• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    內(nèi)生木霉P3.9菌株在枇杷根際土壤中的定殖能力測(cè)定

    2020-05-11 12:30:11魯海菊謝欣悅陶宏征沈云玫王棟
    江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué) 2020年5期
    關(guān)鍵詞:根際土壤生防菌枇杷

    魯海菊 謝欣悅 陶宏征 沈云玫 王棟

    摘要: 采用土壤稀釋分離法與平板計(jì)數(shù)法測(cè)定內(nèi)生木霉P3.9菌株在枇杷根際土壤中的種群密度,跟蹤測(cè)試90 d內(nèi)其在枇杷根際土壤中的定殖動(dòng)態(tài),結(jié)果表明,P3.9菌株在枇杷根際土壤中的定殖過程大致可劃分為3個(gè)階段,前 25 d 內(nèi),菌株相對(duì)含量以10 d為1個(gè)周期呈增減增減變化趨勢(shì),且于10 d時(shí)達(dá)到最大值,為9.52×105 CFU/g,該時(shí)期木霉P3.9菌株在根際土壤中快速適應(yīng)并定殖存活;25~65 d期間,P3.9菌株相對(duì)含量的變化周期延長(zhǎng)至20 d,也呈增減增減變化趨勢(shì),且波動(dòng)幅度較5~25 d期間小,該時(shí)期木霉能夠相對(duì)穩(wěn)定地定殖存活于根際土壤中;65~90 d期間,P3.9 菌株相對(duì)含量在65~75 d期間出現(xiàn)小幅度增加后呈近直線狀下降態(tài)勢(shì);5~75 d期間,P3.9菌株相對(duì)含量維持在105 CFU/g水平上,且75 d時(shí)較接種量只下降1個(gè)數(shù)量級(jí),說明木霉P3.9菌株在枇杷根際土壤中的持效期可達(dá)75 d。

    關(guān)鍵詞: 生防菌;內(nèi)生木霉;定殖能力;根際土壤;枇杷;種群密度法;持效期

    中圖分類號(hào): S436.67+9;S182? 文獻(xiàn)標(biāo)志碼: A

    文章編號(hào):1002-1302(2020)05-0263-05

    近代以來,隨著化學(xué)農(nóng)藥的廣泛使用,化學(xué)農(nóng)藥對(duì)生態(tài)環(huán)境、食品安全、人體健康等方面的負(fù)面影響越發(fā)引起人們的重視,而有關(guān)生防菌的研發(fā)與應(yīng)用也逐漸成為關(guān)注的熱點(diǎn)。目前,在所有生防菌制劑中,木霉屬(Trichoderma)真菌制劑產(chǎn)品約占60%[1]。木霉屬真菌在自然界中分布廣泛,是土壤微生物群落結(jié)構(gòu)的重要組成部分,其菌絲生長(zhǎng)與孢子萌發(fā)對(duì)溫度、濕度、pH值等適應(yīng)范圍廣,且腐生能力強(qiáng),生長(zhǎng)繁殖速度快,可迅速利用營(yíng)養(yǎng)、占據(jù)空間[2-3],能防治多種植物的土傳病害。自1932年Weindling發(fā)現(xiàn)木霉以來[4],人們對(duì)其開展了大量研究,并分離得到多種木霉,而在眾多種類中,綠色木霉、哈茨木霉對(duì)植物病害表現(xiàn)出較好的防治效果[5]。

    木霉菌的成功定殖是其發(fā)揮防治作用的基本前提,且防治效果也部分取決于其存活定殖能力[6]。有關(guān)木霉在土壤中定殖能力的研究已有相關(guān)報(bào)道,杜嬋娟等結(jié)合時(shí)間因子,探究了木霉在土壤空間的定殖規(guī)律[7];肖榮鳳等跟蹤分析了對(duì)茄科尖孢鐮刀菌有拮抗作用的哈茨木霉在土壤中的存活與定殖能力[8];古麗君等明確了施用于草坪土壤的木霉在較短時(shí)期內(nèi)的定殖特性[9]。

    木霉P3.9菌株對(duì)枇杷根腐病菌具有極強(qiáng)的抑菌及重寄生作用,抗菌譜廣[10],且固體發(fā)酵條件簡(jiǎn)單[11],對(duì)部分化學(xué)農(nóng)藥具有耐藥性[12],能定殖于枇杷各個(gè)器官及其根際土壤[13]。為進(jìn)一步明確木霉P3.9菌株在枇杷根際土壤中的施用持效期及最佳施用時(shí)期,本研究采用土壤稀釋分離法與平板計(jì)數(shù)法,跟蹤分析該菌株隨時(shí)間延長(zhǎng)在土壤中的定殖動(dòng)態(tài),以期為該菌株的進(jìn)一步開發(fā)利用提供理論依據(jù)和技術(shù)支持。

    1 材料與方法

    1.1 材料

    1.1.1 供試材料 內(nèi)生木霉(Trichoderma atroviride)P3.9菌株,分離自枇杷主干韌皮部,保存于紅河學(xué)院生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院植物病理學(xué)標(biāo)本室。1年生枇杷嫁接苗,種植于直徑為23 cm、深為18 cm的營(yíng)養(yǎng)袋中。

