茜草與入骨丹(東南茜草)質(zhì)量比較研究

黃旭東，楊成梓，2*，王 樂

(1.福建中醫(yī)藥大學(xué) 藥學(xué)院，福建 福州 350100；2.福建省中藥原料藥動(dòng)態(tài)監(jiān)測技術(shù)服務(wù)中心，福建 福州 350100)

茜草藥用歷史悠久，以“茜根”之名首載于《神農(nóng)本草經(jīng)》[1]。2015版中國藥典載其為茜草科植物茜草RubiacordifoliaL.的干燥根及根莖，味苦、性寒，入肝經(jīng)，具有祛瘀血、涼血、止血等功效，常用于治療吐血、衄血、跌撲腫痛、關(guān)節(jié)痹痛等病癥[2]。在閩南一帶，有一民間草藥名為“入骨丹”[3-6]，為茜草科植物東南茜草Rubiaargyi(Levl.et Vaniot) Hara ex L.A.Lauener et D.K.的根及根莖，味苦、性寒，具有涼血止血、活血祛瘀的功效，用于治療臀癰、吐血、衄血、經(jīng)閉瘀阻、跌打腫痛等，全草亦作藥用。目前已從茜草中分離出蒽醌、萘醌、三萜類等多種成分，具有抗氧化、抗炎、抗腫瘤、神經(jīng)保護(hù)等多種生物活性[7]。茜草主要分布于我國陜西、安徽、河南、山東、云南等地[8-10]；東南茜草主要分布于我國華東、中南及四川等南方地域[11]，第四次全國資源普查顯示東南茜草在福建省有廣泛分布。市售茜草中?；煊熊绮輰倨渌参锏母案o，其中也包括東南茜草，使得茜草的質(zhì)量極不穩(wěn)定，對茜草藥材的質(zhì)量造成一定影響。為了更好地保證茜草的藥材質(zhì)量，且進(jìn)一步開發(fā)地方傳統(tǒng)醫(yī)藥資源，本文將參考藥典對茜草的質(zhì)量評價(jià)方法，對所收集到的不同產(chǎn)地的茜草及入骨丹進(jìn)行性狀鑒別、薄層鑒別，并對其中的大葉茜草素及羥基茜草素進(jìn)行含量測定，以此考察其質(zhì)量差異，以期為茜草的質(zhì)量控制提供參考，進(jìn)一步保證臨床安全用藥，同時(shí)也為開發(fā)新的藥用資源提供依據(jù)。

1 試驗(yàn)材料

1.1 藥材

茜草對照藥材(中國食品藥品檢定研究院，批號：121049-201404)；大葉茜草素及羥基茜草素對照品(成都曼思特生物科技有限公司，批號分別為MUST-16031017、 MUST-16082905)；茜草及入骨丹藥材分別收集于全國7個(gè)產(chǎn)地，編號分別為S1：安徽，S2-S3：陜西，S4-S5：云南，S6：河南，S7：河北，S8：廣西；S9：福建，S10(入骨丹)：福建。詳細(xì)信息見表1。

1.2 儀器與試劑

LC-20AT高效液相色譜分析儀(日本島津公司)；BS210S型分析天平(北京賽多利斯天平有限公司)；甲醇(分析純，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；批號20160225)；甲醇和乙腈為色譜純(國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；20160901)；磷酸(天津市福晨化學(xué)試劑廠，批號：20120525)、鹽酸(含36.0%～38.0%HCl，西隴化工股份有限公司；批號：1510311)；三乙胺(天津市恒興化學(xué)試劑制造有限公司，批號：2016年6月10日)。

2 方法與結(jié)果

2.1 茜草與入骨丹的藥材性狀評價(jià)

通過觀察藥材的外觀顏色、質(zhì)地并對其直徑測量，對茜草及入骨丹進(jìn)行質(zhì)量評價(jià)及比較，評價(jià)結(jié)果見表1。從表格中的數(shù)據(jù)可以看出：入骨丹與茜草粗細(xì)及表面顏色差別不大，均質(zhì)脆易折斷，斷面平坦，呈圓柱形，有的略彎曲；不同的是入骨丹表面呈黃棕色并有縱皺紋及橫皺紋，茜草表面呈棕色或暗棕色有縱皺紋及細(xì)根痕，入骨丹斷面呈淺磚紅色，茜草斷面呈黃棕色。

2.2 茜草與入骨丹的薄層定性比較

參照《中國藥典》收載的對茜草進(jìn)行定性鑒別的薄層色譜法，以大葉茜草素及茜草對照藥材為對照，對收集到的樣品進(jìn)行定性鑒別，結(jié)果如圖1。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：在Rf值0.7處，大葉茜草素與除S5外樣品均有一熒光色的亮斑，對照藥材及S1、3、4、5、9在Rf值0.2處有一顏色較淺的淡藍(lán)色斑點(diǎn)。S5、S7薄層鑒定結(jié)果不符合藥典要求。

