家禽卵泡閉鎖機(jī)制的研究進(jìn)展

鄒坤 路麗麗 Collins Asiamah Amponsah 薛緣 張少偉 蘇瑛 趙志輝

（廣東海洋大學(xué)農(nóng)學(xué)院，湛江 524088）

卵泡閉鎖是一種多因素調(diào)控的選擇性的細(xì)胞凋亡的生理現(xiàn)象。自從1976 年Gilbert［1］第一次用機(jī)械分離法將雞卵泡顆粒細(xì)胞和膜細(xì)胞分離培養(yǎng)后，研究者開(kāi)始在其基礎(chǔ)上對(duì)卵泡內(nèi)細(xì)胞培養(yǎng)體系進(jìn)行改良和優(yōu)化，為卵泡發(fā)育和閉鎖的研究奠定了基礎(chǔ)。目前，大量研究表明卵泡閉鎖的根本原因是由顆粒細(xì)胞的凋亡引起的［2-4］。然而，在哺乳動(dòng)物的研究中發(fā)現(xiàn)卵泡閉鎖不僅是顆粒細(xì)胞的凋亡，而且是顆粒細(xì)胞自噬到凋亡的一個(gè)過(guò)程，自噬的發(fā)生先于凋亡，二者存在動(dòng)態(tài)平衡的關(guān)系，并證明了顆粒細(xì)胞的自噬和凋亡呈促性腺激素依賴(lài)性［5-6］。由此可見(jiàn)，針對(duì)卵泡閉鎖的機(jī)制仍有待進(jìn)一步探討，尤其在家禽方面，將對(duì)挖掘家禽的產(chǎn)蛋性能有重大意義。因此，本文對(duì)近幾年關(guān)于卵泡內(nèi)細(xì)胞自噬和凋亡引起卵泡閉鎖的研究進(jìn)行綜述，旨為家禽卵泡閉鎖機(jī)制的研究提供理論依據(jù)。

1 閉鎖卵泡內(nèi)細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化

家禽卵泡閉鎖在卵泡發(fā)育的各個(gè)時(shí)期都有發(fā)生，具有明顯的形態(tài)學(xué)特征變化。當(dāng)閉鎖發(fā)生時(shí)，卵泡由圓潤(rùn)飽滿開(kāi)始皺縮變形，顏色由光亮變灰暗并有明顯出血點(diǎn)［3］。一般卵泡閉鎖分為兩種形式：一種是始于卵母細(xì)胞，即在卵泡發(fā)育前卵母細(xì)胞直接發(fā)生凋亡引起卵泡閉鎖；一種是始于顆粒細(xì)胞，即在發(fā)育過(guò)程中由于顆粒細(xì)胞凋亡而引起卵泡閉鎖［7-8］。根據(jù)結(jié)構(gòu)的變化，顆粒細(xì)胞凋亡形式分為兩種，第一種是正常顆粒細(xì)胞之間在原位發(fā)生凋亡；第二種是顆粒細(xì)胞脫落到卵泡腔內(nèi)形成凋亡小體發(fā)生凋亡［9］。Lin 等［10］對(duì)哺乳動(dòng)物卵泡顆粒細(xì)胞研究發(fā)現(xiàn)，閉鎖卵泡中的顆粒細(xì)胞層和膜細(xì)胞層明顯變的松散、破裂、凹陷、甚至脫落。黃正洋等［9］在鵝的閉鎖卵泡發(fā)現(xiàn)與Lin［10］在哺乳動(dòng)物閉鎖卵泡的發(fā)現(xiàn)基本一致，并通過(guò)透視電鏡發(fā)現(xiàn)正常卵泡有明顯邊界，而閉鎖卵泡邊界不清晰，且還發(fā)現(xiàn)閉鎖卵泡顆粒細(xì)胞層與膜層邊界不明顯。這種現(xiàn)象可能是由于發(fā)生卵泡閉鎖后，細(xì)胞內(nèi)的細(xì)胞器以及各種內(nèi)容物被分解附著在卵泡邊界所致。以上結(jié)果表明，哺乳動(dòng)物與家禽的卵泡閉鎖的形態(tài)學(xué)變化基本一致，先是顆粒細(xì)胞線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)等生物學(xué)活性減弱，通過(guò)分泌細(xì)胞信號(hào)因子抑制膜細(xì)胞與外界的物質(zhì)交換，同時(shí)抑制卵母細(xì)胞的活動(dòng)，在顆粒細(xì)胞的主導(dǎo)下三者共同作用調(diào)控引起卵泡發(fā)生閉鎖［11-13］。據(jù)報(bào)道，Choi 等［14］在體外利用細(xì)胞饑餓法誘導(dǎo)顆粒細(xì)胞凋亡，用熒光免疫染色法對(duì)顆粒細(xì)胞染色觀察，發(fā)現(xiàn)顆粒細(xì)胞出現(xiàn)正常的核皺縮、破裂等凋亡現(xiàn)象。在透視電鏡下還發(fā)現(xiàn)大量顆粒細(xì)胞出現(xiàn)細(xì)胞質(zhì)累積，雙膜結(jié)合的空泡，細(xì)胞器發(fā)生變化，大量自噬體累積等現(xiàn)象。郭燕君等［15］通過(guò)對(duì)小鼠微管相關(guān)蛋白1輕 鏈3（Microtubule-associated proteins light chain 3，LC3）的定位也發(fā)現(xiàn)顆粒細(xì)胞凋亡過(guò)程中伴隨著大量自噬體的產(chǎn)生。以上研究結(jié)果表明，顆粒細(xì)胞自噬可能也是卵泡閉鎖的一種調(diào)節(jié)方式。