    1.1.2 供試培養(yǎng)基 PDA培養(yǎng)基:馬鈴薯200 g、瓊脂粉20 g、葡萄糖16 g。木霉選擇性培養(yǎng)基:MgSO4·7H2O 0.2 g,KCl 0.15 g,K2HPO4 0.9 g,(NH4)2SO4 1.0 g,葡萄糖3.0 g,玫瑰紅[四氯四碘螢素鈉鹽(C20H2O5Cl4I4Na2)]0.033 g,瓊脂粉20 g,75%五氯硝基苯可濕性粉劑0.2 g,蒸餾水 1 000 mL,所用試劑為分析純。配制好的培養(yǎng)基在 121 ℃ 下高壓滅菌 30 min,備用。

    1.2 試驗(yàn)方法

    1.2.1 木霉菌懸液的準(zhǔn)備與根際土壤接種 將試管斜面保存的P3.9菌株移入PDA平板上活化,待菌落長(zhǎng)滿培養(yǎng)皿時(shí),用打孔器取直徑為5 mm的菌餅,接入新的PDA平板中央進(jìn)行培養(yǎng),共培養(yǎng)5皿,28 ℃下培養(yǎng)5~7 d;待菌落長(zhǎng)滿全皿,收集所有培養(yǎng)物至粉碎機(jī)中,加入適量無菌水,充分打勻,制成菌懸液,使孢子濃度為1×106 CFU/mL,備用;將孢子懸浮液澆灌于枇杷嫁接苗根際,500 mL/株,以澆灌等量清水作為對(duì)照。重復(fù)10次,常規(guī)肥水管理。

    1.2.2 木霉定殖能力的測(cè)定 自澆灌木霉孢子懸浮液起90 d內(nèi),每隔5 d用高為0.5 m、鉆頭直徑為38 mm的不銹鋼環(huán)刀土鉆在枇杷嫁接苗根際取土樣1次,采集深度為5~15 cm,每處理隨機(jī)取5株,每株采用5點(diǎn)取樣法采集土樣,并采用四分法充分混勻土樣,備用;稱取1 g土樣置于裝有99 mL無菌水的三角瓶中,在轉(zhuǎn)速為200 r/min的振蕩儀器上振蕩20 min,配制成10-2土壤稀釋懸浮液;靜置2 min后,用無菌微量移液器吸取懸浮液1 mL,加入到 9 mL 無菌水中混勻,即為10-3土壤稀釋懸浮液,如此重復(fù),依次配制成10-4、10-5土壤稀釋懸浮液;取10-5土壤稀釋懸浮液50 μL,采用傾注法加入木霉選擇性平板培養(yǎng)基中,在28 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 3~5 d,統(tǒng)計(jì)平板上直徑≥10 mm、近圓形、扁平、呈放射狀的無色透明或淺綠色單菌落數(shù)量,重復(fù)5次;計(jì)算土樣中木霉種群密度,計(jì)算公式為

    種群密度=每皿菌落平均值×稀釋倍數(shù)×20×水分系數(shù);

    環(huán)比增長(zhǎng)率=(本期的木霉種群密度-上一期木霉種群密度)/上一期木霉種群密度×100%;

    同比增長(zhǎng)率=(本階段木霉種群密度變化值-上一相同變化階段木霉種群密度變化值)/上一相同變化階段木霉種群密度變化值×100%。

    其中,環(huán)比增長(zhǎng)率、同比增長(zhǎng)率為正值時(shí)表示增長(zhǎng),為負(fù)值時(shí)表示下降。

    1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)

    采用Excel 2010軟件對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行匯總計(jì)算、作圖,采用SPSS 19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,采用Duncans新復(fù)極差法進(jìn)行差異顯著性檢驗(yàn)。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 木霉P3.9菌株施入枇杷根際土壤5~90 d期間的定殖動(dòng)態(tài)

    由圖1可見,P3.9菌株在枇杷根際土壤中的定殖過程大致可劃分為3個(gè)階段,第1階段為前25 d內(nèi),菌株相對(duì)含量以10 d為1周期呈“增減增減”變化趨勢(shì),且于10 d時(shí)達(dá)到最大值,為9.52×105 CFU/g,該時(shí)期木霉P3.9菌株在根際土壤中快速適應(yīng)并定殖存活;第2階段為25~65 d期間,P3.9菌株相對(duì)含量的變化周期延長(zhǎng)至20 d,也呈“增減增減”變化趨勢(shì),且波動(dòng)幅度較5~25 d期間小,該時(shí)期木霉能夠相對(duì)穩(wěn)定地定殖存活于根際土壤中;第3階段為65~90 d期間,P3.9菌株相對(duì)含量在施入土壤65~75 d期間出現(xiàn)小幅度增加后呈近直線狀下降態(tài)勢(shì),75 d時(shí)木霉相對(duì)含量為1.11×105 CFU/g,較接入的初始木霉數(shù)量下降1個(gè)數(shù)量級(jí),而至90 d時(shí)木霉相對(duì)數(shù)量達(dá)到最低值,為4×103 CFU/g。

