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    昆蟲病原線蟲對(duì)蠐螬致病力的測(cè)定

    2020-05-11 05:43康俊英
    農(nóng)業(yè)災(zāi)害研究 2020年8期
    關(guān)鍵詞:生物防治

    康俊英

    摘要 選用2種昆蟲病原線蟲的4個(gè)品系[斯氏線蟲Steinernema krussei(0657L,0622L),S.affine(0664YM);異小桿線蟲Heterorhabditis megidis(0627M)]測(cè)定蠐螬老熟幼蟲的致病力。結(jié)果表明:線蟲的侵染劑量為60條/頭時(shí),0627M品系對(duì)蠐螬的致死率為34.4%,與0664YM品系差異顯著(P<0.05);0657L品系對(duì)蠐螬的侵染能力最差,侵染96 h后,致病力僅為5.7%。從總體看,0627M品系對(duì)蠐螬的致死率高于0664YM品系,而且致死作用持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)。說明0627M品系對(duì)蠐螬的致死作用優(yōu)于其他三個(gè)品系。

    關(guān)鍵詞 昆蟲病原線蟲;蠐螬老熟幼蟲;致病力;生物防治

    中圖分類號(hào):Q959.17 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A 文章編號(hào):2095–3305(2020)08–0–02

    Abstract Four strains of two entomopathogenic nematodes [Steinernema krussei (0657L, 0622L), S.affine (0664YM) and Heterorhabditis megidis (0627M)] were used to determine the pathogenicity of mature grubs. The results showed that the fatality rate of 0627M strain against white grub was 34.4% when the nematode infection dose was 60 strains/head, which was significantly different from that of 0664YM strain (P<0.05). The strain 0657L had the worst infection ability against white grubs, and the pathogenicity was only 5.7% after 96 h of infection. In general, the fatality rate of 0627M strain to white grubs was higher than that of 0664YM strain, and the lethal effect lasted for a long time. The results indicated that 0627M strain had better lethal effect on white grubs than the other three strains.

    Key words Entomopathogenic nematodes; Old grub larvae; Pathogenicity; Biological control

    DOI:10.19383/j.cnki.nyzhyj.2020.08.007

    研究了甘肅省4個(gè)優(yōu)良品系線蟲對(duì)蠐螬的致病力,篩選出對(duì)蠐螬侵染效果佳、致病力較高的線蟲品系,以期為后期田間實(shí)際應(yīng)用提供依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 供試蟲

    蠐螬老熟幼蟲,5月中下旬在縣內(nèi)直接挖取,用于室內(nèi)防效生測(cè)。

    線蟲擴(kuò)繁寄主昆蟲:大蠟螟幼蟲由農(nóng)技中心植保實(shí)驗(yàn)室提供。

    供試線蟲:斯氏線蟲(0657 L,0622 L),(0664 YM);異小桿線蟲(0627 M)品系由農(nóng)技中心植保實(shí)驗(yàn)室提供。

    1.2 試驗(yàn)線蟲的制備與計(jì)量

    用大蠟螟活體繁殖線蟲,得到線蟲稀釋液,用移液槍取1 ul滴于載玻片上,鏡檢解剖鏡視野內(nèi)線蟲數(shù),計(jì)算線蟲數(shù)量。

    1.3 試驗(yàn)所用儀器設(shè)備

    智能冰箱、解剖鏡、微量移液槍、電熱恒溫培養(yǎng)箱、直徑90 mm培養(yǎng)皿、濾紙、小噴壺等。

    1.4 數(shù)據(jù)分析

    所有數(shù)據(jù)均采用SPSS軟件分析。

    1.5 昆蟲病原線蟲不同品系對(duì)蠐螬致病力的測(cè)定

    1.5.1 生測(cè)適宜線蟲數(shù)量的篩選 為了濾紙保持濕潤(rùn),在培養(yǎng)皿中墊兩層濾紙,加入適量的無菌水。將蠐螬老熟幼蟲放在培養(yǎng)皿中,每皿1頭。4個(gè)品系線蟲為4個(gè)不同的處理。每個(gè)處理設(shè)3組重復(fù),每組10頭幼蟲,以不加線蟲的無菌水為對(duì)照。線蟲數(shù)量分為5個(gè)梯度,即5條/頭、10條/頭、20條/頭、40條/頭、60條/頭,將不同品系線蟲用移液槍滴加到蠐螬體上,放在25℃、相對(duì)濕度為80%的人工氣候箱中培養(yǎng),經(jīng)常用小噴壺噴水使濾紙保持濕潤(rùn),每隔24 h檢查、記錄線蟲的寄生情況、害蟲的發(fā)病及死亡時(shí)間,并觀察死蟲形態(tài)、色澤或其他變化特征,統(tǒng)計(jì)害蟲死亡率等[1-4]。