2 卵泡內(nèi)細(xì)胞調(diào)控

家禽卵泡閉鎖的發(fā)生與顆粒細(xì)胞、膜細(xì)胞、卵母細(xì)胞或次級(jí)卵母細(xì)胞之間的調(diào)控密切相關(guān)。它們之間通過(guò)信號(hào)傳導(dǎo)、物質(zhì)交換及轉(zhuǎn)化等方式共同維持卵泡內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定，防止卵泡閉鎖的發(fā)生。綜述下文文獻(xiàn)報(bào)道，其簡(jiǎn)化調(diào)控模式圖見(jiàn)圖1。

2.1 卵母細(xì)胞調(diào)控機(jī)制

圖1 卵母細(xì)胞、顆粒細(xì)胞、膜細(xì)胞之間相互調(diào)控關(guān)系

家禽卵母細(xì)胞是卵泡內(nèi)最大的細(xì)胞，被顆粒細(xì)胞和膜細(xì)胞包裹，它調(diào)控卵泡閉鎖的機(jī)制主要與原始卵泡的啟動(dòng)有關(guān)。據(jù)報(bào)道，原始卵泡的生長(zhǎng)發(fā)育啟動(dòng)是由顆粒細(xì)胞分泌的干細(xì)胞因子（Stem cell growth factors，SCF）結(jié)合卵母細(xì)胞上的c-kit 受體共同完成，此過(guò)程并不依賴(lài)激素調(diào)節(jié)［16］。若原始卵泡未接收到啟動(dòng)信號(hào)，卵母細(xì)胞則一直處于“休眠狀態(tài)”，最終在顆粒細(xì)胞分泌的白細(xì)胞介素1β（Interleukin- 1β，IL1-β）和腫瘤壞死因子α（Tumor necrosis factor，TNF-α）的作用下原始卵泡開(kāi)始皺縮、裂解，最終發(fā)生閉鎖，在3 日齡之前雞會(huì)有90%的原始卵泡發(fā)生閉鎖［7，17-18］。當(dāng)卵母細(xì)胞接收到啟動(dòng)信號(hào)后，在SCF 的作用下卵母細(xì)胞分泌生長(zhǎng)分化因子（Growth differentiation factor 9，GDF9）作用顆粒細(xì)胞，促進(jìn)顆粒細(xì)胞上促卵泡素受體（Folliclestimulating hormone receptor，F(xiàn)SHR）的率先表達(dá)，F(xiàn)SHR 在FSH 的作用下正反饋調(diào)節(jié)卵母細(xì)胞，增強(qiáng)GDF9 信號(hào)作用，同時(shí)GDF9 作用膜細(xì)胞促進(jìn)膜細(xì)胞上類(lèi)固醇合成急性調(diào)節(jié)蛋白（Steroidogenic acute regulatory protein，StAR）與細(xì)胞色素P450 家族 的17A1/19A1（CytochromeP450，F(xiàn)amily 17 /19，Subfamily A，Polypeptide1，CYP17/19A1）的表達(dá)和細(xì)胞膜上內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的活性［19］。顆粒細(xì)胞上的FSHR 的表達(dá)也標(biāo)志著卵泡發(fā)育的啟動(dòng)［3］。Yongje［20］通過(guò)下調(diào)GDF9 的表達(dá)發(fā)現(xiàn)顆粒細(xì)胞的增殖分化受到抑制，因此GDF9 可能是顆粒細(xì)胞增殖的必須因子，但也有研究發(fā)現(xiàn)卵母細(xì)胞的啟動(dòng)信號(hào)受抗繆勒氏激素（Anti-mullerian hormone，AMH）的調(diào) 控［17-18］，其具體機(jī)制仍有待進(jìn)一步研究。通過(guò)抑制或敲除雞FSHR 在顆粒細(xì)胞的表達(dá)，則會(huì)導(dǎo)致孕酮、雌激素、LH、TGFβ 等迅速下調(diào)甚至不表達(dá)，卵母細(xì)胞快速進(jìn)入凋亡期，導(dǎo)致卵泡發(fā)生閉鎖［21-23］。因此，GDF9 和FSHR 的下調(diào)可能是引起卵母細(xì)胞凋亡，進(jìn)而調(diào)控卵泡閉鎖的重要原因。

