毛菊苣中一個新的黃酮苷化合物

翁 馨，黃敏潔，婁云云，尚 靖，張 健，殷志琦*

（1中國藥科大學(xué)中藥學(xué)院中藥制劑系＆天然藥物活性組分與藥效國家重點實驗室，南京211198；2江蘇省中醫(yī)藥研究院轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)實驗室，南京210028；3中國藥科大學(xué)中藥學(xué)院中藥藥理與中醫(yī)藥學(xué)系，南京211198）

毛菊苣（Cichorium glandulosum Boiss.et Huet）為菊科（Compositae）菊苣屬（Cichorium）一年或二年生草木植物，花與菊苣相似，在中國新疆維吾爾自治區(qū)及周邊國家廣泛分布［1］。毛菊苣以地上部分或根入藥，具有清熱解毒、消腫利尿、消炎、健胃等功效［2］。維吾爾族民間醫(yī)學(xué)常將毛菊苣作為一種利膽利尿劑，用毛菊苣水提取物治療肝炎、膽囊炎等炎癥性疾病，其療效已在臨床得到驗證［3-4］。同時毛菊苣還可以改善食欲、促進消化［3］。由于毛菊苣的功效良好，近年來對毛菊苣的化學(xué)成分研究越來越受到關(guān)注。有研究發(fā)現(xiàn)毛菊苣主要含有香豆素、黃酮和倍半萜內(nèi)酯成分［3］；Dang等［5］從毛菊苣根中獲得新的倍半萜；Wu等［6］從毛菊苣莖中獲得兩種新的倍半萜和三萜糖苷；毛瓊玲［7］從毛菊苣種子中得到麥角甾醇、孕甾烯醇酮、β-谷甾醇等；盧協(xié)勤等［8］從毛菊苣種子中分離得到 β-香樹脂醇、旋覆花素；何茂群等［9］從毛菊苣根乙酸乙酯部位得到了茶堿、黃芩苷甲酯、芒柄花素、毛蕊異黃酮等；潘蘭等［2］從毛菊苣全草的乙醇提取物中分離到豆甾醇-3-O-葡萄糖苷、秦皮甲素、蔗糖?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究發(fā)現(xiàn)毛菊苣的乙酸乙酯和正丁醇提取物有較強的保肝作用［10］，毛菊苣還可顯著降低HepG2細胞內(nèi)甘油三酯和脂滴的含量而具有降血脂作用［11］。此外，毛菊苣還具有良好的降血糖作用［12］，已有菊苣膠囊、火見菌菊粉等藥物上市，具有良好的應(yīng)用前景。為深入探討毛菊苣的化學(xué)成分，本研究從其地上部位的提取物中獲得1個新的黃酮苷，鑒定為槲皮素-3-O-［6″-O-（3-乙氧基-1，3-二氧代丙基）］-β-D-吡喃葡糖苷 （Quercetin-3-O-［6″-O-（3-ethoxy-1，3-dioxopropyl）］-β-D-glucopyranoside）。

1 材 料

1.1 藥 材

毛菊苣地上部分由南京睿鷹潤澤生物醫(yī)藥科技有限公司提供，中國藥科大學(xué)中藥學(xué)院秦民堅教授鑒定為 Cichorium glandulosum Boiss.et Huet，樣本保存于中國藥科大學(xué)中藥制藥系（No.20180928）。

1.2 儀器與試劑

旋光數(shù)據(jù)采用JASCO P-1020型數(shù)字旋光儀測定；紫外光譜采用Shimadzu UV-2501紫外可見分光光譜儀測定；紅外光譜經(jīng)Nicolet Impact 410型紅外光譜儀測定（KBr壓片）；ESI-MS和HR-TOF-MS分別采用Bruker amazon SL離子阱液相色質(zhì)譜聯(lián)用儀和Agilent Q-TOF 6520型質(zhì)譜儀測定；核磁共振光譜經(jīng)Bruker AV 500型核磁共振儀（1H NMR 500 MHz，13C NMR 125 MHz）測定；Alliance制備液相色譜儀（美國LabAlliance公司）和Cosmosil C18半制備色譜柱（江蘇漢邦科技有限公司）用于本研究化合物制備純化。柱色譜硅膠為青島海洋化工廠生產(chǎn)；高效硅膠薄層色譜板Silica gel 60 F254和ODS（C18）均為德國 Merck公司產(chǎn)品；Sephadex LH-20購自美國Pharmacia公司；色譜級甲醇和乙腈均購自上海星可高純?nèi)軇┯邢薰?；其他試劑均為市售分析純?/p>

