技有限公司，HiScript II One Step RT-PCR Kit購(gòu)自Vazyme公司（南京諾唯贊生物科技有限公司），藥敏試劑片購(gòu)自溫州市康泰生物科技有限公司，雞白痢血清平板凝集標(biāo)準(zhǔn)抗原購(gòu)自青島易邦生物工程有限公司。

1.2? 臨床癥狀及剖檢? 2019年11月，某種鴨場(chǎng)的雛鴨自7日齡免疫鴨黃病毒及鴨肝炎疫苗后出現(xiàn)大面積死亡，采食量略有下降，伴有少量呼吸道癥狀，同場(chǎng)父母代種蛋鴨產(chǎn)蛋量由90%下降至80%，孵化率下降。送檢10日齡病死鴨，雛鴨瘦弱，剖檢可見漿膜炎、包心包肝、脾臟出血壞死，肝臟腫大有出血，見圖1、圖2、圖3。

1.3? 樣品采集與處理? 采集病死雛鴨的病變肝臟、腦組織，孵化器中的死胚和飲水進(jìn)行細(xì)菌分離。取病死鴨的肝臟、脾臟、腦組織按體積1：4加入無(wú)菌生理鹽水研磨，加入終濃度1000U雙抗，4℃作用2h，凍融3次，8000rpm/min離心10min取上清-20℃保存?zhèn)溆?。另外采集種鴨、雛鴨血液分離血清，4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.4? 細(xì)菌分離培養(yǎng)? 取病變肝臟、脾臟無(wú)菌條件下用接種環(huán)挑取組織涂5%血清LB平板;鴨腦無(wú)菌剝離頭蓋骨，挑取腦中組織涂于5%血清LB平板;死亡胚胎外表用75%酒精消毒，無(wú)菌取卵黃液，接種于5%血清LB平板，37℃培養(yǎng)過夜，取200μL水樣涂5%血清LB平板，分離的細(xì)菌進(jìn)行鏡檢及PCR檢測(cè)。

1.5? 血清學(xué)檢測(cè)? 將采集分離的種鴨、雛鴨血清樣本利用平板凝集試驗(yàn)檢測(cè)沙門氏菌抗體。

1.6? PCR檢測(cè)

1.6.1? 病料檢測(cè)? 取處理勻漿液200μL，按Simply P病毒DNA/RNA共提取試劑盒操作說明提取核酸，用實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)合成的檢測(cè)引物分別檢測(cè)鴨肝炎病毒、鴨黃病毒、鴨呼腸孤病毒、腺病毒、鴨圓環(huán)病毒、鴨瘟病毒。

1.6.2? 細(xì)菌檢測(cè)? 利用PCR方法對(duì)分離的細(xì)菌進(jìn)行沙門氏菌、鴨疫里默氏桿菌和大腸桿菌檢測(cè)。

1.7? 藥敏試驗(yàn)? 取細(xì)菌分離培養(yǎng)的單菌落，以生理鹽水稀釋后涂布于5%血清LB平板上，選取克林霉素、林可霉素、丁胺卡那、恩諾沙星、氟苯尼考、頭孢噻肟、頭孢曲松、紅霉素藥敏片貼于平板上，37℃培養(yǎng)過夜，用游標(biāo)卡尺量取抑菌圈直徑。

2? 結(jié)果與分析

2.1? 細(xì)菌分離及血清學(xué)檢測(cè)結(jié)果? 從肝臟、腦、死胚卵黃中均分離出細(xì)菌，見圖4。

其中從死胚卵黃中分離到兩種大小、形態(tài)不同的細(xì)菌，經(jīng)革蘭氏染色，均為陰性桿菌。飲用水細(xì)菌分離為陰性。經(jīng)過平板凝集方法檢測(cè)種鴨、雛鴨血清樣本均為陰性。

2.2? PCR檢測(cè)結(jié)果? 肝臟、脾臟和腦組織檢測(cè)鴨肝炎病毒、鴨黃病毒、鴨呼腸孤病毒、腺病毒、鴨圓環(huán)病毒、鴨瘟病毒均為陰性;死胚卵黃中分離到的兩種細(xì)菌經(jīng)檢測(cè)分別為沙門氏菌和大腸桿菌陽(yáng)性，病死雛鴨肝臟和腦中分離到的細(xì)菌經(jīng)檢測(cè)均為大腸桿菌陽(yáng)性。