2.2 顆粒細(xì)胞調(diào)控機(jī)制

家禽卵泡顆粒細(xì)胞是卵泡內(nèi)數(shù)量、比重以及功能最多的細(xì)胞，它的增殖分化和凋亡主導(dǎo)卵泡的發(fā)育，決定卵泡的閉鎖。在家禽正常發(fā)育階段，家禽卵泡閉鎖主要與其嚴(yán)格的選擇機(jī)制有關(guān)。只有被選擇的卵泡的顆粒細(xì)胞才具有較強(qiáng)的分化能力，在FSH 的作用下顆粒細(xì)胞迅速增殖分化進(jìn)入優(yōu)勢(shì)卵泡階段［22，24-25］。未被選擇的卵泡顆粒細(xì)胞FSHR 表達(dá)量下調(diào)甚至不表達(dá)，F(xiàn)SH 與FSHR 結(jié)合的活性減弱，抑制顆粒細(xì)胞膜環(huán)磷酸腺苷（Cyclic adenosine monophosphate，cAMP），通過(guò)下調(diào)cAMP的濃度抑制cAMP-PKA 信號(hào)通路。顆粒細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄活性下降，CYP11A1、CYP17A1、StAR 等重要固醇轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白下調(diào)，同時(shí)下調(diào)顆粒細(xì)胞上雌激素受體（Estrogen receptor，ESR）、胰島素樣生長(zhǎng)因子受體（Insulin like growth factor receptor，IGFR）、黃體素受體（Luteinizing hormone receptor，LHR）等受體的表達(dá)［11，26-28］。隨著FSH 的作用減弱，與其級(jí)聯(lián)反應(yīng)的cAMP 依賴(lài)蛋白激酶A（Protein kinase A，PKA），P13K/Akt 信號(hào)均被抑制［29］。此外，F(xiàn)SH 的作用減弱導(dǎo)致顆粒細(xì)胞膜上Ca2+的濃度下調(diào)上游蛋白R(shí)as，Ras 下調(diào)絲裂原活化蛋白激酶（Mitogen-activated protein kinase，MAPK）家族信號(hào)通路，ERK1/2 的作用被減弱，顆粒細(xì)胞周期蛋白cyclinD2 的合成停止。同時(shí)，ERK5 信號(hào)通路增強(qiáng)，激活Caspase 信號(hào)通路，促進(jìn)顆粒細(xì)胞凋亡［30-31］。隨著顆粒細(xì)胞上ESR、FSHR 等G 蛋白偶聯(lián)受體的表達(dá)量下調(diào)，它們可與IGF、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子（Transforming growth factor，TGF）等家族的受體構(gòu)成的復(fù)合受體在溶酶體的作用下裂解，顆粒細(xì)胞的一系列生理活動(dòng)逐漸停止，凋亡信號(hào)增強(qiáng)［32-34］。Wang 等［35］利用轉(zhuǎn)錄組富集信號(hào)通路發(fā)現(xiàn)，在雞等級(jí)卵泡選擇過(guò)程中，被選擇優(yōu)勢(shì)卵泡過(guò)程中還存在較強(qiáng)Wnt4 信號(hào)的調(diào)控，而閉鎖卵泡中Wnt4 的信號(hào)富集顯著弱于優(yōu)勢(shì)卵泡，說(shuō)明Wnt4 信號(hào)的減弱可能也會(huì)引起卵泡閉鎖。在凋亡因子的作用下，卵泡內(nèi)顆粒細(xì)胞由整齊緊湊逐漸變得疏松凌亂，最終卵泡發(fā)生閉鎖。