    2.2 木霉P3.9菌株施入枇杷根際土壤3個(gè)階段的定殖動(dòng)態(tài)分析

    2.2.1 第1階段 由表1、圖2、圖3可見,在5~25 d 期間,枇杷根際土壤施入木霉P3.9菌株的處理,木霉相對(duì)含量(孢子數(shù)量)以10 d為1周期呈“增減增減”波動(dòng)變化,且總體減少趨勢(shì),木霉施入土壤后前期相對(duì)含量迅速上升,10 d時(shí)達(dá)到最大值,此時(shí)木霉相對(duì)含量為9.52×105 CFU/g,較接種5 d時(shí)環(huán)比增長(zhǎng)575.18%,隨后出現(xiàn)下降趨勢(shì),接種處理 15 d 時(shí)木霉相對(duì)含量較10 d時(shí)環(huán)比下降70.27%,之后又上升,接種處理20 d時(shí)菌體相對(duì)含量較15 d時(shí)環(huán)比上升116.96%,之后又下降,接種25 d時(shí)較接種20 d時(shí)環(huán)比下降76.71%;接種處理5~25 d內(nèi),每隔5 d測(cè)得的木霉相對(duì)含量相互間差異極顯著(P<0.01),且10~25 d測(cè)得的木霉相對(duì)含量均高于最初檢測(cè)值,表明該測(cè)試菌株施入土壤后前期定殖能力較強(qiáng);木霉在枇杷根際土壤中的定殖共歷經(jīng)2個(gè)周期(5~15 d、15~25 d),第2個(gè)周期的波動(dòng)幅度低于第1個(gè)周期, 第2個(gè)周期增長(zhǎng)階段較第1個(gè)周期增長(zhǎng)階段同比下降59.19%。未接種的對(duì)照組沒有觀察到木霉菌落的出現(xiàn)。

    2.2.2 第2階段 由表2、圖4、圖5可見,在25~65 d期間,每隔5 d測(cè)得的土壤中木霉相對(duì)含量相互間存在極顯著差異(P<0.01);未接種木霉的對(duì)照組分別于30、50、60 d觀察到極少量木霉,其他調(diào)查時(shí)間未觀察到木霉菌落的出現(xiàn)。該階段,木霉相對(duì)含量變化同樣歷經(jīng)2個(gè)周期(25~45 d、45~65 d),時(shí)間間隔延長(zhǎng)為20 d,木霉相對(duì)含量分別于25~35 d、45~55 d呈上升趨勢(shì),35~45 d、55~65 d呈下降態(tài)勢(shì),在第1個(gè)周期內(nèi),接種處理 35 d 時(shí)的菌體相對(duì)含量較25 d時(shí)環(huán)比上升 93.01%,45 d時(shí)的菌體相對(duì)含量較35 d時(shí)環(huán)比下降67.03%;在第2個(gè)周期內(nèi),接種處理55 d時(shí)的菌體相對(duì)含量較 45 d 時(shí)環(huán)比上升205.49%,65 d時(shí)的菌體相對(duì)含量較55 d時(shí)環(huán)比下降67.27%;第2個(gè)周期增長(zhǎng)階段較第1個(gè)周期增長(zhǎng)階段同比上升40.60%,而下降階段同比上升1.08%,2個(gè)周期的波動(dòng)幅度相似且最值接近,說明該階段測(cè)試菌株定殖存活能力的動(dòng)態(tài)變化趨于相對(duì)穩(wěn)定狀態(tài)。

    2.2.3 第3階段 由表3、圖6可見,在65~90 d期間,隨調(diào)查時(shí)間的延長(zhǎng),接種處理的木霉相對(duì)含量呈先增后減的變化趨勢(shì),沒有明顯的周期性變化規(guī)律,且菌株的定殖存活能力已處于整體測(cè)試階段的最低水平,而未接種木霉的對(duì)照組分別于70、75 d時(shí)觀測(cè)到有少量木霉出現(xiàn),而其他調(diào)查時(shí)間均未發(fā)現(xiàn);接種處理70 d時(shí)的木霉相對(duì)含量達(dá)到本階段最大值,為1.45×105 CFU/g,較65 d時(shí)環(huán)比上升59.34%,而75 d時(shí)的木霉相對(duì)含量較 70 d 時(shí)環(huán)比下降23.45%;接種處理75 d后菌體相對(duì)含量呈近直線下降趨勢(shì),90 d時(shí)達(dá)到最低值,僅為4.00×103 CFU/g,此時(shí)若無外力干預(yù),該菌株在施用土壤中可能無法繼續(xù)存活并發(fā)揮生防作用。

    3 結(jié)論與討論

    有研究表明,生防菌的快速定殖能力是提高其對(duì)土傳病害防治效果的重要因素之一[14]。許傳坤等研究表明,木霉的萌發(fā)會(huì)受到土壤抑真菌作用的抑制[15]。賀字典等研究發(fā)現(xiàn),某些木霉在施入土壤后會(huì)歷經(jīng)一個(gè)適應(yīng)過程,一旦適應(yīng)后其定殖數(shù)量會(huì)迅速上升[16]??灯贾サ劝l(fā)現(xiàn),在施入土壤的較短時(shí)期內(nèi),木霉數(shù)量會(huì)迅速到達(dá)峰值,之后隨著時(shí)間延長(zhǎng)而逐漸呈下降趨勢(shì)[17]。本研究發(fā)現(xiàn),木霉P3.9菌株在施入土壤的最初10 d內(nèi),相對(duì)含量呈指數(shù)形增長(zhǎng),接種10 d時(shí)達(dá)到最大值,隨后開始回落,并以 10 d 為1個(gè)周期呈“增減增減”變化趨勢(shì),且增減幅度相對(duì)較大,而自接種處理25 d開始,呈以20 d為周期的“增減增減”變化趨勢(shì),增減幅度減小,說明木霉P3.9菌株在歷經(jīng)較短適應(yīng)期后快速定殖于施用土壤中。