(6、8：對照藥材；7：大葉茜草素；1～5、9～13分別為S1～S10)

2.3 茜草與入骨丹的含量比較研究

2.3.1 色譜條件 色譜柱為Platisil-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)，以甲醇-乙腈-0.1%磷酸水(40∶50∶10)為流動(dòng)相進(jìn)行等度洗脫，流速為1 mL/min，檢測波長為250 nm，柱溫為30 ℃；理論塔板數(shù)按大葉茜草素、羥基茜草素計(jì)算應(yīng)≥4 000。大葉茜草素、羥基茜草素對照品及茜草、入骨丹樣品HPLC色譜見圖3。

2.3.2 對照品溶液制備 精密稱取大葉茜草素2.04 mg、羥基茜草素2.01 mg，加甲醇制成大葉茜草素濃度為1.020 mg/mL和羥基茜草素濃度為1.005 mg/mL的儲備液，精密移取適量羥基茜草素及大葉茜草素儲備液混勻，得到大葉茜草素與羥基茜草素濃度分別為0.101 mg/mL和0.048 mg/mL的混合對照品溶液。

2.3.3 線性關(guān)系考察 精密移取上述羥基茜草素儲備液2 μL、10 μL、50 μL、100 μL、200 μL至1 mL容量瓶中，定容，搖勻。進(jìn)樣體積10 μL，以對照品濃度C為橫坐標(biāo)，以峰面積A為縱坐標(biāo)，得到大茜草素對照品回歸方程y=3×108X+28 405，r =0.999 7；同法得到大茜草素對照品回歸方程y=3×108X+28 405，r =0.999 7；羥基茜草素的回歸方程y=3×107X+46 677，r =0.999 2。大葉茜草素在3.187 5～204 μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好；羥基茜草素在2.01～201 μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.3.4 供試品溶液制備 將樣品1～10粉粹，按照2015版藥典中茜草含量測定中供試品的制備方法進(jìn)行制備，得到供試品溶液1～10。

2.3.5 樣品測定及分析 分別取藥材粉末，按照“2.3.4”項(xiàng)下制備方法制備，按上述色譜條件進(jìn)樣，測得峰面積，并代入回歸方程計(jì)算大葉茜草素及羥基茜草素含量，結(jié)果見表2。

根據(jù)含量測定結(jié)果可知，所收集的大部分茜草樣品和東南茜草的大葉茜草素及羥基茜草素含量均符合藥典規(guī)定；收集到市售茜草中來自云南、河北、廣西樣品的大葉茜草素含量不符合藥典的要求，而另一批廣西樣品的羥基茜草素含量不符合藥典的要求。

表1 市售茜草與入骨丹的性狀鑒別及含量測定結(jié)果

3 討論

通過對入骨丹及茜草藥材的性狀觀察及描述，發(fā)現(xiàn)二者在形狀、質(zhì)地、斷面氣味特征方面極為相似，僅根的粗細(xì)和顏色有細(xì)微差別，入骨丹較茜草根直徑略粗些、表面顏色較暗而斷面顏色偏紅，但謹(jǐn)以此無法作為區(qū)分二者的依據(jù)。TLC和HPLC比較研究表明入骨丹與茜草的有效成分組成及含量相近，不同產(chǎn)地茜草有效成分含量存在差異，同產(chǎn)地不同批次茜草成分含量也有不同，可見茜草質(zhì)量極不穩(wěn)定。目前，《中華本草》《中藥志》與《中國藥典》僅收載茜草科茜草屬植物茜草R.cordifoliaL.這一種植物作為茜草的正品來源，但通過大多學(xué)者對茜草的考證結(jié)果發(fā)現(xiàn)，目前茜草藥材當(dāng)為茜草科茜草屬植物無疑，但是否僅此一種，存在疑問[10，12-14]。通過茜草與入骨丹進(jìn)行質(zhì)量比較，發(fā)現(xiàn)收集到的入骨丹亦符合茜草藥典項(xiàng)目下的質(zhì)量評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，是否可作為茜草的替用藥源值得進(jìn)一步研究。市售茜草質(zhì)量參差不齊，不同產(chǎn)地及同產(chǎn)地不同批次的藥材質(zhì)量也存在較大差異，故合理制定茜草質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，加強(qiáng)藥材市場的質(zhì)量監(jiān)控，才能更好地保證茜草用藥的安全與療效。