顆粒細(xì)胞的凋亡是引起卵泡閉鎖的根本原因，而顆粒細(xì)胞的凋亡主要受細(xì)胞凋亡因子的調(diào)控。卵泡閉鎖早期，卵泡內(nèi)固醇的合成以及生長(zhǎng)因子無(wú)顯著差異變化，而是顆粒細(xì)胞上的FSHR、ESR、LHR等受體的數(shù)量減少，一系列蛋白合成以及酶的活性降低，線粒體活動(dòng)減弱［21］。隨即顆粒細(xì)胞凋亡誘導(dǎo)因子（Apoptosis inducing factor，AIF）的表達(dá)量升高，細(xì)胞膜上的FAS 和FASL 信號(hào)作用增強(qiáng)，Akt信號(hào)通路作用B 淋巴細(xì)胞瘤2（B-cell lymphoma-2，Bcl2），Bcl2 的磷酸化和氧化作用增強(qiáng)，釋放Bax、Bak，與其聯(lián)級(jí)的Caspase3 信號(hào)作用也增強(qiáng)，并通過(guò)Caspase8 切割Bcl2 正反饋調(diào)控凋亡信號(hào)，在TNF-α 和IL-β 的作用下進(jìn)入凋亡程序。在顆粒細(xì)胞凋亡信號(hào)的作用下，膜細(xì)胞隨著顆粒細(xì)胞的凋亡而凋亡，最終卵母細(xì)胞也隨之凋亡。當(dāng)顆粒細(xì)胞的凋亡率達(dá)到10%時(shí)，標(biāo)志著卵泡進(jìn)入閉鎖狀態(tài)［36］。卵泡在發(fā)育過(guò)程中受到多種信號(hào)通路的調(diào)控，但其信號(hào)通路的作用強(qiáng)度依賴(lài)顆粒細(xì)胞內(nèi)的激素及受體作用。