    古麗君等研究發(fā)現(xiàn),深綠木霉接種于土壤后,前期存在大量孢子,隨著調(diào)查時(shí)間的延長(zhǎng),孢子數(shù)量呈先逐漸下降、再略有上升、后保持相對(duì)穩(wěn)定的變化趨勢(shì),穩(wěn)定時(shí)木霉在土壤中的相對(duì)含量為 104 CFU/g[9]。徐瑞富等研究發(fā)現(xiàn),木霉在未滅菌耕作層、亞表層中的定殖變化趨勢(shì)呈先增后減、波浪狀生長(zhǎng)曲線[18]。Orr等研究表明,將1株木霉菌株存放在持續(xù)保濕的環(huán)境中,3 d后菌落數(shù)量變化與時(shí)間的增加呈正相關(guān)關(guān)系,保存時(shí)間延長(zhǎng)到5 d后,隨保存環(huán)境的改變,菌株含量呈下降趨勢(shì)[19]。本研究結(jié)果表明,內(nèi)生木霉P3.9菌株接種處理75 d時(shí)的相對(duì)含量雖較接入時(shí)的初始菌量下降近1個(gè)數(shù)量級(jí),但土壤中該菌體相對(duì)含量仍能穩(wěn)定在 105 CFU/g,說明木霉P3.9菌株相對(duì)含量相對(duì)穩(wěn)定,持續(xù)期約為75 d,優(yōu)于古麗君等研究報(bào)道的菌株[9,20],這可為其進(jìn)一步開發(fā)利用提供一定的理論依據(jù)。

    參考文獻(xiàn):

    [1]潘 瑋,穆常青,蔣細(xì)良,等. 木霉的孢子與土壤抑菌作用[J]. 中國(guó)生物防治,2006,22(2):87-91.

    [2]于 新,田淑慧,徐文興,等. 木霉菌生防作用的生化機(jī)制研究進(jìn)展[J]. 中山大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版),2005,44(2):86-90.

    [3]徐 文,黃媛媛,黃亞麗,等. 木霉-植物互作機(jī)制的研究進(jìn)展[J]. 中國(guó)生物防治學(xué)報(bào),2017,33(3):408-414.

    [4]辛 鑫. 綠色木霉H6-L4在土壤中定殖能力及對(duì)香蕉枯萎病原菌的抑制作用[D]. 海口:海南大學(xué),2013.

    [5]楊力凡. 深綠木霉Trichoderma atroviride生物菌肥的研制及對(duì)油菜菌核病、根腫病的生物防治[D]. 雅安:四川農(nóng)業(yè)大學(xué),2010.

    [6]Weller D M. Biological control of soilborne plant pathogens in the rhizosphere with bacteria[J]. Annual Review of Phytopathology,1988,26(1):379-407.

    [7]杜嬋娟,付 崗,潘連富,等. 哈茨木霉gz-2菌株在土壤中的定殖規(guī)律研究[J]. 西南農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào),2016,29(1):138-142.

    [8]肖榮鳳,劉 波,史 懷,等. 生防菌哈茨木霉FJAT-9040的GFP標(biāo)記及土壤定殖示蹤[J]. 植物保護(hù)學(xué)報(bào),2011,38(6):506-512. [HJ2.05mm]

    [9]古麗君,徐秉良,梁巧蘭,等. 生防木霉對(duì)草坪土壤微生物區(qū)系的影響及定殖能力研究[J]. 草業(yè)學(xué)報(bào),2013,22(3):321-326.

    [10]魯海菊,張建春,杞敬香,等. 枇杷內(nèi)生木霉P3.9菌株抗菌譜研究[J]. 北方園藝,2014(24):103-107.

    [11]魯海菊,張曉永,江 濤,等. 抗枇杷根腐病病菌的枇杷內(nèi)生木霉P3.9菌株生物學(xué)特性[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué),2018,46(2):53-57.

    [12]魯海菊,王 波,潘柳君,等. 深綠木霉P3.9生防菌株固體發(fā)酵條件優(yōu)化篩選[J]. 北方園藝,2014(14):119-123.

    [13]魯海菊,沈云玫,陶宏征,等. 內(nèi)生木霉P3.9菌株的多功能性及其枇杷根腐病的盆栽防效[J]. 西北農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào),2017,26(11):1681-1688.

    [14]賀字典,吳素霞,宋曉飛,等. 生防菌與茄病鐮刀菌在黃瓜根際動(dòng)態(tài)變化[J]. 中國(guó)生物防治學(xué)報(bào),2016,32(3):357-364.

    [15]許傳坤,莫明和,張克勤. 土壤對(duì)木霉生防菌株的抑制作用及這種作用的解除[J]. 南京師大學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版),2004,27(2):77-80.