    1.5.2 不同線蟲品系對(duì)蠐螬的致病力 在溫度達(dá)到25℃、相對(duì)濕度在80%的人工氣候箱內(nèi)進(jìn)行。培養(yǎng)皿中墊兩層濾紙,加入適量的無菌水,使濾紙保持濕潤(rùn)。將蠐螬老熟幼蟲放培養(yǎng)皿中,每皿1頭,按生測(cè)實(shí)驗(yàn)篩選的數(shù)量,將4個(gè)不同品系的線蟲用微量移液槍滴加到蠐螬體上。4個(gè)品系線蟲為4個(gè)不同的處理,同時(shí)以滴加等量無菌水作為對(duì)照,每組10頭幼蟲,重復(fù)3次。每隔24 h檢查蠐螬的死亡情況,并做記錄,比較各個(gè)品系線蟲對(duì)蠐螬的侵染效果。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 線蟲的侵染過程及蠐螬的死亡癥狀

    接種線蟲后,蟲體表面有線蟲不停地蠕動(dòng),特別是口腔、尾部、節(jié)間膜及身體凹陷處聚集較多,而且活動(dòng)劇烈。過段時(shí)間鏡檢,這些部位的線蟲數(shù)量明顯減少[5-6]。線蟲從寄主的口腔、節(jié)間膜、肛門等部位以身體前段垂直于寄主體表、尾部不停左右擺動(dòng)慢慢進(jìn)入蟲體。對(duì)死亡的蠐螬老熟幼蟲進(jìn)行解剖后,發(fā)現(xiàn)有大量活躍的小線蟲在蟲體內(nèi)(圖1)。

    蠐螬被侵染后早期活動(dòng)較活躍,侵染中期活動(dòng)緩慢,后期爬行無力,蟲體慢慢變軟,48 h后相繼死亡。體色發(fā)生變化,由乳白色變?yōu)辄S褐色,最后呈現(xiàn)黑褐色(圖2),蟲體失水后萎縮干癟。死亡3 d后,通過解剖鏡觀察,發(fā)現(xiàn)蟲體內(nèi)線蟲清晰可見,有大量的線蟲從寄主的口腔、氣門、肛門、節(jié)間膜等部位爬出。

    2.2 生測(cè)侵染線蟲的數(shù)量

    線蟲對(duì)蠐螬室內(nèi)生測(cè)適宜濃度的篩選,主要采用一對(duì)一的方法,即用1條線蟲侵染1頭昆蟲,這能最真實(shí)地反映昆蟲病原線蟲對(duì)供試害蟲的致病力,但昆蟲病原線蟲進(jìn)入寄主的血腔后,會(huì)遇到昆蟲防御系統(tǒng)的抵抗,因此,1條線蟲對(duì)供試害蟲幾乎不產(chǎn)生致病力,故需測(cè)定最適濃度,使蠐螬的死亡率達(dá)到最高,同時(shí)昆蟲病原線蟲劑量達(dá)到最小值。

    結(jié)果表明:劑量為1頭侵染60條時(shí),4個(gè)不同品系線蟲侵染供試害蟲的死亡率分別為50%、10%、20%、30%,與另外4個(gè)濃度對(duì)照差異顯著。當(dāng)侵染劑量為60條/頭時(shí),4個(gè)品系線蟲對(duì)蠐螬老熟幼蟲均表現(xiàn)出一定的致病力,因此60條/頭為線蟲室內(nèi)生測(cè)最佳劑量。