2.3 膜細(xì)胞調(diào)控機(jī)制

家禽卵泡膜細(xì)胞位于卵泡膜內(nèi)側(cè)，顆粒細(xì)胞層外側(cè)，是連接卵泡內(nèi)和卵泡外物質(zhì)和信號(hào)交流的重要通道，也是卵泡內(nèi)固醇合成加工的重要場(chǎng)所。卵泡膜細(xì)胞層主要由膜細(xì)胞、毛細(xì)血管和基底膜構(gòu)成，在膜細(xì)胞的表面含有大量的滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)以及脂類(lèi)物質(zhì)構(gòu)成的小泡狀結(jié)構(gòu)。Gan 等［37］發(fā)現(xiàn)CYP17A1 和CYP19A1 主要表達(dá)在膜細(xì)胞，它們的密度、生存能力和它們合成固醇類(lèi)物質(zhì)的能力趨勢(shì)是一致的。當(dāng)卵泡發(fā)生閉鎖時(shí)，凋亡信號(hào)增強(qiáng)，負(fù)反饋?zhàn)饔妙w粒細(xì)胞和卵母細(xì)胞GDF9 的分泌，抑制膜細(xì)胞的增殖分化。膜細(xì)胞在凋亡因子的作用下，CYP17A1、CYP19A1 和StAR 被抑制甚至失活，而CYP17A1、CYP19A1 和StAR作為cAMP的依賴(lài)基因，因此cAMP-FSHR 信號(hào)的傳導(dǎo)也被抑制［24，38］。此外，家禽卵泡排卵時(shí)，會(huì)形成臨時(shí)分泌器官黃體，而膜細(xì)胞是通過(guò)豐富的毛細(xì)血管為顆粒細(xì)胞和黃體提供連接橋梁。由膜細(xì)胞分泌的BMP 減少，卵泡膜上毛細(xì)血管系統(tǒng)的發(fā)育受到阻滯，通過(guò)毛細(xì)血管連接以及膜連接與卵泡外進(jìn)行營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的交換、信息交流以及生長(zhǎng)因子的轉(zhuǎn)化能力減弱；另一方面通過(guò)間隙連接顆粒細(xì)胞為顆粒細(xì)胞和卵母細(xì)胞的發(fā)育提供營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和信息交流逐漸停止，加速卵泡閉鎖過(guò)程［24，39］。更為重要的是，膜細(xì)胞是雌激素、雄激素和孕酮等固醇合成和轉(zhuǎn)運(yùn)的主要場(chǎng)所［40］。膜細(xì)胞在LH 的作用下促進(jìn)CYP17A1 和CYP19A1 的大量表達(dá)，同時(shí)活化膜上的芳香化酶，膜細(xì)胞通過(guò)將卵泡外的固醇類(lèi)物質(zhì)合成雄激素，維持卵泡內(nèi)必須的雄激素含量外，在芳香化酶的作用下可將自身合成的雄激素以及顆粒細(xì)胞分泌的雄激素轉(zhuǎn)化為雌激素，刺激顆粒細(xì)胞的發(fā)育［41］。當(dāng)膜細(xì)胞分泌大量雌激素時(shí)，雌二醇會(huì)負(fù)反饋?zhàn)饔肔H 信號(hào)，維持卵泡內(nèi)雄激素和雌激素動(dòng)態(tài)平衡［36，42］。因此，CYP17A1 和CYP19A1 的失活可能打破卵泡內(nèi)激素動(dòng)態(tài)平衡，是引起卵泡閉鎖的一個(gè)重要因素。此外，Hattori 等［43］通過(guò)將膜細(xì)胞和顆粒細(xì)胞共培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)，膜細(xì)胞LH軸可以通過(guò)旁分泌上調(diào)雄激素或雌激素的合成激活I(lǐng)GF 信號(hào)抑制顆粒細(xì)胞凋亡和卵泡閉鎖。綜上所述，膜細(xì)胞參與卵泡閉鎖可能與細(xì)胞間信息交換和卵泡內(nèi)激素平衡有關(guān)。

3 顆粒細(xì)胞自噬

卵泡內(nèi)細(xì)胞自噬主要是卵泡在其發(fā)育過(guò)程中凈化自身參與或者受損細(xì)胞器的作用機(jī)制，機(jī)體借此維持蛋白代謝的平衡。目前，關(guān)于自噬調(diào)控家禽卵泡閉鎖的研究主要在顆粒細(xì)胞自噬，其調(diào)控機(jī)制主要包括兩個(gè)方面：（1）負(fù)調(diào)控因子m-tor 信號(hào)通路。（2）正調(diào)控因子JNK 信號(hào)通路。在雞顆粒細(xì)胞自噬的過(guò)程激活凋亡信號(hào)，二者共同調(diào)控卵泡閉鎖［44］。