    [16]賀字典,宋士清,高玉峰,等. 棘孢木霉Trichoderma asperellum在土壤中定殖量的熒光定量PCR檢測(cè)[J]. 植物保護(hù)學(xué)報(bào),2016,43(4):552-558.

    [17]康萍芝,張麗榮,沈瑞清,等. 哈茨木霉制劑對(duì)設(shè)施連作番茄根際土壤微生物的生態(tài)效應(yīng)及防病作用[J]. 農(nóng)藥,2013,52(2):128-131.

    [18]徐瑞富,陸寧海,張定法,等. 土壤不同微生物量對(duì)木霉菌定殖的影響和木霉菌生態(tài)學(xué)習(xí)性研究[J]. 中國(guó)生態(tài)農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào),2007,15(1):207-208.

    [19]Orr K A,Knudsen G R. Use of green fluorescent protein and image analysis to quantify proliferation of Trichoderma harzianum in nonsterile soil[J]. Phytopathology,2004,94(12):1383-1389.

    [20]魯海菊,劉云龍. 哈茨木霉強(qiáng)根際定殖能力菌株的篩選[J]. 中國(guó)生物防治,2008,24(2):138-142.

    收 稿日期:2019-02-15

    基金項(xiàng)目:國(guó)家自然科學(xué)基金(編號(hào):31660147);云南省應(yīng)用基礎(chǔ)研究計(jì)劃(編號(hào):2016FB066);紅河學(xué)院應(yīng)用型科學(xué)研究重點(diǎn)項(xiàng)目(編號(hào):XJY15Z06)。