    2.3 昆蟲病原線蟲對(duì)蠐螬致病力的測(cè)定

    試驗(yàn)結(jié)果表明:侵染劑量為60條/頭時(shí),4個(gè)品系線蟲對(duì)蠐螬均有不同程度的侵染力,但效果差異顯著,致死速度也不同。0664YM品系則在96 h后不再死亡;而0627M品系致死時(shí)間一直持續(xù)到120 h,比前者致死時(shí)間延長(zhǎng)24 h。由死亡高峰看,2個(gè)品系線蟲基本相同,0627M、0664YM品系在侵染48 h后蠐螬就出現(xiàn)死亡,0627M品系對(duì)蠐螬的致死率為34.4%,與0664YM品系差異顯著(P<0.05)。0657L品系對(duì)蠐螬的侵染能力最差,侵染96 h后,致病力僅為5.7%。從總體看,0627M品系對(duì)蠐螬的致死率高于0664YM品系,而且致死作用持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)。說明0627M品系對(duì)蠐螬的致死作用優(yōu)于其他3個(gè)品系[7-8]。

    3 小結(jié)

    研究表明,4種不同品系線蟲對(duì)蠐螬均有不同程度的侵染力,但效果差異顯著,致死速度也不同。其中,異小桿線蟲0627M和斯氏線蟲0664YM致病力較高,感染48 h后蠐螬死亡率分別為34.4%和15.6%,且平均死亡率顯著高于其他品系。說明0627M和0664YM是蠐螬的敏感品系。而0664YM品系線蟲在96 h后不再死亡;品系線蟲0627M死亡一直持續(xù)到120 h,即前者致死時(shí)間延長(zhǎng)了24 h。以死亡高峰看,2種線蟲品系基本相同,0627M、0664YM在侵染48 h后蠐螬老熟幼蟲就出現(xiàn)死亡,0627M對(duì)蠐螬的致死率達(dá)到34.4%,與0664YM差異達(dá)顯著水平(P<0.05)。從總體看,0627M品系對(duì)線蟲致死率高于0664 YM,而且死亡持續(xù)期長(zhǎng),在蠐螬體內(nèi)發(fā)育快,致病力強(qiáng)。

    研究表明,4種不同品系昆蟲病原線蟲對(duì)蠐螬致病力有所不同,可能是由于不同線蟲的生物學(xué)特性不同,其找尋寄主的能力、侵入速度存在差異,同一種寄主對(duì)不同線蟲的敏感性也不同。病原線蟲不同種或品系對(duì)同一種害蟲的侵染力、致病力存在很大差異,同一種或同一品系病原線蟲對(duì)不同寄主的侵染力、致病力存在顯著差異,所以篩選出致病力強(qiáng)的病原線蟲是能否用病原線蟲有效控制害蟲的關(guān)鍵。本試驗(yàn)在培養(yǎng)皿中進(jìn)行,線蟲和蠐螬很接近,所以線蟲搜尋寄主的能力對(duì)線蟲致病力影響可能不大。

    參考文獻(xiàn)

    [1] 李俊秀,孫春梅,康宇靜,等.昆蟲病原線蟲對(duì)花生田蠐螬的防治效果[J].農(nóng)藥,2007(1):62–63.

    [2] 謝欽銘,張選輝.昆蟲病原線蟲在害蟲防治中應(yīng)用的研究進(jìn)展[J].江西科學(xué),2012,20(4):227–229.

    [3] 高志華,楊小龍,劉敬澤,等.昆蟲病原線蟲斯氏線蟲和異小桿線蟲對(duì)長(zhǎng)角血蜱雌蜱的致病力[J].昆蟲學(xué)報(bào),2004,47(1):20–24.

    [4] 賈春生.昆蟲病原線蟲及其在害蟲防治中的應(yīng)用[J].北華大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版),2001,2(5):424–426.

    [5] 李曉巍,梅樹林,武鴻燕,等.昆蟲病原線蟲防治甜菜地蠐螬的初步研究[J].植物保護(hù),1995,21(4):14–16.

    [6] 錢秀娟,劉長(zhǎng)仲,阮艷娥.昆蟲病原線蟲對(duì)甘肅省草地蠐螬的致病力研究[J].草地學(xué)報(bào),2015(2):196–203.

    [7] 劉樹森.昆蟲病原線蟲的篩選鑒定及其對(duì)蠐螬的致病性研究[D].北京:中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院,2009.

    [8] 李而濤,李克斌,張帥,等.有效防治蠐螬的昆蟲病原線蟲鑒定及其生物學(xué)特性[J].植物保護(hù)學(xué)報(bào),2020(5):162–175.

    責(zé)任編輯:黃艷飛

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