顆粒細(xì)胞自噬主要發(fā)生在等級(jí)卵泡發(fā)育階段，尤其在優(yōu)勢(shì)卵泡選擇之后，卵泡發(fā)育中顆粒細(xì)胞自噬對(duì)促性腺激素（Gonadotropic hormone，GnH）呈線性負(fù)相關(guān)［5，9］。哺乳動(dòng)物顆粒細(xì)胞在GnH的作用下，F(xiàn)SH 通過(guò)上調(diào)P13K/AKT 信號(hào)，增加AKT 和S6K 的磷酸化，活化m-tor 信號(hào)，m-tor 通過(guò)m-torc1 的作用增強(qiáng)細(xì)胞內(nèi)的活性蛋白合成，提高細(xì)胞活性并抑制LC3-II 和Caspase3 的表達(dá)，抑制細(xì)胞自噬和凋亡［45］。也有研究表明，F(xiàn)SH 也可以直接通過(guò)m-tor 活化因子MHY1485 的作用激活m-tor 顯著抑制自噬信號(hào)，但通過(guò)FSH 處理顆粒細(xì)胞發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)SH 可顯著上調(diào)低氧誘導(dǎo)因子1（Hypoxia inducible factor1α，HIF1α）的表達(dá)，并通過(guò)HIF1α 的作用誘導(dǎo)自噬信號(hào)的傳導(dǎo)引起卵泡閉鎖［46］。m-tor 作為m-tor/HIF1α 軸的上游主要信號(hào)因子，F(xiàn)SH 通過(guò)活化HIF1α 的作用可能遠(yuǎn)遠(yuǎn)弱于m-tor 的信號(hào)作用［47-48］。因此，m-tor 信號(hào)通路在顆粒細(xì)胞自噬調(diào)節(jié)具有重要作用，但在家禽卵泡閉鎖過(guò)程中的機(jī)制仍有待進(jìn)一步研究。此外，F(xiàn)SH也可參與顆粒細(xì)胞自噬正向因子JNK 信號(hào)通路。Gao 等［49］發(fā)現(xiàn)FSH 通過(guò)抑制核轉(zhuǎn)錄因子（Nuclear factor-kappa B，NF-κB）的水平，促進(jìn)p65 在顆粒細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)的表達(dá)，在p65 的作用下增強(qiáng)JNK 信號(hào)，JNK 通過(guò)對(duì)Bcl2 的磷酸化抑制Bcl2 的作用，并降低“自噬調(diào)節(jié)器”Beclin1 和Bcl2 的結(jié)合能力或者使Beclin1-Bcl2 復(fù)合體分離，使Beclin1 的作用機(jī)制增強(qiáng)，誘導(dǎo)細(xì)胞自噬引起卵泡閉鎖發(fā)生［50-51］。據(jù)報(bào)道，Beclin1 主要表達(dá)于雞膜細(xì)胞，通過(guò)與 LC3β-II 相結(jié)合，下調(diào)p62 和上調(diào)Beclin1 的作用，顯著增加膜細(xì)胞層的自噬活性，并且Beclin1 誘導(dǎo)Caspase3的表達(dá)促進(jìn)顆粒細(xì)胞凋亡［44］。該結(jié)果表明，Beclin1的表達(dá)可能與膜細(xì)胞存在密切的關(guān)系，并可推測(cè)顆粒細(xì)胞的自噬可能取決于膜細(xì)胞的調(diào)控。綜上所述，在細(xì)胞自噬信號(hào)的傳導(dǎo)過(guò)程中伴隨著B(niǎo)cl2 和Caspase3 等凋亡信號(hào)的產(chǎn)生，因此顆粒細(xì)胞凋亡和自噬可能共同調(diào)控卵泡閉鎖。