    作者簡(jiǎn)介:魯海菊(1978—),女,云南大理人,博士,教授,從事植物病理學(xué)研究。E-mail:luhaiju2011@126.com。

    猜你喜歡
    根際土壤生防菌枇杷
    枇杷
    新型生防菌組合防治煙草青枯病田間藥效評(píng)價(jià)
    枇杷
    枇杷
    夏月枇杷黃
    馬纓丹入侵對(duì)根際和非根際土壤理化性質(zhì)的影響
    玉米莖腐病生防菌的篩選鑒定及最佳培養(yǎng)條件研究
    華重樓根際土芽胞桿菌多樣性研究
    生防菌XM—10對(duì)黃瓜枯萎病菌的拮抗機(jī)理
    利用響應(yīng)面法優(yōu)化全蝕病生防菌YB—81的發(fā)酵條件
    老司机影院成人| 91在线精品国自产拍蜜月| 国产av国产精品国产| av卡一久久| 日韩免费高清中文字幕av| 国产精品久久久久久精品电影小说| 麻豆乱淫一区二区| 国产成人精品一,二区| xxxhd国产人妻xxx| 2021少妇久久久久久久久久久| 如何舔出高潮| 亚洲性久久影院| 高清黄色对白视频在线免费看| 色婷婷av一区二区三区视频| 毛片一级片免费看久久久久| 欧美精品一区二区大全| 日韩制服骚丝袜av| 亚洲精品av麻豆狂野| 久久久精品区二区三区| 18禁国产床啪视频网站| 日韩av在线免费看完整版不卡| 日韩中文字幕视频在线看片| 最后的刺客免费高清国语| 中文字幕免费在线视频6| 高清视频免费观看一区二区| 亚洲精品视频女| 久久久国产一区二区| 国产精品久久久久成人av| 老熟女久久久| 成人亚洲精品一区在线观看| 又大又黄又爽视频免费| 亚洲 欧美一区二区三区| 99热这里只有是精品在线观看| 人妻 亚洲 视频| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 精品一区二区免费观看| 热re99久久国产66热| 晚上一个人看的免费电影| 伦精品一区二区三区| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 91久久精品国产一区二区三区| 亚洲国产精品成人久久小说| 午夜影院在线不卡| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 久久久久久伊人网av| 男男h啪啪无遮挡| 久久久久久久大尺度免费视频| 欧美+日韩+精品| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 男女高潮啪啪啪动态图| 一级黄片播放器| 欧美变态另类bdsm刘玥| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 亚洲内射少妇av| 在线 av 中文字幕| 免费人成在线观看视频色| 在线看a的网站| 日韩中文字幕视频在线看片| 曰老女人黄片| 午夜视频国产福利| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 午夜久久久在线观看| 久久久久久久久久人人人人人人| 少妇人妻久久综合中文| 一区二区三区乱码不卡18| 国产乱人偷精品视频| 久久精品人人爽人人爽视色| 国产国语露脸激情在线看| av在线播放精品| 999精品在线视频| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 欧美日韩视频精品一区| 亚洲色图综合在线观看| 欧美成人午夜免费资源| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 黑人高潮一二区| 亚洲精品国产av成人精品| 久久久久久久亚洲中文字幕| 寂寞人妻少妇视频99o| 精品午夜福利在线看| 2021少妇久久久久久久久久久| 夜夜爽夜夜爽视频| 一级片免费观看大全| 国国产精品蜜臀av免费| 一级黄片播放器| 精品视频人人做人人爽| 在线精品无人区一区二区三| 看非洲黑人一级黄片| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 亚洲精品av麻豆狂野| 亚洲图色成人| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线| av又黄又爽大尺度在线免费看| 99久国产av精品国产电影| 日本欧美视频一区| 22中文网久久字幕| 久久久久人妻精品一区果冻| 国产精品久久久久久精品古装| 国产成人一区二区在线| 少妇被粗大猛烈的视频| videossex国产| 丁香六月天网| 国产免费福利视频在线观看| 国产在视频线精品| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 天堂中文最新版在线下载| 国产精品人妻久久久影院| 国内精品宾馆在线| 午夜视频国产福利| 黄片无遮挡物在线观看| 99久久综合免费| videos熟女内射| 永久网站在线| 一级毛片电影观看| 国产乱来视频区| 久久av网站| 国产精品国产三级专区第一集| 丰满乱子伦码专区| 天堂俺去俺来也www色官网| 欧美激情 高清一区二区三区| 日本午夜av视频| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 亚洲av在线观看美女高潮| 精品国产露脸久久av麻豆| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 亚洲国产精品成人久久小说| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 久久这里只有精品19| 一本久久精品| 蜜桃在线观看..| 欧美日韩视频精品一区| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| av在线老鸭窝| 午夜免费鲁丝| 性色av一级| 免费大片黄手机在线观看| 精品国产一区二区久久| 欧美另类一区| 我要看黄色一级片免费的| 一区二区av电影网| 少妇高潮的动态图| 日韩av在线免费看完整版不卡| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 午夜免费鲁丝| 国产亚洲一区二区精品| 欧美精品高潮呻吟av久久| 日日撸夜夜添| 91精品国产国语对白视频| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 亚洲人成77777在线视频| 亚洲av国产av综合av卡| av又黄又爽大尺度在线免费看| 日日爽夜夜爽网站| 久久精品夜色国产| 啦啦啦啦在线视频资源| 人妻 亚洲 视频| 免费观看在线日韩| 日韩制服骚丝袜av| 一二三四中文在线观看免费高清| 国产精品一二三区在线看| 赤兔流量卡办理| 最近最新中文字幕大全免费视频 | 国产一区二区在线观看日韩| 中文字幕最新亚洲高清| av国产久精品久网站免费入址| 久久久久久久亚洲中文字幕| 国产精品偷伦视频观看了| 国产1区2区3区精品| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 久久99精品国语久久久| 成人无遮挡网站| 精品一品国产午夜福利视频| 99香蕉大伊视频| 国产精品久久久久久av不卡| 成人午夜精彩视频在线观看| 国产极品粉嫩免费观看在线| 午夜激情av网站| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 亚洲伊人久久精品综合| 麻豆乱淫一区二区| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 搡老乐熟女国产| 亚洲精品国产av蜜桃| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 激情五月婷婷亚洲| 国产深夜福利视频在线观看| 男女边摸边吃奶| av在线播放精品| 成人综合一区亚洲| 男人操女人黄网站| 在线 av 中文字幕| 久久久久国产网址| 国产亚洲欧美精品永久| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 成人毛片60女人毛片免费| 午夜免费鲁丝| 男人添女人高潮全过程视频| 免费播放大片免费观看视频在线观看| 丝袜脚勾引网站| 久久久久精品人妻al黑| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 在线观看www视频免费| 大陆偷拍与自拍| 国产片内射在线| 九九爱精品视频在线观看| 国产成人精品无人区| 一区二区三区四区激情视频| 精品视频人人做人人爽| 精品一区二区免费观看| 另类精品久久| 亚洲av欧美aⅴ国产| 日本爱情动作片www.