昆蟲病原線蟲對(duì)蠐螬致病力的測(cè)定

康俊英

摘要 選用2種昆蟲病原線蟲的4個(gè)品系[斯氏線蟲Steinernema krussei（0657L，0622L），S.affine（0664YM）;異小桿線蟲Heterorhabditis megidis（0627M）]測(cè)定蠐螬老熟幼蟲的致病力。結(jié)果表明：線蟲的侵染劑量為60條/頭時(shí)，0627M品系對(duì)蠐螬的致死率為34.4%，與0664YM品系差異顯著（P<0.05）;0657L品系對(duì)蠐螬的侵染能力最差，侵染96 h后，致病力僅為5.7%。從總體看，0627M品系對(duì)蠐螬的致死率高于0664YM品系，而且致死作用持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)。說明0627M品系對(duì)蠐螬的致死作用優(yōu)于其他三個(gè)品系。

關(guān)鍵詞 昆蟲病原線蟲;蠐螬老熟幼蟲;致病力;生物防治

中圖分類號(hào)：Q959.17 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：2095–3305（2020）08–0–02

Abstract Four strains of two entomopathogenic nematodes [Steinernema krussei （0657L， 0622L）， S.affine （0664YM） and Heterorhabditis megidis （0627M）] were used to determine the pathogenicity of mature grubs. The results showed that the fatality rate of 0627M strain against white grub was 34.4% when the nematode infection dose was 60 strains/head， which was significantly different from that of 0664YM strain （P<0.05）. The strain 0657L had the worst infection ability against white grubs， and the pathogenicity was only 5.7% after 96 h of infection. In general， the fatality rate of 0627M strain to white grubs was higher than that of 0664YM strain， and the lethal effect lasted for a long time. The results indicated that 0627M strain had better lethal effect on white grubs than the other three strains.

Key words Entomopathogenic nematodes; Old grub larvae; Pathogenicity; Biological control

DOI：10.19383/j.cnki.nyzhyj.2020.08.007

研究了甘肅省4個(gè)優(yōu)良品系線蟲對(duì)蠐螬的致病力，篩選出對(duì)蠐螬侵染效果佳、致病力較高的線蟲品系，以期為后期田間實(shí)際應(yīng)用提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 供試蟲

蠐螬老熟幼蟲，5月中下旬在縣內(nèi)直接挖取，用于室內(nèi)防效生測(cè)。

線蟲擴(kuò)繁寄主昆蟲：大蠟螟幼蟲由農(nóng)技中心植保實(shí)驗(yàn)室提供。

供試線蟲：斯氏線蟲（0657 L，0622 L），（0664 YM）;異小桿線蟲（0627 M）品系由農(nóng)技中心植保實(shí)驗(yàn)室提供。

1.2 試驗(yàn)線蟲的制備與計(jì)量

用大蠟螟活體繁殖線蟲，得到線蟲稀釋液，用移液槍取1 ul滴于載玻片上，鏡檢解剖鏡視野內(nèi)線蟲數(shù)，計(jì)算線蟲數(shù)量。

1.3 試驗(yàn)所用儀器設(shè)備

智能冰箱、解剖鏡、微量移液槍、電熱恒溫培養(yǎng)箱、直徑90 mm培養(yǎng)皿、濾紙、小噴壺等。

1.4 數(shù)據(jù)分析

所有數(shù)據(jù)均采用SPSS軟件分析。

1.5 昆蟲病原線蟲不同品系對(duì)蠐螬致病力的測(cè)定

1.5.1 生測(cè)適宜線蟲數(shù)量的篩選 為了濾紙保持濕潤(rùn)，在培養(yǎng)皿中墊兩層濾紙，加入適量的無菌水。將蠐螬老熟幼蟲放在培養(yǎng)皿中，每皿1頭。4個(gè)品系線蟲為4個(gè)不同的處理。每個(gè)處理設(shè)3組重復(fù)，每組10頭幼蟲，以不加線蟲的無菌水為對(duì)照。線蟲數(shù)量分為5個(gè)梯度，即5條/頭、10條/頭、20條/頭、40條/頭、60條/頭，將不同品系線蟲用移液槍滴加到蠐螬體上，放在25℃、相對(duì)濕度為80%的人工氣候箱中培養(yǎng)，經(jīng)常用小噴壺噴水使濾紙保持濕潤(rùn)，每隔24 h檢查、記錄線蟲的寄生情況、害蟲的發(fā)病及死亡時(shí)間，并觀察死蟲形態(tài)、色澤或其他變化特征，統(tǒng)計(jì)害蟲死亡率等[1-4]。

1.5.2 不同線蟲品系對(duì)蠐螬的致病力 在溫度達(dá)到25℃、相對(duì)濕度在80%的人工氣候箱內(nèi)進(jìn)行。培養(yǎng)皿中墊兩層濾紙，加入適量的無菌水，使濾紙保持濕潤(rùn)。將蠐螬老熟幼蟲放培養(yǎng)皿中，每皿1頭，按生測(cè)實(shí)驗(yàn)篩選的數(shù)量，將4個(gè)不同品系的線蟲用微量移液槍滴加到蠐螬體上。4個(gè)品系線蟲為4個(gè)不同的處理，同時(shí)以滴加等量無菌水作為對(duì)照，每組10頭幼蟲，重復(fù)3次。每隔24 h檢查蠐螬的死亡情況，并做記錄，比較各個(gè)品系線蟲對(duì)蠐螬的侵染效果。