另一方面，顆粒細(xì)胞自噬還受其它多種因素調(diào)控。Yu 等［52］發(fā)現(xiàn)鵝卵泡內(nèi)環(huán)境的不均衡會(huì)引起自噬正調(diào)控因子miR-7，miR-29，miR-100，miR-181，PRLR，LC3，p53，Beclin1，Atg9 和Atg12的表 達(dá)上調(diào)，負(fù)調(diào)節(jié)因子miR-34b 和miR-34c 的下調(diào)導(dǎo)致顆粒細(xì)胞自噬。Lou 等［53］發(fā)現(xiàn)顆粒細(xì)胞的氧化損傷通過(guò)抑制m-tor 和促進(jìn)p53 信號(hào)通路調(diào)節(jié)顆粒細(xì)胞自噬，但褪黑素可以通過(guò)GFP-MAP1LC3B 和SQSTM1降解Beclin1 靶向抑制JNK/Bcl2/Beclin1 信號(hào)傳導(dǎo)，也可以通過(guò)介導(dǎo)FOXO1 脫乙酰化及其與ATG 蛋白的相互作用以及抑制氧化應(yīng)激的顆粒細(xì)胞中自噬需要SIRT1 信號(hào)傳導(dǎo)的激活，抑制顆粒細(xì)胞因氧化損傷發(fā)生自噬［54-55］。Kang 等［56］通過(guò)3-硝基丙酸（3-nitropropionic acid，3-NPA）刺激鵝顆粒細(xì)胞氧化應(yīng)激反應(yīng)發(fā)現(xiàn)，抑制Bcl2 促進(jìn)Caspase3 的表達(dá)，引起顆粒細(xì)胞自噬和凋亡。引起卵泡顆粒細(xì)胞發(fā)生自噬的因素眾多，但自噬的發(fā)生最終途徑都涉及到m-tor 信號(hào)或JNK 信號(hào)的調(diào)控，并且伴隨著凋亡的發(fā)生。因此，通過(guò)應(yīng)用m-tor 激動(dòng)劑或者JNK 信號(hào)抑制劑可能對(duì)家禽因自噬導(dǎo)致卵泡閉鎖具有較好療效。

4 展望

家禽卵泡閉鎖受凋亡和自噬共同調(diào)控，影響家禽的產(chǎn)蛋性狀，但適量的卵泡閉鎖會(huì)加速優(yōu)勢(shì)卵泡的發(fā)育和排卵，并有研究發(fā)現(xiàn)顆粒細(xì)胞自噬和凋亡過(guò)程中產(chǎn)生的TNFα 可以通過(guò)減少卵母細(xì)胞釋放數(shù)量和誘導(dǎo)未破裂卵泡的顆粒細(xì)胞死亡重塑卵巢組織［57］。因此，家禽繁殖性能與卵泡閉鎖數(shù)量相關(guān)，如何建立一個(gè)閉鎖標(biāo)準(zhǔn)，充分挖掘家禽的產(chǎn)蛋性狀是一個(gè)值得探究的問(wèn)題。此外，在哺乳動(dòng)物中被認(rèn)為顆粒細(xì)胞凋亡開(kāi)關(guān)的Dicer 酶可通過(guò)抑制黃體的形成引起卵泡閉鎖［58］，而家禽不同于哺乳動(dòng)物存在明顯的黃體，僅在家禽排卵時(shí)作為臨時(shí)分泌器官出現(xiàn)，是否該酶在家禽卵泡閉鎖的調(diào)控機(jī)制與哺乳動(dòng)物相同，Dicer 酶也是合成microRNA 和siRNA 的必須酶，microRNA 和siRNA 在顆粒細(xì)胞、膜細(xì)胞和卵母細(xì)胞之間可能有著重要的傳遞信息的功能，在分子輔助生殖技術(shù)中，將microRNA 在各細(xì)胞中的豐度作為評(píng)價(jià)卵泡成熟和重量的一個(gè)重要指標(biāo)［59-60］。隨著第三代測(cè)序技術(shù)的發(fā)展，對(duì)microRNA、siRNA以及circRNA 等小片段RNA 的挖掘更全面，筆者認(rèn)為，在未來(lái)進(jìn)一步完善小片段RNA 在顆粒細(xì)胞的凋亡和自噬的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)對(duì)家禽繁殖性狀具有重要意義。