在线观看| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 黄片无遮挡物在线观看| 下体分泌物呈黄色| 成人亚洲精品一区在线观看| 亚洲情色 制服丝袜| 国产日韩欧美亚洲二区| 一级片免费观看大全| 大片免费播放器 马上看| 精品视频人人做人人爽| av片东京热男人的天堂| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 男的添女的下面高潮视频| 国产精品久久久久久av不卡| 色5月婷婷丁香| 99热网站在线观看| 超碰97精品在线观看| 免费观看av网站的网址| 最近中文字幕高清免费大全6| 午夜影院在线不卡| 一区二区av电影网| 亚洲精品中文字幕在线视频| 中文天堂在线官网| 亚洲精品国产av成人精品| 91精品三级在线观看| 精品午夜福利在线看| 在线亚洲精品国产二区图片欧美| 1024视频免费在线观看| 一本大道久久a久久精品| 一本一本久久a久久精品综合妖精 国产伦在线观看视频一区 | 草草在线视频免费看| 国产精品一区www在线观看| 女人久久www免费人成看片| 国产视频首页在线观看| 亚洲第一av免费看| 日本wwww免费看| 韩国av在线不卡| 亚洲欧美精品自产自拍| 午夜福利视频精品| 深夜精品福利| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久 | 亚洲熟女精品中文字幕| 亚洲欧美一区二区三区国产| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 久久精品国产亚洲av天美| 男女啪啪激烈高潮av片| 久久国内精品自在自线图片| 女人久久www免费人成看片| 制服人妻中文乱码| 精品国产一区二区三区四区第35| 亚洲av.av天堂| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 婷婷色综合www| 精品酒店卫生间| 久久久精品94久久精品| 亚洲第一av免费看| 少妇人妻久久综合中文| 18禁观看日本| 国产精品成人在线| 久久人人爽人人片av| 中文字幕人妻丝袜制服| 卡戴珊不雅视频在线播放| 欧美激情 高清一区二区三区| 亚洲综合色网址| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 一级,二级,三级黄色视频| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 国产毛片在线视频| 在线观看三级黄色| 高清在线视频一区二区三区| 国产熟女午夜一区二区三区| 少妇人妻精品综合一区二区| 成人毛片a级毛片在线播放| 美女内射精品一级片tv| 欧美日本中文国产一区发布| 一级毛片电影观看| 久久精品aⅴ一区二区三区四区 | 搡老乐熟女国产| 男女无遮挡免费网站观看| 亚洲国产av新网站| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 日本与韩国留学比较| 成年人午夜在线观看视频| 黄色配什么色好看| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 久久婷婷青草| 国产亚洲欧美精品永久| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 国产熟女午夜一区二区三区| 国产精品久久久久久精品古装| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 一二三四在线观看免费中文在 | 国产免费视频播放在线视频| 黄色一级大片看看| 欧美另类一区| 日韩精品免费视频一区二区三区 | 男人舔女人的私密视频| 一区在线观看完整版| 免费黄色在线免费观看| 午夜日本视频在线| 亚洲欧美一区二区三区国产| 国产精品 国内视频| 国产精品嫩草影院av在线观看| 国产精品一区二区在线观看99| 观看美女的网站| 久久亚洲国产成人精品v| 久久久国产一区二区| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 成人国产麻豆网| 亚洲成人一二三区av| 男女边摸边吃奶| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| av网站免费在线观看视频| 又黄又粗又硬又大视频| 国产熟女欧美一区二区| 午夜91福利影院| 亚洲中文av在线| 视频中文字幕在线观看| 高清视频免费观看一区二区| 午夜免费鲁丝| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 人人澡人人妻人| 另类亚洲欧美激情| 青春草亚洲视频在线观看| 在线观看免费视频网站a站| 亚洲精品乱久久久久久| 丝袜喷水一区| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 中文字幕制服av| 69精品国产乱码久久久| 如何舔出高潮| 视频区图区小说| 蜜桃国产av成人99| 中文字幕人妻熟女乱码| 亚洲美女搞黄在线观看| 99热网站在线观看| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| av免费在线看不卡| 在线观看人妻少妇| 亚洲精品乱久久久久久| 青春草视频在线免费观看| 亚洲精品乱久久久久久| 欧美成人精品欧美一级黄| 在线看a的网站| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 只有这里有精品99| 色视频在线一区二区三区| 丁香六月天网| 久久免费观看电影| 一本大道久久a久久精品| 亚洲精华国产精华液的使用体验| av免费在线看不卡| 欧美成人精品欧美一级黄| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 日韩成人伦理影院| 免费播放大片免费观看视频在线观看| 精品少妇内射三级| 在线观看免费视频网站a站| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕 | 精品国产国语对白av| 国产淫语在线视频| 只有这里有精品99| 日韩免费高清中文字幕av| 欧美激情国产日韩精品一区| 国产成人精品婷婷| 日韩制服丝袜自拍偷拍| 久久99精品国语久久久| 99久国产av精品国产电影| 亚洲精品美女久久av网站| 午夜久久久在线观看| 亚洲精品一区蜜桃| 亚洲精品视频女| 亚洲综合精品二区| 国产探花极品一区二区| 大码成人一级视频| 