2.3? 藥敏試驗(yàn)? 取本實(shí)驗(yàn)室分離到的沙門氏菌和大腸桿菌，分別用克林霉素、林可霉素、丁胺卡那、恩諾沙星、氟苯尼考、頭孢噻肟、頭孢曲松、紅霉素進(jìn)行藥敏試驗(yàn)。結(jié)果顯示，氟苯尼考、頭孢噻肟、頭孢曲松、丁胺卡那為高度敏感，見表1、表2所示。

2.4? 治療? 根據(jù)藥敏試驗(yàn)結(jié)果，聯(lián)合使用頭孢曲松鈉、氟苯尼考進(jìn)行治療，療效較顯著，病死率逐漸下降。推薦加強(qiáng)種蛋入孵前的消毒及孵化器清潔消毒，取得了很好的效果。

3? 討論

種禽場(chǎng)沙門氏菌病是一種危害非常嚴(yán)重的細(xì)菌性傳染性，因其是一種條件致病菌，且可垂直傳播也可水平傳播，給該病的防控帶來(lái)較大困難。目前，該病的防控主要通過持續(xù)不斷的檢疫和淘汰沙門氏菌陽(yáng)性種禽來(lái)完成種禽場(chǎng)凈化。該種禽場(chǎng)一直嚴(yán)格按照標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)模式管理，此次雛鴨出雛后即出現(xiàn)大量弱雛，7日齡免疫后死亡率突然增高，經(jīng)核酸檢測(cè)，鴨肝炎病毒、鴨黃病毒、鴨呼腸孤病毒、腺病毒、鴨圓環(huán)病毒、鴨瘟病毒均為陰性，從肝臟和腦中分離到大腸桿菌。進(jìn)而對(duì)種鴨、孵化設(shè)施、飲水、死胚進(jìn)一步檢測(cè)，結(jié)果從死胚中分離到沙門氏菌和大腸桿菌，推測(cè)孵化過程中存在沙門氏菌、大腸桿菌混合感染。根據(jù)藥敏試驗(yàn)結(jié)果聯(lián)合使用頭孢曲松鈉和氟苯尼考，療效較顯著。通過加強(qiáng)種蛋入孵前的消毒及孵化器清潔消毒，使該病得到有效控制。

綜上所述，做好種禽場(chǎng)種源輸入檢疫、嚴(yán)格的生產(chǎn)管理及衛(wèi)生消毒對(duì)防控鴨沙門氏菌傳播具有重要意義。

參考文獻(xiàn)：

[1]? 齊靜，王守榮，李蘭波，等.山東省肉鴨沙門氏菌的分離鑒定及敏感抗菌藥物的篩選[J].中國(guó)畜牧獸醫(yī)，2014，41（07）：216-220.

[2]? 曲歌，沙萬(wàn)里，高雪，等.吉林地區(qū)規(guī)?；i場(chǎng)大腸桿菌和沙門氏菌性仔豬腹瀉流行情況調(diào)查[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2020，48（03）：89-90+100.

[3]? 王菲，張玲，楊佳怡，等.基于實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)的沙門氏菌標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)驗(yàn)證研究[J/OL].食品與發(fā)酵工業(yè)：1-9[2020-03-17].https：//doi.org/10.13995/j.cnki.11-1802/ts.022950.

[4]? 王紅寧.蛋雞沙門氏菌病凈化研究[J].中國(guó)家禽，2012，34（01）：37.

[5]? 盧國(guó)強(qiáng).種雞場(chǎng)雞白痢沙門氏菌病的凈化[J].北方牧業(yè)，2019（16）：26-27.

基金項(xiàng)目：山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院青年科研基金（2015YQN54）;山東省現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系家禽產(chǎn)業(yè)創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)（SDAIT-11-01）;山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)科技創(chuàng)新工程（CXGC2016A10）;山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)科技創(chuàng)新工程學(xué)科團(tuán)隊(duì)（CXGC2018E11）。

作者簡(jiǎn)介：劉存霞（1980-），女，山東東營(yíng)人，博士，副研究員，主要從事動(dòng)物分子病毒學(xué)及流行病學(xué)研究，E-mail：liucunxia9@163.com。

通訊作者：宋敏訓(xùn)（1963-），男，研究員，主要從事家禽免疫與防控技術(shù)研究，E-mail：mxsong@aliyun.com。