2 結(jié)果與分析

2.1 線蟲的侵染過程及蠐螬的死亡癥狀

接種線蟲后，蟲體表面有線蟲不停地蠕動(dòng)，特別是口腔、尾部、節(jié)間膜及身體凹陷處聚集較多，而且活動(dòng)劇烈。過段時(shí)間鏡檢，這些部位的線蟲數(shù)量明顯減少[5-6]。線蟲從寄主的口腔、節(jié)間膜、肛門等部位以身體前段垂直于寄主體表、尾部不停左右擺動(dòng)慢慢進(jìn)入蟲體。對(duì)死亡的蠐螬老熟幼蟲進(jìn)行解剖后，發(fā)現(xiàn)有大量活躍的小線蟲在蟲體內(nèi)（圖1）。

蠐螬被侵染后早期活動(dòng)較活躍，侵染中期活動(dòng)緩慢，后期爬行無力，蟲體慢慢變軟，48 h后相繼死亡。體色發(fā)生變化，由乳白色變?yōu)辄S褐色，最后呈現(xiàn)黑褐色（圖2），蟲體失水后萎縮干癟。死亡3 d后，通過解剖鏡觀察，發(fā)現(xiàn)蟲體內(nèi)線蟲清晰可見，有大量的線蟲從寄主的口腔、氣門、肛門、節(jié)間膜等部位爬出。

2.2 生測(cè)侵染線蟲的數(shù)量

線蟲對(duì)蠐螬室內(nèi)生測(cè)適宜濃度的篩選，主要采用一對(duì)一的方法，即用1條線蟲侵染1頭昆蟲，這能最真實(shí)地反映昆蟲病原線蟲對(duì)供試害蟲的致病力，但昆蟲病原線蟲進(jìn)入寄主的血腔后，會(huì)遇到昆蟲防御系統(tǒng)的抵抗，因此，1條線蟲對(duì)供試害蟲幾乎不產(chǎn)生致病力，故需測(cè)定最適濃度，使蠐螬的死亡率達(dá)到最高，同時(shí)昆蟲病原線蟲劑量達(dá)到最小值。

結(jié)果表明：劑量為1頭侵染60條時(shí)，4個(gè)不同品系線蟲侵染供試害蟲的死亡率分別為50%、10%、20%、30%，與另外4個(gè)濃度對(duì)照差異顯著。當(dāng)侵染劑量為60條/頭時(shí)，4個(gè)品系線蟲對(duì)蠐螬老熟幼蟲均表現(xiàn)出一定的致病力，因此60條/頭為線蟲室內(nèi)生測(cè)最佳劑量。

2.3 昆蟲病原線蟲對(duì)蠐螬致病力的測(cè)定

試驗(yàn)結(jié)果表明：侵染劑量為60條/頭時(shí)，4個(gè)品系線蟲對(duì)蠐螬均有不同程度的侵染力，但效果差異顯著，致死速度也不同。0664YM品系則在96 h后不再死亡;而0627M品系致死時(shí)間一直持續(xù)到120 h，比前者致死時(shí)間延長(zhǎng)24 h。由死亡高峰看，2個(gè)品系線蟲基本相同，0627M、0664YM品系在侵染48 h后蠐螬就出現(xiàn)死亡，0627M品系對(duì)蠐螬的致死率為34.4%，與0664YM品系差異顯著（P<0.05）。0657L品系對(duì)蠐螬的侵染能力最差，侵染96 h后，致病力僅為5.7%。從總體看，0627M品系對(duì)蠐螬的致死率高于0664YM品系，而且致死作用持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)。說明0627M品系對(duì)蠐螬的致死作用優(yōu)于其他3個(gè)品系[7-8]。

3 小結(jié)

研究表明，4種不同品系線蟲對(duì)蠐螬均有不同程度的侵染力，但效果差異顯著，致死速度也不同。其中，異小桿線蟲0627M和斯氏線蟲0664YM致病力較高，感染48 h后蠐螬死亡率分別為34.4%和15.6%，且平均死亡率顯著高于其他品系。說明0627M和0664YM是蠐螬的敏感品系。而0664YM品系線蟲在96 h后不再死亡;品系線蟲0627M死亡一直持續(xù)到120 h，即前者致死時(shí)間延長(zhǎng)了24 h。以死亡高峰看，2種線蟲品系基本相同，0627M、0664YM在侵染48 h后蠐螬老熟幼蟲就出現(xiàn)死亡，0627M對(duì)蠐螬的致死率達(dá)到34.4%，與0664YM差異達(dá)顯著水平（P<0.05）。從總體看，0627M品系對(duì)線蟲致死率高于0664 YM，而且死亡持續(xù)期長(zhǎng)，在蠐螬體內(nèi)發(fā)育快，致病力強(qiáng)。

研究表明，4種不同品系昆蟲病原線蟲對(duì)蠐螬致病力有所不同，可能是由于不同線蟲的生物學(xué)特性不同，其找尋寄主的能力、侵入速度存在差異，同一種寄主對(duì)不同線蟲的敏感性也不同。病原線蟲不同種或品系對(duì)同一種害蟲的侵染力、致病力存在很大差異，同一種或同一品系病原線蟲對(duì)不同寄主的侵染力、致病力存在顯著差異，所以篩選出致病力強(qiáng)的病原線蟲是能否用病原線蟲有效控制害蟲的關(guān)鍵。本試驗(yàn)在培養(yǎng)皿中進(jìn)行，線蟲和蠐螬很接近，所以線蟲搜尋寄主的能力對(duì)線蟲致病力影響可能不大。

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責(zé)任編輯：黃艷飛