飞空精品影院首页| 男女下面插进去视频免费观看 | 国产男女超爽视频在线观看| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 三上悠亚av全集在线观看| 欧美日韩综合久久久久久| 视频中文字幕在线观看| 久久国产精品男人的天堂亚洲 | 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 蜜臀久久99精品久久宅男| 一本久久精品| 九草在线视频观看| 国产男人的电影天堂91| 一级黄片播放器| 久久人妻熟女aⅴ| 免费观看无遮挡的男女| 香蕉精品网在线| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 一区二区三区乱码不卡18| 欧美激情国产日韩精品一区| 精品午夜福利在线看| 中文字幕制服av| 午夜日本视频在线| av不卡在线播放| 亚洲成人av在线免费| 精品第一国产精品| 国产日韩欧美在线精品| 26uuu在线亚洲综合色| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 9色porny在线观看| 在线观看免费视频网站a站| 亚洲av.av天堂| 亚洲国产成人一精品久久久| 国产精品国产三级专区第一集| 在线 av 中文字幕| 免费高清在线观看日韩| 观看美女的网站| 久久久欧美国产精品| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 久久精品国产a三级三级三级| 亚洲天堂av无毛| 国产 精品1| 看免费成人av毛片| 夫妻午夜视频| 亚洲国产精品国产精品| 国产精品国产三级专区第一集| 春色校园在线视频观看| 国产成人精品福利久久| 天堂8中文在线网| 久久这里有精品视频免费| 日韩中文字幕视频在线看片| 新久久久久国产一级毛片| 日韩中字成人| 免费看av在线观看网站| 蜜臀久久99精品久久宅男| 久久精品夜色国产| 在线看a的网站| 丰满乱子伦码专区| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 一区二区三区精品91| 九色亚洲精品在线播放| 亚洲av日韩在线播放| 日韩免费高清中文字幕av| 99精国产麻豆久久婷婷| 好男人视频免费观看在线| 女性生殖器流出的白浆| 日本av手机在线免费观看| 深夜精品福利| 黄片播放在线免费| 人妻一区二区av| 久久久久人妻精品一区果冻| h视频一区二区三区| 日韩av免费高清视频| 国产成人精品一,二区| 亚洲美女视频黄频| 性色avwww在线观看| 秋霞伦理黄片| 69精品国产乱码久久久| 国产成人aa在线观看| 22中文网久久字幕| 少妇 在线观看| 免费观看无遮挡的男女| 亚洲欧美色中文字幕在线| 精品久久久久久电影网| 中文字幕亚洲精品专区| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 18禁观看日本| 亚洲av成人精品一二三区| 三上悠亚av全集在线观看| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 香蕉精品网在线| 熟女电影av网| 午夜老司机福利剧场| 国产精品一区二区在线观看99| 亚洲色图综合在线观看| 久久久久久久久久成人| 在线观看美女被高潮喷水网站| 宅男免费午夜| 久久午夜综合久久蜜桃| kizo精华| 日本爱情动作片www.在线观看| 91精品三级在线观看| 天堂8中文在线网| 黄色配什么色好看| 在线观看免费高清a一片| 亚洲国产日韩一区二区| 国产精品欧美亚洲77777| 一区二区日韩欧美中文字幕 | 一级毛片电影观看| 赤兔流量卡办理| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 亚洲,欧美精品.| 精品少妇久久久久久888优播| 一本一本久久a久久精品综合妖精 国产伦在线观看视频一区 | 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 国产片特级美女逼逼视频| 制服丝袜香蕉在线| 99久久综合免费| 女性生殖器流出的白浆| 亚洲 欧美一区二区三区| 亚洲,欧美精品.| 男女高潮啪啪啪动态图| 免费人成在线观看视频色| 高清av免费在线| 青春草视频在线免费观看| 制服人妻中文乱码| 色网站视频免费| 一级黄片播放器| 最黄视频免费看| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 搡女人真爽免费视频火全软件| 日韩免费高清中文字幕av| 三上悠亚av全集在线观看| 婷婷色综合大香蕉| 久久久久久人妻| 国产熟女午夜一区二区三区| 欧美丝袜亚洲另类| 成人手机av| 亚洲精品456在线播放app| 26uuu在线亚洲综合色| 久久久国产欧美日韩av| √禁漫天堂资源中文www| 国产成人一区二区在线| 久久久久久久精品精品| 亚洲成av片中文字幕在线观看 | 国产av精品麻豆| 国产成人a∨麻豆精品| 亚洲av日韩在线播放| 久热久热在线精品观看| 2018国产大陆天天弄谢| 久久久久久久久久久免费av| 久久久久国产精品人妻一区二区| 亚洲av成人精品一二三区| 赤兔流量卡办理| videossex国产| 久久99精品国语久久久| 亚洲欧美色中文字幕在线| 亚洲精品久久午夜乱码| 国产男女超爽视频在线观看| 日本欧美国产在线视频| 精品福利永久在线观看| 男人舔女人的私密视频| av一本久久久久| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀 | 黑丝袜美女国产一区| 欧美xxxx性猛交bbbb| 亚洲国产精品专区欧美| 国产精品国产av在线观看| 嫩草影院入口| 亚洲av国产av综合av卡| 免费黄频网站在线观看国产| 欧美性感艳星| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 欧美亚洲日本最大视频资源| 高清av免费在线| 亚洲经典国产精华液单| 国产乱来视频区| 亚洲精品色激情综合| 看免费成人av毛片| 亚洲欧美一区二区三区国产| 亚洲av男天堂| 高清视频免费观看一区二区| 国产老妇伦熟女老妇高清| 日韩精品有码人妻一区| 国产av一区二区精品久久| 日韩欧美精品免费久久| 在线观看免费日韩欧美大片| 国产高清三级在线| 精品少妇久久久久久888优播| 精品福利永久在线观看| 日日啪夜夜爽| 国产精品三级大全| 亚洲成av片中文字幕在线观看 | 国产爽快片一区二区三区| 这个男人来自地球电影免费观看 | av免费在线看不卡| 成年女人在线观看亚洲视频| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 黄色配什么色好看| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 亚洲成人av在线免费| 精品卡一卡二卡四卡免费| 国产永久视频网站| 51国产日韩欧美| 国产精品偷伦视频观看了| 中文字幕亚洲精品专区| 99久久中文字幕三级久久日本| 亚洲av在线观看美女高潮| 十分钟在线观看高清视频www| 久久久国产欧美日韩av| 啦啦啦在线观看免费高清www| 看十八女毛片水多多多| 国产亚洲一区二区精品| 免费久久久久久久精品成人欧美视频 | 男女边摸边吃奶| 少妇精品久久久久久久| 国产免费视频播放在线视频| 免费人妻精品一区二区三区视频| 午夜影院在线不卡| 丝袜美足系列| 日本与韩国留学比较| 精品一品国产午夜福利视频| 最后的刺客免费高清国语| 国产熟女午夜一区二区三区| 国产成人午夜福利电影在线观看| 最近手机中文字幕大全|