2 提取與分離

將干燥的毛菊苣地上部分粉碎成粗粉（2 kg），用8倍量的95%乙醇加熱回流提取3次，每次提取2 h。提取液合并后經(jīng)減壓濃縮至無醇味，得浸膏（166 g）。再用石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇依次萃取該浸膏，得各個萃取部位。將乙酸乙酯萃取部位（25.4 g）溶解后加硅膠拌樣，采用硅膠（200～300目）柱色譜，并以氯仿-甲醇（1∶0→0∶1）梯度洗脫，得到8個洗脫組分（Fr.1～8）。Fr.4經(jīng)ODS反相柱色譜，以甲醇-水（5∶95-100∶0）梯度洗脫后；再以氯仿-甲醇（1∶1）為洗脫劑，經(jīng) Sephadex LH-20柱色譜分離；最后經(jīng)半制備HPLC（18%乙腈-水）等度洗脫純化，得到化合物1（6.0 mg，圖1）。

Figure 1 Structures of compound 1 and reference compound 2 from Cichorium glandulosum

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1 黃色粉末（甲醇），［α］20D-14.7°（c 0.1，MeOH），易溶于甲醇，鹽酸-鎂粉反應(yīng)和Molish反應(yīng)均呈陽性，原位薄層酸水解檢出D-葡萄糖，顯示該化合物為黃酮苷類化合物。HR-TOFMS顯示準(zhǔn)分子離子峰 m／z:601.117 1［M＋Na］＋（C26H26NaO15，Calcd.601.116 9），確定其分子式為C26H26O15，相對分子質(zhì)量為578。UV譜顯示其最大吸收波長為204、265、351 nm。IR光譜顯示羥基（3 427 cm-1）、羰基（1 657 cm-1）和苯環(huán)的骨架振動（1 603、1 498、1 458 cm-1）等特征吸收峰。

1H NMR譜顯示 δ7.53（1H，br.s）、7.51（1H，m）和6.82（1H，d，J＝8.0 Hz）為一組 1，3，4-三取代芳環(huán)質(zhì)子的信號，提示B環(huán)可能為3′，4′-取代；δ 6.38（1H，d，J＝2.0 Hz）、6.17（1H，d，J＝2.0 Hz）為A環(huán)質(zhì)子信號，提示A環(huán)為5，7-二取代；δ5.41（1H，d，J＝7.5 Hz）為葡萄糖的端基氫質(zhì)子信號，偶合常數(shù)提示為β構(gòu)型。δ3.17～4.22為糖環(huán)上其他氫信號。13C NMR譜共顯示26個碳信號，其中δ177.2為羰基碳信號，δ121.0、116.1、115.2、98.9、93.6為黃酮苷元 5個次甲基碳信號，δ 165.2、161.2、156.4、156.3、148.7、144.9、133.0、121.5、103.5為黃酮苷元的9個季碳信號，δ101.0為葡萄糖的端基碳信號。δ63.9～76.2為糖環(huán)上其他連氧碳信號。將化合物1的碳氫數(shù)據(jù)與文獻報道的化合物2［13］對照，兩者黃酮母核信號相同，但化合物1較化合物2多出一組乙基信號，提示化合物1為化合物2的丙二酰基被3-乙氧基-1，3-二氧代丙基所替代的衍生物。

在HMBC譜中可觀察到，δH-1″5.41與δC-3133.0有相關(guān)信號，證實葡萄糖glc″連接在母核的3位；δH-10″3.97與 δC-9″166.1、δC-11″13.8有相關(guān)信號，再根據(jù)C-10的位移，說明化合物1含有-COOCH2CH3結(jié)構(gòu)片段；δH-6″a4.22、δH-6″b4.00與 δC-7″166.2有相關(guān)信號，δH-8″3.18與 δC-7″166.2、δC-9″166.1有相關(guān)信號，結(jié)合C-8的位移，說明化合物1含有-COOCH2-片段；綜上說明glc″連接在母核的3位，glc″的6位連有-OCOCH2COOCH2CH3片段（圖2）。

Figure 2 Key HMBC（H→C）correlations of compound 1

綜合上述解析，化合物1的結(jié)構(gòu)鑒定為槲皮素-3-O-［6″-O-（3-乙氧基-1，3-二氧代丙基）］-β-D-吡喃葡糖苷，即 Quercetin-3-O-［6″-O-（3-ethoxy-1，3-dioxopropyl）］-β-D-glucopyranoside，經(jīng) SciFinder檢索為一新化合物。

化合物1的生源途徑如圖3所示，黃酮類化合物前期的合成途徑已經(jīng)比較明確，首先通過苯丙烷、黃酮合成途徑生成查爾酮，分子內(nèi)環(huán)化合成二氫黃酮類化合物。而后黃酮合酶（Flavone synthase）催化其2，3位進行脫氫后形成雙鍵，產(chǎn)生的黃酮類化合物糖苷化后生成槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡糖苷，經(jīng)酯化后進一步合成化合物1［14］。

Figure 3 Putative biogenetic pathways of compound 1

Table1 NMR data of compound 1（500 and 125 MHz，DMSO-d6）

（Continued）